一种疏水色谱填料的特性及应用的研究 被引量：7

1

作者 王云 郭敏亮 +3 位作者 姜守磊 陈天 姜涌明 陈云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期354-356,共3页

以交联壳聚糖为基质 ,正戊醛为配基 ,利用改进的方法制备了疏水作用色谱 (HIC)填料 ,并对该色谱填料的吸附行为和应用作了研究。结果表明 ,此类填料对蛋白质的吸附行为符合疏水相互作用理论 ,对α 淀粉酶的纯化活性回收率大于 80 %。

关键词 疏水作用色谱 填料 壳聚糖 吸附行为

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疏水作用色谱填料研究进展 被引量：4

2

作者 李玉龙 孙彦 胡宗定 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期114-117,共4页

疏水作用色谱法（HIC）是一种有效的蛋白质分离纯化方法。综述了HIC填料的基质和配基的发展过程，举例说明了不同HIC填料对蛋白质的分离纯化效率，指出了制备型HIC填料的现状及其发展趋势。

关键词 疏水作用色谱法 色谱填料 蛋白质

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疏水色谱法的进展及其在生化研究中的应用 被引量：13

3

作者 刘彤 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期30-34,共5页

着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展，并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用，包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍，全文包... 着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展，并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用，包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍，全文包括６２篇文献和一张表格。 展开更多

关键词 HIC 疏水色谱 固定相 生物大分子 分离

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胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率 被引量：7

4

作者 白泉 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期284-287,共4页

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不... 用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。 展开更多

关键词 高效疏水色谱 蛋白折叠 Α-淀粉酶 胍变 脲变

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用高效疏水色谱法对多种脲变α-淀粉酶折叠中间体的研究 被引量：6

5

作者 白泉 卫引茂 +1 位作者 耿明晖 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第8期1291-1295,共5页

用高效疏水色谱法对用脲变性的α-淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α-淀粉酶折叠至少有19个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周．这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实．此外，还用紫外吸收... 用高效疏水色谱法对用脲变性的α-淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α-淀粉酶折叠至少有19个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周．这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实．此外，还用紫外吸收光谱和荧光发射光谱研究了这些折叠中间体与天然α-淀粉酶构象之间的差异． 展开更多

关键词 蛋白折叠 折叠中间体 Α淀粉酶 HPHIC α-Amy

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用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的折叠特性研究 被引量：4

6

作者 白泉 孔宇 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期1483-1488,共6页

用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱... 用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱、荧光光谱及 MALDI-TOF对其复性效果进行了验证 .同时与体积排阻色谱 (SEC)和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较 .结果表明 ,SEC根本无法使还原胍变胰岛素复性 ,而稀释法的复性效率仅有 2 % .这进一步表明 HPHIC是变性蛋白复性的有效工具 ,变性蛋白在疏水界面折叠过程中 ,蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用 。 展开更多

关键词 疏水色谱 还原型胍变性 牛胰岛素 折叠特性 蛋白 体积排阻色谱 稀释法 复性

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疏水界面上标准蛋白质吸附等温线的研究 被引量：6

7

作者 边六交 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第2期201-205,共5页

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－... 测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－Ａ）、ＢＥＴ和Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ吸附模型对这些蛋白的吸附等温线拟合后发现，ＳＤＭ－Ａ关系式能够良好描述这７种蛋白的吸附，Ｌａｎｇｍｕｉｒ关系仅能较好地描述后５种蛋白质的吸附。而Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ和ＢＥＴ关系式对上述两类蛋白质吸附的描述欠妥。实验发现对于不同盐浓度条件下卵清蛋白的吸附，用ＳＤＭ－Ａ和Ｌａｎｇｍｕｉｒ公式拟合所得的参数与盐浓度之间呈现出一定的规律性。 展开更多

关键词 吸附等温线 蛋白质 色谱

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盐酸胍对疏水色谱中蛋白质保留行为的影响 被引量：3

8

作者 冯文科 姜新其 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1994年第10期1450-1453,共4页

研究了变性剂盐酸胍对几种蛋白质在高效疏水色谱中保留行为的影响。用液相色谱中溶质的计量置换保留模型和测流动相表面张力及蛋白质紫外吸收光谱方法研究的结果表明：在低浓度范围内，盐酸胍主要以疏水作用影响蛋白质的保留；而在高浓... 研究了变性剂盐酸胍对几种蛋白质在高效疏水色谱中保留行为的影响。用液相色谱中溶质的计量置换保留模型和测流动相表面张力及蛋白质紫外吸收光谱方法研究的结果表明：在低浓度范围内，盐酸胍主要以疏水作用影响蛋白质的保留；而在高浓度区域内，盐酸胍的存在则显著影响蛋白质分子的构象，使其保留行为发生变化． 展开更多

关键词 蛋白质 疏水色谱 盐酸胍 保留行为

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弱阳离子交换色谱中疏水作用对蛋白保留的影响 被引量：4

9

作者 孙萱 杨云 耿信笃 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期6-10,共5页

选取了四种常用的弱阳离子交换(WCX)商品柱以研究标准蛋白在其上的色谱保留行为。发现在疏水色谱(HIC)模式下,蛋白在这四种WCX商品柱上也有不同程度的保留特征,且洗脱曲线呈现出保留值随盐浓度变化的"U"型。从分子力学角度定... 选取了四种常用的弱阳离子交换(WCX)商品柱以研究标准蛋白在其上的色谱保留行为。发现在疏水色谱(HIC)模式下,蛋白在这四种WCX商品柱上也有不同程度的保留特征,且洗脱曲线呈现出保留值随盐浓度变化的"U"型。从分子力学角度定性解释了因疏水相互作用力的存在影响了蛋白在WCX色谱柱上洗脱顺序的改变。运用计量置换理论(SDT)中的两组线性方程进一步证实了WCX和HIC中蛋白与固定相间相互作用力的性质,在HIC中为非选择性作用力,而在离子交换色谱(IEC)中为选择性作用力。这四种色谱柱中的两种事实上可在WCX和HIC两种模式下,对标准蛋白进行分离且有较好的分离效果,有可能作为二维色谱柱来使用。 展开更多

关键词 离子交换色谱 疏水色谱 计量置换 混合保留机理 蛋白分离

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重组人干扰素-γ的制备与鉴定 被引量：3

10

作者 吴丹 高栋 +1 位作者 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期206-211,共6页

用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相... 用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。 展开更多

关键词 重组人干扰素-γ 蛋白折叠液相色谱法 高效疏水色谱 复性 纯化

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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量：3

11

作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性

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蛋白质在疏水色谱法中的热行为 被引量：3

12

作者 陈国亮 李华儒 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期172-175,共4页

考察了一系列标准蛋白质在疏水色谱法中的热行为；研究了柱温变化对蛋白质和小分子保留值的影响。实验结果表明，每个蛋白质的保留值－温度曲线上都有一个固定的热变性转变温度。在这个温度以下，除热稳定性较高的溶菌酶外，蛋白质的保... 考察了一系列标准蛋白质在疏水色谱法中的热行为；研究了柱温变化对蛋白质和小分子保留值的影响。实验结果表明，每个蛋白质的保留值－温度曲线上都有一个固定的热变性转变温度。在这个温度以下，除热稳定性较高的溶菌酶外，蛋白质的保留值都随柱温的升高而线性地增加。在转变温度以上，保留值随柱温升高会迅速增大或减小。与蛋白质相反，小分子的保留值随柱温的升高会不断地减小。研究了柱温变化对酶活性的影响，并与酶的静态热失活进行了比较。发现仅在室温下疏水色谱法才具有温和的分离条件，在较高柱温下疏水固定相可以诱导蛋白质变性。柱温对蛋白质活性的影响取决于固定相疏水性的强弱。通常，在给定温度下疏水性越强，酶越容易失活。测定了不同柱温下α－淀粉酶在疏水色谱法中的Ｚ值（ｌｇｋ′对作图的斜率）。分析了较高柱温下导致蛋白质保留值的增长是由于蛋白质的构象变化。 展开更多

关键词 蛋白质 柱温影响 疏水色谱

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用前沿色谱法测定蛋白质吸附等温线时增浓方式的研究 被引量：2

13

作者 边六交 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期174-177,共4页

用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线，两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源... 用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线，两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源，指出了可能解决这一问题的途径。 展开更多

关键词 色谱法 疏水色谱 蛋白质 吸附等温线

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31ku激发子蛋白的液相色谱分离纯化 被引量：1

14

作者 马志超 楼健 等 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期22-25,共4页

利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离出一种新的31ku激发子蛋白 ,选择了阴离子交换色谱流动相的最佳 pH值6.0 ,建立了疏水相互作用色谱硫酸铵Tris缓冲液 -水洗脱模式 ,简化了纯化步骤和减少了活性损失的危险。

关键词 阴离子交换色谱 疏水相互作用色谱 31ku激发子蛋白 分离 纯化 疫霉菌 植物病原菌

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疏水层析技术及应用 被引量：3

15

作者 刘祥义 贾宇 王雪 《河北化工》 2012年第9期68-69,共2页

综述了疏水层析技术的基本原理、常用介质、技术综合应用,探讨和展望了其发展方向和前景。

关键词 疏水层析 疏水介质 蛋白纯化

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用疏水色谱法纯化基因重组牛朊病毒正常成熟蛋白

16

作者 耿信笃 王超展 +3 位作者 张养军 申烨华 王大伟 田波 《纺织高校基础科学学报》 CAS 2001年第1期1-5,33,共6页

研究并比较了高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)的流动相组成、固定相、p H值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响 .在此基础上 ,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件 ,即仅用高效疏水色谱... 研究并比较了高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)的流动相组成、固定相、p H值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响 .在此基础上 ,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件 ,即仅用高效疏水色谱法进一步便可得到纯度和质量回收率均大于 90 %的目标蛋白 .还讨论了用 HPHIC对变性 b Pr Pc L 的分离机理 . 展开更多

关键词 牛 朊病毒 高效疏水色谱 蛋白分离纯化 基因工程

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疏水作用色谱介质的合成及色谱特性研究

17

作者 李华儒 陈国亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第11期1685-1689,共5页

利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料．按照高效疏水作用色谱法，采用梯度洗脱方式分离了６种标准蛋白及唾液中α－淀粉酶和基因工程生产的γ－干扰素．柱子不可逆吸附小、被试验的α－淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收．应用合成的... 利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料．按照高效疏水作用色谱法，采用梯度洗脱方式分离了６种标准蛋白及唾液中α－淀粉酶和基因工程生产的γ－干扰素．柱子不可逆吸附小、被试验的α－淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收．应用合成的色谱填料研究了洗脱剂中盐浓度和温度对蛋白质保留行为的影响，论证了合成填料的色谱属性． 展开更多

关键词 疏水作用色谱 色谱特性 聚醚 疏水介质

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疏水色谱法在生化研究中的应用

18

作者 王云 王峥 《常熟高专学报》 2000年第4期78-80,共3页

评述了疏水相互作用色谱 (HydrophobicInteractionChromatography,HIC)的理论研究 ,及其在生物化学研究领域中的应用 ,包括生物大分子的分离纯化 ,蛋白质的复性。

关键词 疏水色谱 分离纯化 蛋白蛋白 生物化学

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无机基质疏水作用色谱填料的研制及扩试 被引量：1

19

作者 何秀娟 赵睿 +3 位作者 吴晓军 乔桂娟 王萍 刘国诠 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期225-227,共3页

以无机基质可控孔径玻璃（ＣＰＧ）和大孔硅胶为基质、聚乙二醇（ＰＥＧ１０００）为配基，利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱（ＨＩＣ）填料，并进行了１５０ｇ／批的扩大试验，用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明，... 以无机基质可控孔径玻璃（ＣＰＧ）和大孔硅胶为基质、聚乙二醇（ＰＥＧ１０００）为配基，利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱（ＨＩＣ）填料，并进行了１５０ｇ／批的扩大试验，用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明，此类填料对蛋白质的分离性能良好，对胰蛋白酶的活性回收率大于９５％。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 疏水作用色谱填料 蛋白质

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动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响 被引量：3

20

作者 闵一 陈刚 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期717-723,共7页

依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白... 依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速（u）的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼（10mm×20mm i.d.）在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。 展开更多

关键词 疏水相互作用色谱 蛋白分离 分离度 色谱饼 动力学因素 生物工程 粒细胞集落刺激因子

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