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人干细胞因子受体膜外区1～3免疫球蛋白样结构域的表达、纯化及活性 被引量：2
1
作者 苏林 刘长征 +3 位作者 邓艳春 杨克恭 梁植权 陈松森 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期154-158,共5页
目的 在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法 采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Ki... 目的 在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法 采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Kit/Ig1～3DM表达质粒,转化E.coli BL21（DE3）诱导表达,稀释复性,镍柱纯化.将C端添加组氨酸标签的c-Kit/Ig1～3基因克隆入真核表达载体pEAK12中,转染HEK293 ET细胞构建c-kit/Ig1～3高效表达细胞株,从细胞培养上清中使用镍金属螯合柱收集纯化蛋白.His-tag pull-down和酶联免疫结合实验检测融合蛋白配体结合活性.结果 在大肠杆菌中c-Kit/Ig1～3^DM以包涵体形式表达,复性后配体结合活性很低.在HEK293 ET细胞中筛选到2个高效表达c-Kit/Ig1～3的细胞株,上清表达量为2μg/ml,融合蛋白相对分子质量为58 000;受体配体结合实验显示真核表达的c-Kit/Ig1～3有明显的干细胞因子特异结合活性,解离常数Kd值为9.39 nmol/L.结论获得了具有较高配体结合活性的c-Kit/Ig1～3融合蛋白. 展开更多
关键词 人干细胞因子受体 免疫球蛋白样结构域 HIS-TAG pull-down 酶联免疫结合实验
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乙醛脱氢酶1和人表皮生长因子受体2在胃癌中的表达及临床意义 被引量：13
2
作者 石庆芳 李玲玲 +3 位作者 杨俊娥 杜秋越 王大庆 周风举 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期948-952,共5页
目的探讨乙醛脱氢酶1(ALDH1)和人表皮生长因子受体2(HER-2)与胃癌发生发展及临床病理因素的关系。方法收集2015年7月-2018年3月就诊于河北医科大学附属衡水市人民医院的162例胃癌患者的手术标本、胃镜活检标本及其临床病理资料。采用免... 目的探讨乙醛脱氢酶1(ALDH1)和人表皮生长因子受体2(HER-2)与胃癌发生发展及临床病理因素的关系。方法收集2015年7月-2018年3月就诊于河北医科大学附属衡水市人民医院的162例胃癌患者的手术标本、胃镜活检标本及其临床病理资料。采用免疫组化法检测胃癌组织和癌旁组织ALDH1、HER-2蛋白的表达,分析ALDH1和HER-2蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系。结果胃癌组织ALDH1、HER-2蛋白阳性表达率(48.7%、34.0%)明显高于癌旁组织(8.0%、11.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织ALDH1蛋白表达与肿瘤T分期、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移明显相关(P<0.05),与性别、年龄及肿瘤部位无关(P>0.05)。胃癌组织HER-2蛋白表达与肿瘤T分期、肿瘤部位、肿瘤分化程度、TNM分期及远处转移明显相关(P<0.05),与性别、年龄及淋巴结转移无关(P>0.05)。胃癌组织ALDH1与HER-2蛋白表达呈正相关(P=0.00)。结论 ALDH1和HER-2蛋白在胃癌组织中呈高表达,与胃癌的发生发展及预后有关,有望为胃癌的治疗提供新靶点。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶1 人表皮生长因子受体2 胃癌 肿瘤干细胞
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人干细胞因子受体c-Kit稳定表达细胞株的构建
3
作者 熊安琪 陈松森 +2 位作者 狄旭 刘长征 姚杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期478-482,共5页
干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血因子 ,其受体c Kit具有酪氨酸激酶活性 .SCF c Kit介导的细胞内信号转导在造血、肥大细胞的生成及其功能、以及生殖细胞和黑色素细胞的发育中起着关键的作用 .通过构建人c kitcDNA的pcDNA3.1真核表达载... 干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血因子 ,其受体c Kit具有酪氨酸激酶活性 .SCF c Kit介导的细胞内信号转导在造血、肥大细胞的生成及其功能、以及生殖细胞和黑色素细胞的发育中起着关键的作用 .通过构建人c kitcDNA的pcDNA3.1真核表达载体 ,转染不表达人c kit的小鼠髓系祖细胞FDC P1.经Zeocin抗性筛选 ,PCR、RT PCR、Western印迹分析、流式细胞仪分析等方法检测到人c kit基因的稳定整合和表达 ,并分布于细胞表面 ,证明获得了稳定表达人c Kit受体的细胞株 .用MTT法检测重组细胞株增殖特性 ,表明重组人SCF可刺激其增殖 .为进一步研究人c 展开更多
关键词 人干细胞因子受体c-Kit 转染 FDC-P1细胞株 表达 增殖
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miRNA-140-5p在人骨髓间充质干细胞成脂分化中的表达及其靶基因的预测 被引量：5
4
作者 汪涛 颜瑞巧 +7 位作者 曹俊 曹玲玲 张铉浦 李兴暖 吴萍 周小鸥 吴建芳 许晓源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期199-203,共5页
目的筛选出人骨髓间充质干细胞(h MSCs)成脂分化中具有潜在价值的mi RNA及其靶基因,为人类成骨细胞与脂肪细胞分化平衡调控机制的深入研究提供有力实验依据。方法收集h MSCs成脂分化过程中的0、7、14、21 d的细胞样品,应用mi RNA芯片和... 目的筛选出人骨髓间充质干细胞(h MSCs)成脂分化中具有潜在价值的mi RNA及其靶基因,为人类成骨细胞与脂肪细胞分化平衡调控机制的深入研究提供有力实验依据。方法收集h MSCs成脂分化过程中的0、7、14、21 d的细胞样品,应用mi RNA芯片和转录组测序(m RNA-seq)技术,分析4个点细胞中mi RNA和m RNA的表达水平,并将mi RNA与m RNA的表达趋势进行关联分析,聚焦具有研究价值的mi RNA与m RNA相互调控关系,同时,采用Target Scan、Pic Tar和mi Randa等数据库进行靶基因的预测。结果发现mi R-140-5p在成脂分化中表达量呈逐渐下降的趋势,而白血病抑制因子受体(LIFR)表达量呈逐渐升高趋势,二者呈现负调控的对应关系。同时经3个靶基因数据库预测,LIFR为mi R-140-5p共有的靶基因。结论 mi RNA-140-5p可能与人骨髓间充质干细胞的成脂分化密切相关,且通过调控其靶基因LIFR的表达而参与成脂分化。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 成脂分化 MI RNA-140-5p 白血病抑制因子受体
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HER-2表达与乳腺癌细胞株MDA-MB-468紫杉醇耐药的相关性 被引量：4
5
作者 陈璐璐 权香兰 +4 位作者 于可心 李颖 金文彪 尹香花 张松男 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1022-1027,共6页
目的探讨HER-2阳性乳腺癌耐药性与乳腺癌干细胞的相关性。方法将HER-2弱阳性乳腺癌细胞株MDA-MB-468分为未处理组和紫杉醇(Taxol)处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得紫杉醇耐药的乳腺癌细胞株(MDA-MB-468/Taxol),MTT法测定细胞的存活... 目的探讨HER-2阳性乳腺癌耐药性与乳腺癌干细胞的相关性。方法将HER-2弱阳性乳腺癌细胞株MDA-MB-468分为未处理组和紫杉醇(Taxol)处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得紫杉醇耐药的乳腺癌细胞株(MDA-MB-468/Taxol),MTT法测定细胞的存活率,Western blot法检测两组细胞间HER-2的表达差异,采用微球体培养法富集乳腺癌干细胞,RT-PCR检测两组细胞中癌干基因Oct4的表达,Aldefluor Assay测定两组细胞中ALDH1的表达率。结果经紫杉醇预处理10天后成功获得乳腺癌耐药细胞株(MDA-MB-468/Taxol),MTT法显示同样条件下再次暴露于紫杉醇时,紫杉醇处理组的存活率明显高于未处理组,(P<0.01)。Western blot结果显示乳腺癌耐药细胞株(MDA-MB-468/Taxol)HER-2蛋白过表达。细胞悬浮培养7天后,乳腺癌微球体形成,未处理组与不同浓度(5 nmol/L、10 nmol/L)紫杉醇处理组的微球体细胞数量分别为29、65、48个,紫杉醇处理组微球体数目增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示Oct4干性基因在MDA-MB-468/Taxol中表达显著增加。Aldefluor Assay实验显示对照组中未处理组与紫杉醇处理组ALDH1的表达率均为0.1%,而实验组中未处理组与紫杉醇处理组的表达率分别为0.2%和0.6%,表明紫杉醇耐药细胞中乳腺癌干细胞的比例增加。结论HER-2高表达的乳腺癌细胞具有紫杉醇耐药性。HER-2高表达的乳腺癌耐药细胞具有更高的微球体形成能力及干细胞标志物表达能力的癌干细胞样特点,是介导化疗耐药的主要原因。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 HER-2 癌干细胞 耐药
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西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响 被引量：2
6
作者 唐小雪 周政 +1 位作者 李启期 姜丹丹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期37-45,共9页
目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LP... 目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。 展开更多
关键词 西格列汀 脂多糖 人牙周膜干细胞 成骨分化 基质细胞衍生因子-1 CXC趋化因子受体4
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人脐带间充质干细胞通过调控OPG/RANKL比值对骨质疏松大鼠的影响及机制研究 被引量：2
7
作者 卫莹 刘师伟 +3 位作者 段瑞雪 赵宇翔 李楠 吴亚茹 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期503-510,共8页
目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)对骨质疏松大鼠的影响及机制。方法:将30只SPF级6月龄雌性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除+HUC-MSCs干预组(4... 目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)对骨质疏松大鼠的影响及机制。方法:将30只SPF级6月龄雌性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除+HUC-MSCs干预组(4×10^(6)/3 d,HUC-MSCs干预组),每组各10只,Sham组切除大鼠腹腔少量脂肪,其余各组均去除双侧卵巢建立骨质疏松大鼠模型。建模成功后,HUC-MSCs组用干细胞干预12周,其余2组用等剂量生理盐水干预。干预结束后,通过骨代谢血清指标血钙(calcium,Ca)、血磷(phosphorus,P)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原C端肽(c-terminal peptide of typeⅠcollagen,CTX)、骨组织形态计量学参数测量、骨密度检测、成骨细胞表面积/骨表面积比(osteoblast surface/bone surface,ObS/BS)和破骨细胞表面积/骨表面积比(osteoclast surface area/bone surface,OcS/BS),评估大鼠骨质疏松改善情况,同时通过Western blot探究各组大鼠骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、β-连环蛋白(β-catenin)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达情况。结果:HUC-MSCs组大鼠血清Ca、ALP含量明显高于OVX组(2.320±0.188 vs.1.822±0.139;79.584±8.349 vs.43.644±5.369;均P=0.000),P、CTX含量明显低于OVX组(1.651±0.068 vs.1.864±0.076,P=0.000;119.832±18.180 vs.144.272±15.629,P=0.039);HUC-MSCs组骨小梁结构得到明显改善,骨密度、骨小梁数目、骨小梁面积比、ObS/BS均明显高于OVX组(161.114±16.726 vs.126.558±7.100,P=0.009;1.702±0.220 vs.1.051±0.323,P=0.020;33.111±6.101 vs.19.575±5.629,P=0.022;45.279±3.947 vs.33.948±7.339,P=0.041),骨小梁分离度、OcS/BS明显低于OVX组(0.592±0.066 vs.0.845±0.165,P=0.018;37.532±3.910 vs.44.891±3.615,P=0.026);Western blot结果显示HUC-MSCs组OPG/RANKL比值、β-catenin、Runx2的蛋白表达量明显高于OVX组(0.776±0.045 vs.0.097±0.063,P=0.000;0.590±0.057 vs.0.202±0.088,P=0.000;0.595±0.078 vs.0.239±0.071,P=0.001)。结论:HUC-MSCs可以通过Wnt/β-catenin/Runx2通路调节OPG/RANKL比值,促进骨形成,抑制骨吸收,改善骨质疏松。 展开更多
关键词 骨质疏松 人脐带间充质干细胞 骨代谢 骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体
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