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IMSA技术快速检测肠出血大肠杆菌O157:H7方法的建立及应用
被引量：
10
1
作者
王琪
徐文娟
石盼盼
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第17期263-269,共7页
为了建立和评价一种适合食药监及基层检验部门使用的肠出血性大肠杆菌O157:H7快速检测方法,针对肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性rfbE基因,应用等温多自配引发扩增技术(Isothermal Multiple Self-matching-initiated Amplification,IMSA)...
为了建立和评价一种适合食药监及基层检验部门使用的肠出血性大肠杆菌O157:H7快速检测方法,针对肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性rfbE基因,应用等温多自配引发扩增技术(Isothermal Multiple Self-matching-initiated Amplification,IMSA),设计引物进行检测。对建立的方法进行特异性试验和灵敏度试验,与荧光定量PCR法进行比对;利用建立的IMSA法确定人工污染样本被检出的最短增菌时间和最低检测灵敏度;使用IMSA法和国标法对24份不同肉制品进行检验,评估两者的一致性。结果表明:该方法仅对肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性扩增;IMSA法的灵敏度比qPCR法高,达8.9×10^(2) CFU/mL;人工污染菌种样本最短增菌10 h可以被建立的IMSA法检出,检出限为9.1 CFU/25 g;24份肉制品样本的IMSA法与常规培养法结果一致性为100%。结论:IMSA技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7具有特异性强、灵敏度高、结果快速准确的特点,可在11 h内完成食品中O157:H7的检出,适用于食药监及基层检验部门进行肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测。
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关键词
肠出血大肠杆菌
O157∶H7
等温多自配引发扩增技术(
imsa
)
rfbE基因
快速检测
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职称材料
负压驱动皮升级等温核酸精确定量微流控芯片
被引量：
2
2
作者
吴文帅
丁雄
牟颖
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期351-356,共6页
精准医疗急需更加精确、灵敏、方便快捷的核酸定量方法。设计开发了一种结合双荧光等温扩增的高密度皮升级核酸定量微流控芯片。芯片采用多层软光刻技术制成,有3个反应通道,每通道有40 000个反应小室,共120 576个皮升级反应小室,反应小...
精准医疗急需更加精确、灵敏、方便快捷的核酸定量方法。设计开发了一种结合双荧光等温扩增的高密度皮升级核酸定量微流控芯片。芯片采用多层软光刻技术制成,有3个反应通道,每通道有40 000个反应小室,共120 576个皮升级反应小室,反应小室的密度达7 000/cm^2。芯片利用负压驱动样品精确分配,热凝固油相封闭小室,无需阀门及其他仪器辅助。芯片中嵌入的氟硅烷纳米涂层能有效地阻止反应过程中水蒸气的散失。以乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)质粒作为模板,进行等温多底物自配引发扩增(isothermal multiple self-matchinginitiated amplification,IMSA),测试芯片定量性能。芯片检测模板的动态范围达6个数量级,可检测的最大模板量为36μL中1.13×10~6拷贝数核酸。该装置具有定量精确、灵敏、快捷、操作简单等优势,可用于精准检测。
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关键词
微流控芯片
负压驱动
等温多底物自配引发扩增
高密度
精确定量
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职称材料
人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的检测方法
被引量：
5
3
作者
崔玉伟
牟颖
+4 位作者
马莉
丁雄
方宗宇
王焰
吴青青
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1017-1023,共7页
应用等温多自配引发扩增(IMSA)技术,分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物,并在检测体系中加入羟基萘酚蓝(HNB)和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂,建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法.结果表明...
应用等温多自配引发扩增(IMSA)技术,分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物,并在检测体系中加入羟基萘酚蓝(HNB)和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂,建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法.结果表明:340μmol/L HNB与1∶10 000SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果,455nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色,阴性反应管双荧光显色为橘红色;该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL,可特异性检出样品中HPV16和HPV52,与临床检测结果比对无差异.
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关键词
人乳头瘤病毒16型
人乳头瘤病毒52型
等温多自配引发扩增
双荧光
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职称材料
题名
IMSA技术快速检测肠出血大肠杆菌O157:H7方法的建立及应用
被引量：
10
1
作者
王琪
徐文娟
石盼盼
机构
郑州市食品药品检验所
郑州大学基础医学院
出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第17期263-269,共7页
文摘
为了建立和评价一种适合食药监及基层检验部门使用的肠出血性大肠杆菌O157:H7快速检测方法,针对肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性rfbE基因,应用等温多自配引发扩增技术(Isothermal Multiple Self-matching-initiated Amplification,IMSA),设计引物进行检测。对建立的方法进行特异性试验和灵敏度试验,与荧光定量PCR法进行比对;利用建立的IMSA法确定人工污染样本被检出的最短增菌时间和最低检测灵敏度;使用IMSA法和国标法对24份不同肉制品进行检验,评估两者的一致性。结果表明:该方法仅对肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性扩增;IMSA法的灵敏度比qPCR法高,达8.9×10^(2) CFU/mL;人工污染菌种样本最短增菌10 h可以被建立的IMSA法检出,检出限为9.1 CFU/25 g;24份肉制品样本的IMSA法与常规培养法结果一致性为100%。结论:IMSA技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7具有特异性强、灵敏度高、结果快速准确的特点,可在11 h内完成食品中O157:H7的检出,适用于食药监及基层检验部门进行肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测。
关键词
肠出血大肠杆菌
O157∶H7
等温多自配引发扩增技术(
imsa
)
rfbE基因
快速检测
Keywords
enterohaemorrhage Escherichia coli O157:H7
isothermal
mμLtiple self-matching-initiated
amplification
(
imsa
)
rfbE genes
rapid detection
分类号
TS201.6 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
负压驱动皮升级等温核酸精确定量微流控芯片
被引量：
2
2
作者
吴文帅
丁雄
牟颖
机构
浙江大学工业控制技术国家重点实验室
浙江大学生命科学学院
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期351-356,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31270907)
工业控制技术国家重点实验室自主研究项目(ICT1601)~~
文摘
精准医疗急需更加精确、灵敏、方便快捷的核酸定量方法。设计开发了一种结合双荧光等温扩增的高密度皮升级核酸定量微流控芯片。芯片采用多层软光刻技术制成,有3个反应通道,每通道有40 000个反应小室,共120 576个皮升级反应小室,反应小室的密度达7 000/cm^2。芯片利用负压驱动样品精确分配,热凝固油相封闭小室,无需阀门及其他仪器辅助。芯片中嵌入的氟硅烷纳米涂层能有效地阻止反应过程中水蒸气的散失。以乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)质粒作为模板,进行等温多底物自配引发扩增(isothermal multiple self-matchinginitiated amplification,IMSA),测试芯片定量性能。芯片检测模板的动态范围达6个数量级,可检测的最大模板量为36μL中1.13×10~6拷贝数核酸。该装置具有定量精确、灵敏、快捷、操作简单等优势,可用于精准检测。
关键词
微流控芯片
负压驱动
等温多底物自配引发扩增
高密度
精确定量
Keywords
microf^uidic chip
driven by negative pressure
isothermal
multiple self-matching- initiated
amplification
（imsa
）
high-density
accurate quantification
分类号
O658 [理学—分析化学]
在线阅读
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职称材料
题名
人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的检测方法
被引量：
5
3
作者
崔玉伟
牟颖
马莉
丁雄
方宗宇
王焰
吴青青
机构
贵州医科大学附属医院中心实验室
浙江大学工业控制技术国家重点实验室
出处
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1017-1023,共7页
基金
国家自然科学基金(批准号：31460236)
浙江大学工业控制技术国家重点实验室开放课题项目(批准号：ICT180293)
文摘
应用等温多自配引发扩增(IMSA)技术,分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物,并在检测体系中加入羟基萘酚蓝(HNB)和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂,建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法.结果表明:340μmol/L HNB与1∶10 000SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果,455nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色,阴性反应管双荧光显色为橘红色;该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL,可特异性检出样品中HPV16和HPV52,与临床检测结果比对无差异.
关键词
人乳头瘤病毒16型
人乳头瘤病毒52型
等温多自配引发扩增
双荧光
Keywords
human papillomavirus 16 （ HPV16 ）
human papillomavirus 52 （ HPV52）
isothermal multiple-self-matching-initiated amplification （imsa）
dual fluorescence
分类号
Q31 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IMSA技术快速检测肠出血大肠杆菌O157:H7方法的建立及应用
王琪
徐文娟
石盼盼
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
负压驱动皮升级等温核酸精确定量微流控芯片
吴文帅
丁雄
牟颖
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的检测方法
崔玉伟
牟颖
马莉
丁雄
方宗宇
王焰
吴青青
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
5
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职称材料
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