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人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选
被引量：
4
1
作者
吴国球
刘乃丰
+3 位作者
赵桂琴
范小波
张臣
王明虹
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期464-468,共5页
目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲...
目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coliHB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性。MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响。结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001)。同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖。结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础。
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关键词
结缔组织生长因子
噬菌体展示
人源单链可变区片段
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职称材料
量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征
被引量：
2
2
作者
徐俊杰
王诗雯
+7 位作者
赵虹
陈桂秋
霍锐
田莉
段玉晶
李敏杰
杨柏
魏景艳
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期506-509,共4页
用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经N i2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QD s)在N-羟基琥珀酰...
用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经N i2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QD s)在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下,与scFvs连接.光谱分析和膜印迹结果表明,scFvs成功地共价连接到QD s表面,所得的QD-scFvs复合物能够较好地识别GSH.荧光显微镜观察QD-scFvs与人乳腺癌细胞MCF-7的作用结果,初步判断QD-scFvs能够跨膜进入细胞.
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关键词
量子点
人源单链抗体
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)
共价结合
印迹
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职称材料
题名
人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选
被引量：
4
1
作者
吴国球
刘乃丰
赵桂琴
范小波
张臣
王明虹
机构
东南大学附属中大医院临床检验中心
东南大学临床医学院心血管研究所
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期464-468,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30070300)~~
文摘
目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coliHB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性。MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响。结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001)。同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖。结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础。
关键词
结缔组织生长因子
噬菌体展示
人源单链可变区片段
Keywords
connective tissue growth factor
phage display
humanized single-chain variable fragment
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征
被引量：
2
2
作者
徐俊杰
王诗雯
赵虹
陈桂秋
霍锐
田莉
段玉晶
李敏杰
杨柏
魏景艳
机构
吉林大学药学院
吉林大学生命科学学院
吉林大学化学学院
吉林大学中日联谊医院中心实验室
吉林大学中日联谊医院病理科
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期506-509,共4页
基金
吉林省科学技术厅基金(批准号:200705380和20070726)
中国博士后基金(批准号:2004036395)
吉林大学本科生创新性实验计划资助
文摘
用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经N i2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QD s)在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下,与scFvs连接.光谱分析和膜印迹结果表明,scFvs成功地共价连接到QD s表面,所得的QD-scFvs复合物能够较好地识别GSH.荧光显微镜观察QD-scFvs与人乳腺癌细胞MCF-7的作用结果,初步判断QD-scFvs能够跨膜进入细胞.
关键词
量子点
人源单链抗体
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)
共价结合
印迹
Keywords
Quantum dot
human
single chain
fragment
s
variable
（scFvs）
Glutathione peroxidase （GPX）
Covalent conjugation
Dot blot
分类号
O629.72 [理学—有机化学]
Q511 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选
吴国球
刘乃丰
赵桂琴
范小波
张臣
王明虹
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
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职称材料
2
量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征
徐俊杰
王诗雯
赵虹
陈桂秋
霍锐
田莉
段玉晶
李敏杰
杨柏
魏景艳
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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