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马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 Ⅱ 免疫亲合色谱—酶联免疫吸附法(IAC—ELISA) 被引量：5
1
作者 沈建忠 钱传范 +1 位作者 江海洋 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期548-553,共6页
本文首次报道ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ方法测定鸡组织中马杜霉素的残留。制备针对马杜霉素的特异性抗体ＩｇＧ和高容量ＩＡＣ柱（Ｉ柱动态柱容量为７ １６０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ，Ⅱ柱为３ ７５０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ） 。组织... 本文首次报道ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ方法测定鸡组织中马杜霉素的残留。制备针对马杜霉素的特异性抗体ＩｇＧ和高容量ＩＡＣ柱（Ｉ柱动态柱容量为７ １６０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ，Ⅱ柱为３ ７５０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ） 。组织样品用甲醇提取，经ＩＡＣ柱分离纯化，ＥＬＩＳＡ检测，即ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ 方法。本试验揭示，以组织样本提取纯化稀释液为介质制备的标准曲线（Ｉ５０ 为３３３ ～３７１ｎｇ·ｍｌ－ １ ，斜率为１９５ ～２２０ ，检测极限为１０ ～２８ｎｇ·ｇ－ １） ，其Ｉ５０ 值和斜率与以ＰＢＳＴ－ １０ ％ 甲醇为介质的标准曲线相符，实际ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ检测时，各组织的标准曲线可用后者代替，使操作大为简化、实用。各组织添加马杜霉素３００ ～１２０ ．０μｇ·ｋｇ － １ 水平下，测得样本回收率为７６４ ％ ～１０９ ．０ ％ ，变异系数为３８ ％ ～１６ ．４ ％ 。结果证明了该方法的可靠性。本文建立的ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ法是目前国内外唯一报道的最简便、灵敏的马杜霉素残留检测方法。 展开更多
关键词 马杜霉素 免疫亲合色谱 ELISA 肉鸡 残留分析
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免疫亲和色谱-气相色谱/质谱法(IAC-GC/MS)检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗 被引量：20
2
作者 王建平 史为民 沈建忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期271-275,共5页
制备出抗沙丁胺醇的抗血清,提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱,针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量分别为400 ng/mL基质和416 ng/mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取,经免疫亲和色谱柱纯化,再用GC/MS检测,即为IAC-GC/MS法。对沙丁胺醇... 制备出抗沙丁胺醇的抗血清,提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱,针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量分别为400 ng/mL基质和416 ng/mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取,经免疫亲和色谱柱纯化,再用GC/MS检测,即为IAC-GC/MS法。对沙丁胺醇的检测限为0.5 ng/g,定量限为2 ng/g,对克伦特罗的检测限为0.8ng/g,定量限为2.5 ng/g。空白组织按照1、5、10、20 ng/g的浓度添加药物,沙丁胺醇在空白肝中的添加回收率为78.4%-106.9%,克伦特罗的添加回收率为77.1%-102.9%。本研究建立的检测猪肝中沙丁胺醇与克伦特罗的IAC-GC/MS法乃国内首次报道。 展开更多
关键词 沙丁胺醇 克伦特罗 免疫亲和色谱 GC/MS 猪肝
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免疫亲和层析技术协同酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A 被引量：5
3
作者 张蕴哲 张先舟 +1 位作者 袁耀武 张伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第10期257-264,共8页
利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA... 利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA单克隆抗体来自不同的克隆株,分属不同独特型,与OTA结合靶点的选择性存在差异,IAC与ELISA协同检测,可以有效过滤OTA结构类似物造成的干扰,提高免疫分析的特异性与灵敏度。该方法用于加标样品测定时,OTA的检出限为0.2 ng/g,定量限为0.4 ng/g,OTA的平均回收率为75.9%,与单一的ELISA法相比,该方法虽然回收率略低,但灵敏度可以显著提高,达到ELISA法的60倍。通过对49份样品的实际检测,该方法检出阳性样品与国标法的符合率达到100%,漏检率为0%,由此可见,该方法在准确性上表现出明显的优势。作为一种综合免疫分析技术,该方法不需要大型仪器设备,对操作环境没有严格要求,便于基层实验室对样品中OTA的分析。 展开更多
关键词 免疫亲和层析技术 酶联免疫吸附法 检测 赭曲霉毒素A
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粮食中呕吐毒素含量的免疫亲和柱净化超高效液相色谱法快速测定 被引量：19
4
作者 谢刚 王松雪 张艳 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1362-1366,共5页
建立了免疫亲和柱净化/超高效液相色谱法快速测定粮食中呕吐毒素(DON)的检测方法。样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩,Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱分离,以甲醇-水(10∶90)为流动相,流速为0.1 m... 建立了免疫亲和柱净化/超高效液相色谱法快速测定粮食中呕吐毒素(DON)的检测方法。样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩,Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱分离,以甲醇-水(10∶90)为流动相,流速为0.1 mL/min,进样量1μL,用Acquity紫外检测器在220 nm处进行检测,保留体积不足0.5 mL,整个分析过程用时不足45 min。呕吐毒素在0.5～10.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.999 96;检出限(S/N=3)为0.15 ng,定量下限(S/N=10)为0.5 ng,加标回收率为84%～98%,相对标准偏差为2.9%～5.9%。该方法简便快速、灵敏度高、重现性好、溶剂用量少且环保,适用于原粮中呕吐毒素的快速测定。 展开更多
关键词 粮食 呕吐毒素 超高效液相色谱 免疫亲和柱
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免疫亲和固相萃取-超高效合相色谱-串联质谱法同时测定牛奶中6种玉米赤霉醇类化合物残留 被引量：15
5
作者 章璐幸 孙洁胤 +2 位作者 王延辉 吴惠芳 俞松林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期566-572,共7页
建立了免疫亲和固相萃取(IAC-SPE)-超高效合相色谱-串联质谱(UPC2-MS/MS)同时测定牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮和玉米赤霉酮残留的分析方法。样品用去离子水稀释,经IAC-SPE富... 建立了免疫亲和固相萃取(IAC-SPE)-超高效合相色谱-串联质谱(UPC2-MS/MS)同时测定牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮和玉米赤霉酮残留的分析方法。样品用去离子水稀释,经IAC-SPE富集净化后,采用Waters ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱(50 mm×3.0 mm,1.7μm)分离,以超临界CO_2和0.1%(v/v)甲酸甲醇溶液为流动相,经梯度洗脱后在ESI-模式下检测。经过稀释离心的牛奶样品采用免疫亲和柱净化后没有明显的基质效应,6种目标化合物在1～200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^2)≥0.995 7;6种目标化合物在3个加标水平下的平均回收率为75.9%～106.5%,日内和日间精密度均≤11.4%。该法专属性好,操作简便,有机溶剂使用量小,与已有的样品测定方法比较更绿色环保,可用于牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮的残留检测。 展开更多
关键词 超高效合相-串联质谱 固相萃取 免疫亲和柱 玉米赤霉醇类化合物 牛奶
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环丙沙星免疫亲和柱的制备及优化 被引量：4
6
作者 刘丽强 李寅 +2 位作者 彭池方 陈伟 胥传来 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第22期209-212,共4页
制备环丙沙星(Cip)抗生素的免疫亲和柱(IAC),研究优化IAC柱的鉴定和洗脱条件,并测试其最佳性能,最终洗脱液选择4ml50%的甲醇,在重复使用5次后,其柱容量仍能达到开始柱容量的25%左右,采用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-FLD)对IAC进行回收... 制备环丙沙星(Cip)抗生素的免疫亲和柱(IAC),研究优化IAC柱的鉴定和洗脱条件,并测试其最佳性能,最终洗脱液选择4ml50%的甲醇,在重复使用5次后,其柱容量仍能达到开始柱容量的25%左右,采用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-FLD)对IAC进行回收率测定,以0.05%的甲酸水溶液-甲醇体系作为流动相,梯度洗脱,HPLC-FLD方法的线性范围10～1000ng/ml,相关系数大于0.99,测定出IAC柱对环丙沙星的回收率为74.38%～105.552%。 展开更多
关键词 喹诺酮类药物 环丙沙星 免疫亲和柱
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免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱法测定贝类中腹泻性贝类毒素 被引量：5
7
作者 严忠雍 张小军 +4 位作者 李奇富 陈思 李佩佩 祝银 刘文静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第18期304-309,共6页
建立贝类中腹泻性贝类毒素的免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱分析方法。样品采用80%甲醇溶液提取,选择磷酸盐缓冲液与提取液(4∶1,V/V)混合稀释后,免疫亲和选择专一净化,液相色谱-串联质谱分析。根据腹泻性免疫亲和柱的使用特性,对上样... 建立贝类中腹泻性贝类毒素的免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱分析方法。样品采用80%甲醇溶液提取,选择磷酸盐缓冲液与提取液(4∶1,V/V)混合稀释后,免疫亲和选择专一净化,液相色谱-串联质谱分析。根据腹泻性免疫亲和柱的使用特性,对上样液、淋洗液、洗脱液等参数进行优化。质谱采用电喷雾负离子电离,多反应监测模式,外标法定量。3种分析物在1.0~100μg/L质量浓度范围内线性相关系数均大于0.996,对应的检出限和定量限均为0.3μg/kg和1.0μg/kg,平均回收率为82.7%~94.3%,相对标准偏差为0.70%~7.61%。本方法基质干扰小、净化效果强、灵敏度高,适合贝类中腹泻性贝类毒素的分析测定。 展开更多
关键词 免疫亲和 液相色谱-串联质谱 腹泻性贝类毒素
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免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时检测鸡蛋中6种玉米赤霉醇类化合物残留量 被引量：28
8
作者 游丽娜 李贤良 +5 位作者 郗存显 唐柏彬 王国民 张雷 袁中珍 赵华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1021-1025,共5页
建立了鸡蛋中6种玉米赤霉醇类化合物(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮)残留量的免疫亲和柱净化-高效液相色谱检测方法。样品酶解后用叔丁基甲醚提取、氢氧化钠反萃取,经免... 建立了鸡蛋中6种玉米赤霉醇类化合物(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮)残留量的免疫亲和柱净化-高效液相色谱检测方法。样品酶解后用叔丁基甲醚提取、氢氧化钠反萃取,经免疫亲和柱富集和净化后,采用高效液相色谱-紫外检测器进行测定。色谱柱:Agilent EclipseXDB-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相:甲醇-乙腈-水(50∶15∶35,v/v/v);流速:1.0 mL/min;检测波长:270nm。结果表明,6种目标物在0.01～0.2 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)≥0.999 8,检出限(LOD,S/N≥3)为1.0μg/kg,平均回收率为73.2%～95.7%,相对标准偏差小于8%。该方法灵敏度高、重现性好,适用于鸡蛋样品中痕量玉米赤霉醇类药物残留的测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 免疫亲和柱 玉米赤霉醇 玉米赤霉烯醇 玉米赤霉酮 玉米赤霉烯酮 鸡蛋
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免疫亲和色谱-高效液相色谱法测定土壤中氯磺隆残留 被引量：4
9
作者 冯大和 邵秀金 +1 位作者 韦林洪 刘曙照 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1663-1666,共4页
采用碳酰二咪唑(CDI)将SepharoseCL-4B活化并与纯化的抗氯磺隆抗体共价偶联,合成免疫亲和吸附剂并制备对氯磺隆具有特异性亲和力的免疫亲合色谱(IAC)柱。对IAC条件进行优化,选择0.02mol.L-1pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积... 采用碳酰二咪唑(CDI)将SepharoseCL-4B活化并与纯化的抗氯磺隆抗体共价偶联,合成免疫亲和吸附剂并制备对氯磺隆具有特异性亲和力的免疫亲合色谱(IAC)柱。对IAC条件进行优化,选择0.02mol.L-1pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积分数)甲醇水作洗脱剂。结果表明,在实验条件下,IAC柱对氯磺隆的动态柱容量达2.6!g.mL-1床体积。当标样溶液中氯磺隆含量为2.0ng.mL-1时,经IAC柱富集后浓度提高近250倍。土壤中添加氯磺隆0.10!g.g-1、5.0ng.g-1,提取液以IAC柱分离富集,洗脱液采用高效液相色谱(HPLC)法测定,5次重复实验的平均回收率分别为92.9%、94.8%,相对标准偏差分别为8.46%、8.41%。成功建立了氯磺隆IAC-HPLC分析技术并用于土壤中痕量残留氯磺隆的测定。 展开更多
关键词 免疫亲合色谱(iac) 高效液相色谱(HPLC) 土壤 氯磺隆
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免疫亲和柱-高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物 被引量：21
10
作者 姚佳 王昕 +6 位作者 张建新 李贤良 郗存显 王国民 王雄 里南 果旗 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第18期124-127,共4页
建立免疫亲和柱同时净化-高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮)残留量的方法。样品经免疫亲和柱净化与富集后,用高效液... 建立免疫亲和柱同时净化-高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮)残留量的方法。样品经免疫亲和柱净化与富集后,用高效液相色谱-紫外检测器检测。采用Cloversil-C18反相柱分离,流动相为乙腈-甲醇-水溶液,检测波长为265 nm。结果表明,牛奶中添加氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物的回收率在74%~101%,且相对标准偏差均小于7%。氯霉素的检出限为0.02 μg/L,玉米赤霉醇及其类似物的检出限分别为α-玉米赤霉醇0.03 μg/L、β-玉米赤霉醇0.03 μg/L、α-玉米赤霉烯醇0.03 μg/L、β-玉米赤霉烯醇0.03 μg/L、玉米赤霉酮0.04 μg/L和玉米赤霉烯酮0.05 μg/L。该方法灵敏度高、重复性好,提高了检测速率,可满足牛奶样品中痕量氯霉素和玉米赤霉醇及其类似物残留的测定。 展开更多
关键词 牛奶 氯霉素 玉米赤霉醇 免疫亲和柱 高效液相色谱
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利用鸡蛋特异性抗体IgY的免疫亲和色谱 被引量：5
11
作者 陈天豹 李珑 +2 位作者 徐小华 张蓉真 饶平凡 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期563-566,共4页
以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为抗原，利用偶联上ＢＳＡ的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ的亲和色谱材料从鸡蛋蛋黄中一步分离特异性抗ＢＳＡ 抗体。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、双向免疫扩散检验，所洗脱的样品为电泳纯的特异性抗体。反之，将所得... 以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为抗原，利用偶联上ＢＳＡ的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ的亲和色谱材料从鸡蛋蛋黄中一步分离特异性抗ＢＳＡ 抗体。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、双向免疫扩散检验，所洗脱的样品为电泳纯的特异性抗体。反之，将所得抗体再偶联到ＰＯＲＯＳＨＹ上可分离抗原。同时考察了母鸡免疫过程中特异性抗体随时间的变化趋势。 展开更多
关键词 鸡蛋 特异性抗体 IGY 免疫亲和色谱
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药食两用类食品中赭曲霉毒素A的高效液相色谱-荧光检测方法 被引量：10
12
作者 傅武胜 邱文倩 +3 位作者 郑奎城 吕华东 郭斌 严小波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第14期298-302,共5页
目的:采用免疫亲和净化和高效液相色谱技术,建立淀粉、糖类药食两用食品中赭曲霉毒素A的测定方法。方法:样品粉末经甲醇-水(8:2,V/V)涡旋、超声及振摇提取,提取液以磷酸盐缓冲液稀释后,用商品免疫亲和柱净化,含有赭曲霉毒素A的甲醇洗脱... 目的:采用免疫亲和净化和高效液相色谱技术,建立淀粉、糖类药食两用食品中赭曲霉毒素A的测定方法。方法:样品粉末经甲醇-水(8:2,V/V)涡旋、超声及振摇提取,提取液以磷酸盐缓冲液稀释后,用商品免疫亲和柱净化,含有赭曲霉毒素A的甲醇洗脱液用高效液相色谱技术分析,C18反相色谱柱分离,荧光检测器测定。结果:赭曲霉毒素A的最低检出浓度为1.0μg/kg(RSN=3);在0.5～100ng/mL范围内,峰面积与质量浓度呈线性关系(r=0.9995);以不含赭曲霉毒素A的太子参、莲子、薏苡、麦冬和龙眼肉为加标基质,加标水平为1～8μg/kg时,平均回收率在81.8%～107%之间,RSD为1.66%～15.0%(n=3)。结论:免疫亲和柱能和高效液相色谱-荧光检测相结合取得较为满意的结果,准确度高、精密度好,满足欧盟对食品饲料中OTA检测方法的要求,适合于淀粉、糖类药食两用食品中赭曲霉毒素A的测定。 展开更多
关键词 药食两用食品 赭曲霉毒素A 免疫亲和净化 高效液相色谱法
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免疫亲和柱净化/高效液相色谱法同时测定动物源性食品中16种磺胺类药物残留 被引量：21
13
作者 袁中珍 张雷 +4 位作者 唐柏彬 郗存显 王国民 游丽娜 赵华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期478-482,共5页
建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱法(IAC/HPLC)同时测定动物源性食品中16种磺胺类药物残留的分析方法。样品经80%乙醇提取,稀释后用磺胺类药物免疫亲和柱净化,高效液相色谱法检测。以Agi-lent Eclipse XDB-C18为分离色谱柱,甲醇-磷酸... 建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱法(IAC/HPLC)同时测定动物源性食品中16种磺胺类药物残留的分析方法。样品经80%乙醇提取,稀释后用磺胺类药物免疫亲和柱净化,高效液相色谱法检测。以Agi-lent Eclipse XDB-C18为分离色谱柱,甲醇-磷酸盐缓冲液(pH 3.5)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,进样量为50μL,检测波长为270 nm,整个分析过程不超过42 min。实验结果表明,磺胺类药物在10～200μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。在20、50、100μg/kg的加标水平下,16种磺胺类药物的平均回收率为62%～104%,相对标准偏差为0.9%～6.6%,检出限(S/N=3)为4～10μg/kg。该方法简便快速、灵敏度高、溶剂用量少且环保,适用于动物源性食品中磺胺类药物残留的测定。 展开更多
关键词 磺胺类药物 免疫亲和柱 高效液相色谱法
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用免疫亲和柱分离、高效液相色谱法测定花生和玉米中黄曲霉毒素的研究 被引量：13
14
作者 王光建 何才云 +2 位作者 鲁长豪 赵建忠 王勇 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期238-240,246,共4页
建立了用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定花生和玉米中黄曲霉毒素（ＡＦＴ）Ｂ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２的方法。采用６０％甲醇提取样品中的ＡＦＴ，氢氧化铁沉淀吸附除去样品液中大部分杂质，再经过亲和柱将ＡＦＴ截留，... 建立了用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定花生和玉米中黄曲霉毒素（ＡＦＴ）Ｂ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２的方法。采用６０％甲醇提取样品中的ＡＦＴ，氢氧化铁沉淀吸附除去样品液中大部分杂质，再经过亲和柱将ＡＦＴ截留，进一步与杂质分离，洗脱后，加三氟乙酸衍生化处理，反相高效液相色谱法分离定量。对样品中四种ＡＦＴ的最低可测下限浓度均为１μｇ／ｋｇ，样品加标５～１０μｇ／ｋｇＡＦＴ，回收率在７６．９％～１１３．６％范围内。 展开更多
关键词 高效液相色谱 黄曲霉毒素 花生 玉米
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抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定 被引量：11
15
作者 李婷 郭晓欢 +5 位作者 王彧 Markus Plate 邵陆宁 宋泉声 马大龙 韩文玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期41-44,共4页
目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能。方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联。其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家... 目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能。方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联。其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家兔,制备Ab1;而第4条多肽为CMTM4-v1所特有,单独免疫家兔,制备Ab2。ELISA法检测抗体效价。免疫亲和层析法纯化后,进行West-ern blot和免疫组织化学检测,鉴定这2种抗体的特异性与适用范围。结果:得到兔抗人CMTM4多肽抗体Ab1和Ab2,效价分别达1∶105和1∶106。纯化后的Ab1用于Western blot可特异识别超表达的CMTM4-v1和v2,并可用于免疫组织化学实验;而Ab2仅可用于Western blot,特异性识别超表达的CMTM4-v1。Ab1还可特异识别小鼠内源性Cmtm4。结论:用多肽免疫家兔制备的2种抗CMTM4抗体不仅具有较高的效价以及特异性,并且Ab1还可以特异识别小鼠Cmtm4,为CMTM4的功能研究提供了有力的支持。 展开更多
关键词 CMTM4 多肽抗体 免疫亲和纯化
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克百威的免疫亲和色谱分析研究 被引量：17
16
作者 刘曙照 韦林洪 徐维娜 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期134-137,共4页
SepharoseCL 4B经碳酰二咪唑(CDI)活化后与纯化的克百威抗体共价偶联,合成了免疫亲和色谱 (IAC)固定相,并用其制备了对克百威具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC条件进行了优化,选择 0 02mol/LpH7 2磷酸盐缓冲液(PB)作为吸附与平衡介质,60... SepharoseCL 4B经碳酰二咪唑(CDI)活化后与纯化的克百威抗体共价偶联,合成了免疫亲和色谱 (IAC)固定相,并用其制备了对克百威具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC条件进行了优化,选择 0 02mol/LpH7 2磷酸盐缓冲液(PB)作为吸附与平衡介质,60% (体积分数 )甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,IAC柱对克百威的动态柱容量达 1 58mg/L。当标样溶液中克百威质量浓度低于 2μg/L时,经IAC柱富集的效率高于167倍。在河水中按 0 1mg/L水平添加克百威标准品,经IAC柱分离富集,洗脱液采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测,5次重复测定的平均回收率为 89 8%,相对标准偏差为 4 8%。同时采用高效液相色谱(HPLC)法测定洗脱液,与ELISA法测定结果基本一致。 展开更多
关键词 免疫亲和色谱 酶联免疫吸附分析 高效液相色谱 克百威
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液相色谱-三重串联四极杆质谱测定粮油中的黄曲霉毒素 被引量：38
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作者 王秀嫔 李培武 +8 位作者 杨扬 张文 张奇 范素芳 喻理 王琳 陈小媚 李英 姜俊 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期517-522,共6页
建立了超声提取-液相色谱-电喷雾三重串联四极杆质谱测定玉米、大米、大豆等粮油固体样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2(AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)的方法。分析前对样品进行超声提取,优化得到最佳超声提取条件:溶剂为甲醇-水(含40 g/L NaCl... 建立了超声提取-液相色谱-电喷雾三重串联四极杆质谱测定玉米、大米、大豆等粮油固体样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2(AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)的方法。分析前对样品进行超声提取,优化得到最佳超声提取条件:溶剂为甲醇-水(含40 g/L NaCl)(80∶20,v/v)溶液、料液比为1∶3(g∶mL)、温度为50℃、时间为3 min。然后对提取的样品进行免疫亲和特异性净化。最后与液相色谱-电喷雾三重串联四极杆质谱联用,使用C18反相色谱柱,流动相为甲醇-10 mmol/L乙酸铵水溶液梯度洗脱,以黄曲霉毒素M1(AFM1)作为内标进行定量测定。结果表明,AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限分别为0.002、0.004、0.004和0.012μg/kg。方法的加标回收率为87%～111%,日内相对标准偏差(RSD)和日间RSD分别不大于6.7%和5.6%。实验结果表明该方法可以有效地降低基质效应的影响,相比于外标法能极大地提高方法的准确度。 展开更多
关键词 超声提取 液相色谱-质谱 内标校正 免疫亲和 黄曲霉毒素 粮油
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免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法测定中药材中的14种真菌毒素 被引量：37
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作者 葛宝坤 赵孔祥 +1 位作者 王伟 宓捷波 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期495-500,共6页
依次采用磷酸盐缓冲液(PBS)和甲醇-PBS溶液提取样品,以多功能免疫亲和柱净化,采用液相色谱-串联四极杆质谱检测,可同时测定中药材中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、伏马毒素B1、伏马毒素B2、T-2毒素、HT-2... 依次采用磷酸盐缓冲液(PBS)和甲醇-PBS溶液提取样品,以多功能免疫亲和柱净化,采用液相色谱-串联四极杆质谱检测,可同时测定中药材中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、伏马毒素B1、伏马毒素B2、T-2毒素、HT-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮等14种真菌毒素。优化条件下,真菌毒素的定量限(LOQ)为1～5μg/kg,4种中药材基质(人参、桔梗、板蓝根、麦门冬)中3个不同添加水平的平均回收率(n=6)为71.9%～99.7%,相对标准偏差(RSD)为4.8%～15.8%。该方法的检测速度快,中药材复杂基质的干扰较少,结果准确、可靠,定量限可满足国内外中药材真菌毒素相关限量的要求。 展开更多
关键词 免疫亲和柱净化 液相色谱-串联质谱 真菌毒素 中药材
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免疫亲和柱净化-UPLC-MS/MS测定鱼虾肉中的3种氨基糖苷类抗生素 被引量：3
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作者 王强 王旭峰 +5 位作者 赵东豪 黎智广 蔡楠 关婉琪 黄珂 李刘冬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第20期326-331,共6页
将庆大霉素(gentamicin,GEN)、卡那霉素(kanamycin,KAN)和安普霉素(apramycin,APR)的抗体同时偶联到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上,制备成复合型免疫亲和柱(immunoaffinity column,IAC)。建立鱼虾肉中3种氨基糖苷类抗生素的免疫亲和柱净化-... 将庆大霉素(gentamicin,GEN)、卡那霉素(kanamycin,KAN)和安普霉素(apramycin,APR)的抗体同时偶联到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上,制备成复合型免疫亲和柱(immunoaffinity column,IAC)。建立鱼虾肉中3种氨基糖苷类抗生素的免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱分析方法。采用BEH Amide(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,以0.05%甲酸溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测。结果表明,所制备的IAC对GEN、KAN和APR的柱容量分别为1 127、1 368、925 ng/mL,洗脱液选用0.1%甲酸-甲醇溶液。GEN的线性范围为80.0～500μg/L,KAN和APR的线性范围为20～500μg/L,相关系数均大于0.995。鱼虾肉基质中3种物质的平均回收率为71.7%～96.8%,相对标准偏差为4.2%～10.9%(n=6),检出限和定量限分别为10～40μg/kg和20～80μg/kg。为水产品中氨基糖苷类药物残留监控提供一种有效的技术手段。 展开更多
关键词 免疫亲和柱 超高效液相色谱-串联质谱 残留检测 氨基糖苷类抗生素
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尿样中克仑特罗免疫亲和色谱-气/质联用检测方法的研究 被引量：7
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作者 王迪 杨曙明 +4 位作者 张波 宋荣 熊勇华 于洪侠 杨晓慧 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第6期665-668,共4页
以单抗为配基制备克仑特罗免疫亲和柱,建立了简单、快速、特异的样品净化技术,柱容量达到100 ng。偶联抗体量与柱容量呈线性关系,线性方程为:y=236.36x+6.6214,R2=0.9461。测定尿样中的克仑特罗,不需前处理直接用亲和柱提纯后以气质联用... 以单抗为配基制备克仑特罗免疫亲和柱,建立了简单、快速、特异的样品净化技术,柱容量达到100 ng。偶联抗体量与柱容量呈线性关系,线性方程为:y=236.36x+6.6214,R2=0.9461。测定尿样中的克仑特罗,不需前处理直接用亲和柱提纯后以气质联用(GC/MS)方法检测。空白猪尿添加浓度为205、01、00 ng时,回收率分别为85%±1.3,85.9%±1.3,81.5%±2.7。同时以NY/XQ421-2003标准中净化方法为对照,回收率分别为113%±5.6,94.5%±10,78.6%±1.7,偶联非特异抗体的对照组亲和柱对样品保留值为7.03%。数据显示:免疫亲和柱作为提纯方法,与传统固相萃取提纯方法相比平行性好,提纯后样本杂质少。因此免疫亲和柱是净化样品的一个有效方法。 展开更多
关键词 免疫亲和色谱 克仑特罗 Β-兴奋剂 净化
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