小儿肺炎的病毒性病原学研究 被引量：22

1

作者 汪天林 陈志敏 +2 位作者 汤宏峰 唐兰芳 邹朝春 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第6期566-569,573,共5页

目的:探讨小儿肺炎的病毒性病原学特点.方法:应用直接免疫荧光法,连续3年对13 642例住院肺炎患儿呼吸道分泌物中呼吸道合胞病毒(RSV),副流感病毒(PIV) 1、2、3型,流感病毒(IV)A型、B型和腺病毒(ADV)抗原进行检测.结果:病毒性肺炎占34.3%... 目的:探讨小儿肺炎的病毒性病原学特点.方法:应用直接免疫荧光法,连续3年对13 642例住院肺炎患儿呼吸道分泌物中呼吸道合胞病毒(RSV),副流感病毒(PIV) 1、2、3型,流感病毒(IV)A型、B型和腺病毒(ADV)抗原进行检测.结果:病毒性肺炎占34.3%,其中RSV占25.8%,PIV4.7%,IV A 2.4%,IV B 0.2%,ADV 1.3%.RSV在≤1岁组检出率 33.1%,>1～3岁组19.7%,>3岁组5.1%(趋势χ2=763.4,P<0.001).ADV肺炎,>1～3岁组与>3岁组分别为2.3%及2.5%,均高于≤1岁组的0.7%(P<0.01).>1～3岁组IV A检出率3.4%,高于≤1岁组(χ2=18.2,P<0.01).>1～3岁组PIV 1肺炎占1.2%,较其它年龄组高(P<0.05).PIV 3,≤1岁组检出率 4.7%,>1～3岁组3.2%,>3岁组1.4%(趋势χ2=52.4,P<0.01).RSV感染率11月开始明显增高,持续到次年的3～4月份,但每年仍有差别.肺炎中RSV月感染率最高62.8%,IV A达15.7%.结论:小儿肺炎的病毒性病原,感染率高低依次为RSV、PIV、IV和ADV.RSV、PIV 3,年龄越大检出率越低.≤1岁婴儿ADV感染较少.幼儿较婴儿易致IV A感染.RSV流行见于冬春季,但存在变化. 展开更多

关键词 副流感病毒 流感病毒 腺病毒 人 呼吸道合胞病毒 肺炎 病毒性 腺病毒 儿童

在线阅读 下载PDF 职称材料

人血管形成素-1重组腺病毒高效制备 被引量：6

2

作者 陈仕林 黄盛东 +3 位作者 徐志云 梅举 朱家麟 张宝仁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1168-1171,共4页

目的 :制备人血管形成素 - 1重组腺病毒 ,为基因转染心肌缺血区促血管新生研究作准备。方法 :人血管形成素 - 1重组粘粒与DNA末端蛋白复合物混合后以磷酸钙共沉淀法转染 2 93细胞。获得的重组腺病毒经扩增 ,并进行酶切鉴定。结果 :酶切... 目的 :制备人血管形成素 - 1重组腺病毒 ,为基因转染心肌缺血区促血管新生研究作准备。方法 :人血管形成素 - 1重组粘粒与DNA末端蛋白复合物混合后以磷酸钙共沉淀法转染 2 93细胞。获得的重组腺病毒经扩增 ,并进行酶切鉴定。结果 :酶切结果显示 ,重组粘粒中人血管形成素 - 1基因插入方向正确 ,所获重组腺病毒带有此基因。重组腺病毒滴度达 5 .6× 10 11pfu/L。结论 :所获人血管形成素 - 1重组腺病毒为E1、E3缺陷型重组子 ,可用于动物体内基因治疗研究。 展开更多

关键词 腺病毒 基因疗法 治疗性血管新生疗法 缺血性心脏病 腺病毒载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体转染人骨髓基质干细胞及对其增殖的影响 被引量：7

3

作者 李建军 刘建国 +5 位作者 韩东 孙洪斌 卜丽莎 杨绍娟 张文岚 徐莘香 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期421-424,共4页

目的 :用人骨形态发生蛋白 - 2腺病毒表达载体 ( Ad- BMP- 2 )转染人骨髓基质干细胞( h BMSC) ,以探讨基因转染对 h BMSC增殖的影响。方法 :将 Ad- BMP- 2转染体外培养的成人骨髓基质干细胞 ,利用免疫组化、原位杂交染色方法检测细胞内... 目的 :用人骨形态发生蛋白 - 2腺病毒表达载体 ( Ad- BMP- 2 )转染人骨髓基质干细胞( h BMSC) ,以探讨基因转染对 h BMSC增殖的影响。方法 :将 Ad- BMP- 2转染体外培养的成人骨髓基质干细胞 ,利用免疫组化、原位杂交染色方法检测细胞内骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 )的表达 ,蛋白印迹法检测转染后细胞培养液中 BMP- 2分泌蛋白表达。然后通过流式细胞仪分析其对细胞增殖的影响。结果 :转染后 ,h BMP- 2基因在 m RNA水平和蛋白水平均有表达。蛋白印迹法检测到培养液中有 BMP- 2蛋白阳性表达。转染 h BMP- 2基因后 ,细胞经流式细胞仪分析 ,S期细胞比例增多 ,说明细胞 DNA的合成增加。结论 :Ad- BMP- 2可高效转染 h BMSC。 展开更多

关键词 腺病毒 人 骨形态发生蛋白 骨髓基质干细胞 基因转染

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组Ad-Cp-CDglyTK双自杀基因腺病毒载体构建及体外抑制鼻咽癌细胞的实验研究 被引量：4

4

作者 王国慧 何军芳 +1 位作者 樊卫 吴沛宏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期215-219,共5页

目的:构建含EB病毒Cp启动子的CDglyTK双自杀基因靶向腺病毒载体Ad-Cp-CDglyTK,探讨Cp启动子能否特异性调控自杀基因在转染鼻咽癌细胞中表达及靶向性治疗鼻咽癌的可行性。方法:采用pDC316穿梭质粒系统,高保真PCR扩增tk、cd、Cp等基因序列... 目的:构建含EB病毒Cp启动子的CDglyTK双自杀基因靶向腺病毒载体Ad-Cp-CDglyTK,探讨Cp启动子能否特异性调控自杀基因在转染鼻咽癌细胞中表达及靶向性治疗鼻咽癌的可行性。方法:采用pDC316穿梭质粒系统,高保真PCR扩增tk、cd、Cp等基因序列,采用定向克隆方法构建含Cp启动子的双自杀基因pDC316-CP-CDglyTK重组质粒,经DNA测序、酶切法鉴定所构建质粒,在293细胞中进行重组腺病毒Ad-Cp-CDglyTK包装、扩增、纯化与病毒滴度测定,体外转染鼻咽癌细胞株CNE1与正常鼻咽NP69细胞株,RT-PCR法检测转染细胞中CDglyTK基因的表达,MTT法观察Ad-Cp-CDglyTK/GCV+5-FC系统对CNE1细胞株的体外杀伤作用。结果:经DNA测序、限制性酶切法分析显示pDC316-Cp-CDglyTK含完整正确的tk、cd、Cp基因序列,在293细胞中包装扩增后病毒滴度为5.6×1012TC ID50/L,体外转染鼻咽癌CNE1细胞株与正常鼻咽NP69细胞株后,采用RT-PCR法从CNE1细胞株总RNA中扩出Cp片段,而NP69细胞株未检测到相应基因mRNA表达,MTT结果显示经前体药物处理转染后CNE1细胞株与NP69细胞株,5-FC+GCV联合用药较单一前体药物对CNE1细胞具有更强的抑制作用(P<0.05),联合用药对NP69细胞株未见明显杀伤作用。结论:Cp启动子可以特异性调控CDglyTK融合自杀基因在鼻咽癌细胞株(CNE1)中表达,融合自杀基因/前药系统较单一基因对鼻咽癌细胞具有更强的杀伤作用。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 Cp启动子 腺病毒 人 基因疗法

在线阅读 下载PDF 职称材料

中缅树鼩自然感染五种高致病性人腺病毒的血清流行病学分析 被引量：1

5

作者 李潇 周志超 +2 位作者 田新贵 廖嘉仪 樊晔 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期243-247,共5页

目的分析中缅树鼩(Tupaiabelangeri,Tree Shrew)自然感染5种高致病性人腺病毒(Human Adenovirus,HAdv)的血清流行病学,以探讨人腺病毒感染树鼩的可能性。方法采用固定病毒稀释血清法测定34份树鼩血清对Ad3、Ad4、Ad7、Ad14和Ad55的中和... 目的分析中缅树鼩(Tupaiabelangeri,Tree Shrew)自然感染5种高致病性人腺病毒(Human Adenovirus,HAdv)的血清流行病学,以探讨人腺病毒感染树鼩的可能性。方法采用固定病毒稀释血清法测定34份树鼩血清对Ad3、Ad4、Ad7、Ad14和Ad55的中和抗体水平。结果 4种B组腺病毒的中和抗体阳性率及中和效价较E组4型的大,阳性率由大到小依次为:Ad14(55.88%)、Ad3(47.06%)、Ad55(29.71%)、Ad7(14.71%)、Ad4(8.82%),树鼩血清主要表现为Ad3、Ad14和Ad55混合型多价抗血清。结论中缅树鼩可自然感染5种人腺病毒,有望以树鼩为实验动物,建立一种成熟的人腺病毒感染模型。 展开更多

关键词 中缅树鼩 自然感染 人腺病毒 血清流行病学

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组腺病毒AdCat转染增加血管平滑肌细胞中过氧化氢酶表达 被引量：1

6

作者 孙跃玲 涂远超 +2 位作者 王家宁 黄永章 黄从新 《实用医学杂志》 CAS 2004年第9期983-985,共3页

目的 :制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒 ,转染血管平滑肌细胞 ,观察过氧化氢酶表达水平。方法 :将过氧化氢酶cDNA亚克隆至pShuttle CMV中 ,将其和pAdEasy 1在细菌内进行同源重组 ,构建重组腺病毒质粒pAdEasy 1 Cat ,再转染Ad 2 93细... 目的 :制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒 ,转染血管平滑肌细胞 ,观察过氧化氢酶表达水平。方法 :将过氧化氢酶cDNA亚克隆至pShuttle CMV中 ,将其和pAdEasy 1在细菌内进行同源重组 ,构建重组腺病毒质粒pAdEasy 1 Cat ,再转染Ad 2 93细胞 ,包装成重组腺病毒颗粒 ;经纯化获取重组腺病毒AdCat。转染血管平滑肌细胞 ,Westernblot鉴定细胞中过氧化氢酶表达。结果 :正确构建了重组腺病毒载体 ,获得高滴度重组腺病毒 ,转染血管平滑肌细胞后过氧化氢酶高表达。结论 :重组腺病毒AdCat转染增加血管平滑肌细胞中过氧化氢酶表达 ,为用过氧化氢酶基因进行再狭窄的防治打下了基础。 展开更多

关键词 重组腺病毒 血管平滑肌细胞 转染 酶表达 过氧化氢酶 sy-1 酶基因 同源重组 亚克隆 DNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

aFGF基因转染改善猪慢性缺血心肌心功能的实验研究 被引量：1

7

作者 顾俊彦 梅举 +4 位作者 黄盛东 徐静 张宝仁 朱泉芳 李白翎 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期979-980,共2页

为探讨携带人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)基因的重组缺陷型腺病毒载体 (Ad .aFGF)转染对缺血心肌心功能改善的作用 ,采用小型猪 ,开胸后于左回旋支起始部放置Ameroid环 ,4周后 ,Ad.aFGF(n =7)、Ad.Null(n =5 )、PBS(n =6 )直接注射... 为探讨携带人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)基因的重组缺陷型腺病毒载体 (Ad .aFGF)转染对缺血心肌心功能改善的作用 ,采用小型猪 ,开胸后于左回旋支起始部放置Ameroid环 ,4周后 ,Ad.aFGF(n =7)、Ad.Null(n =5 )、PBS(n =6 )直接注射到左回旋支供血区域心肌 ,每只注射 10点 ,每点注射病毒 10 9pfu或PBS 10 0 μl;注药后 4周进行心脏超声检测。结果显示 ,Ad.aFGF组动物心功能较Ad.Null组和PBS组有显著改善。研究表明 ,Ad.aFGF能改善缺血心肌的心功能 ,可用于缺血性心脏病的治疗。 展开更多

关键词 基因转染 酸性成纤维细胞生长因子 病理性新生血管化 腺病毒 心肌缺血 心功能 基因治疗 心肌再血管化

在线阅读 下载PDF 职称材料

β-防御素2基因腺病毒表达载体的构建与真核表达 被引量：3

8

作者 石卓 舒强 +3 位作者 赵正言 陈智 姚航平 方向明 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2006年第6期590-595,共6页

目的:探讨重组腺病毒载体在真核细胞中稳定表达阳离子抗菌肽——β-防御素2的可行性。方法:采用RT-PCR方法扩增得到大鼠β-防御素2(rBD 2)基因片段,定向插入到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,重组质粒pShuttle-CMV-rBD 2转化E.coli B J51... 目的:探讨重组腺病毒载体在真核细胞中稳定表达阳离子抗菌肽——β-防御素2的可行性。方法:采用RT-PCR方法扩增得到大鼠β-防御素2(rBD 2)基因片段,定向插入到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,重组质粒pShuttle-CMV-rBD 2转化E.coli B J5183-AD-1后,与腺病毒基因组质粒pA dE asy-1发生同源重组,重组质粒pA dE asy-rBD 2转染293细胞进行腺病毒表达载体的包装。将包装成功的腺病毒感染cos-7细胞,并建立SD大鼠腺病毒感染模型,进行β-防御素2多肽的体外和体内表达,采用W estern b lot与免疫组化方法检测其表达。结果:重组腺病毒表达载体构建成功,包含大鼠β-防御素2基因,滴度达到109PFU/m l,W estern b lot与免疫组化方法分别检测到β-防御素2在SD大鼠体外、体内的表达。结论:重组腺病毒载体能在真核细胞中稳定表达阳离子抗菌肽——β-防御素2。 展开更多

关键词 防御素类/遗传学 腺病毒 人/遗传学 免疫组织化学 基因表达 Β-防御素 抗菌肽 腺病毒表达载体 基因重组 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

人Ad-BMP-2基因转染兔骨髓基质干细胞对其Ⅱ型胶原和碱性磷酸酶表达的影响 被引量：1

9

作者 韩冬 李建军 +5 位作者 张巨 孙鸿斌 顾家祥 王健 刘建国 王国君 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期45-47,78,F002,共5页

目的 :用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad- BMP- 2 )转染兔骨髓基质干细胞 (BMSC) ,观察Ad- BMP- 2转染对细胞分化的影响。方法 :将 Ad- BMP- 2转染体外培养的兔 BMSC,7d后利用原位杂交和免疫组化方法检测细胞内 BMP- 2及 型胶... 目的 :用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad- BMP- 2 )转染兔骨髓基质干细胞 (BMSC) ,观察Ad- BMP- 2转染对细胞分化的影响。方法 :将 Ad- BMP- 2转染体外培养的兔 BMSC,7d后利用原位杂交和免疫组化方法检测细胞内 BMP- 2及 型胶原的表达 ,同时行碱性磷酸酶染色。结果 :BMP- 2和 型胶原原位杂交法显示实验组细胞胞浆中有棕黄色阳性杂交信号 ,对照组阴性。 BMP- 2和 型胶原免疫组化法显示实验组细胞胞浆棕黄色阳性着色 ,胞核阴性表达 ,对照组阴性 ;碱性磷酸酶染色见实验组细胞胞浆呈棕黑色阳性着色 ,可见细小的棕黑色颗粒 ,对照组染色阴性。结论 :Ad- BMP- 2可高效转染 BMSC,且促进其向成骨细胞和软骨细胞方向转化。 展开更多

关键词 腺病毒 人 骨形态发生蛋白质类 转染 干细胞 胶原Ⅱ型 碱性磷酸酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

aFGF重组腺病毒体外诱导血管新生的实验研究 被引量：1

10

作者 顾俊彦 黄盛东 +1 位作者 梅举 张宝仁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1053-1054,F003,共3页

促血管生长因子可以刺激内皮细胞分裂、分化 ,诱导血管新生。为探讨其基因转染是否具有相同的作用 ,作者用构建好的携带人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)DNA的重组腺病毒载体 (Ad .aFGF)转染人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。免疫荧光染色表... 促血管生长因子可以刺激内皮细胞分裂、分化 ,诱导血管新生。为探讨其基因转染是否具有相同的作用 ,作者用构建好的携带人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)DNA的重组腺病毒载体 (Ad .aFGF)转染人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。免疫荧光染色表明 ,转染了Ad .aFGF的HUVECs有明显的aFGF表达 ;ELISA检测显示aFGF能分泌至细胞外 ;MTT实验显示Ad .aFGF转染后HUVECs显著增生 ,并且当它们种植于Matrigel基质时可分化形成毛细血管样结构 ,对照组则无此现象。这些结果说明Ad .aFGF在体外具有促进血管新生的作用 。 展开更多

关键词 AFGF 腺病毒 体外诱导 血管新生 实验研究 缺血性心脏病

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于六邻体蛋白及纤维蛋白序列测定的腺病毒性结膜炎分类分析 被引量：1

11

作者 王旌 朱剑锋 陆丽娜 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期902-907,共6页

目的基于六邻体蛋白和纤维蛋白的联合基因测序和系统发育分析进行腺病毒性结膜炎中人类腺病毒(HAdV)分型。方法在上海地区收集2015年1月至2017年8月病毒性结膜炎患者下结膜囊结膜拭子样本256份,提取DNA后通过PCR扩增六邻体蛋白及纤维蛋... 目的基于六邻体蛋白和纤维蛋白的联合基因测序和系统发育分析进行腺病毒性结膜炎中人类腺病毒(HAdV)分型。方法在上海地区收集2015年1月至2017年8月病毒性结膜炎患者下结膜囊结膜拭子样本256份,提取DNA后通过PCR扩增六邻体蛋白及纤维蛋白全长,完成基因测序及种系发生学分析。结果89例(占34.76%)患者结膜拭子六邻体蛋白基因扩增阳性,包括HAdV-C1、HAdV-C2、HAdV-B3、HAdV-E4、HAdV-D8、HAdV-D19和HAdV-D37各1、7、20、6、23、17和15例,分别占1.12%、7.87%、22.47%、6.74%、25.84%、19.10%和16.85%,其六邻体蛋白种系发生学分析中均与相应参考序列原型聚合。纤维蛋白种系发生学分析中,15例HAdV-D19样本序列和1例HAdV-D37样本序列交叉聚合。结论针对六邻体蛋白和纤维蛋白基因的联合测序可以为HAdV分型和毒力分析提供丰富有效的生物学信息。 展开更多

关键词 人类腺病毒 病毒性结膜炎 腺病毒六邻体蛋白 纤维蛋白 序列分析 系统发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

柴芩感冒药对甲型流感病毒与腺病毒的体外抑制作用 被引量：2

12

作者 胡涛 龚蕴贞 +2 位作者 林维芬 黄升海 余莉 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第6期432-435,共4页

目的　研究柴芩感冒药对甲型流感病毒 (6 8 1,H3 N2 )与腺病毒 (AdV7)的体外抑制作用。方法　用微量细胞病变抑制法。按Reed Muench法计算 5 0 %病变抑制的药物浓度(IC50 ) ,实验重复 3次 ,并计算治疗指数 (TI)。结果　柴芩感冒药对甲... 目的　研究柴芩感冒药对甲型流感病毒 (6 8 1,H3 N2 )与腺病毒 (AdV7)的体外抑制作用。方法　用微量细胞病变抑制法。按Reed Muench法计算 5 0 %病变抑制的药物浓度(IC50 ) ,实验重复 3次 ,并计算治疗指数 (TI)。结果　柴芩感冒药对甲型流感病毒 (6 8 1,H3 N2 )和AdV7的IC50 分别是(4 0 5± 3 5 3)、(33 11± 3 2 2 )mg/L。TI值分别是 2 1和2 6 5 ;对照西药利巴韦林注射液对甲型流感病毒 (6 8 1,H3 N2 )和AdV7的IC50 分别是 (2 6 7± 1 48)mg/L和 (18 17± 0 35 )mg/L。TI值分别是 79和 12 0 ;对照中药金莲清热颗粒对流感病毒 (6 8 1,H3 N2 )IC50 为 35 4。TI值为 18;对腺病毒AdV7的IC50 未测到 (无效 )。结论　柴芩感冒药既可抗甲型流感病毒 (6 8 1,H3 N2 ) ,又可抗腺病毒 (AdV7)。 展开更多

关键词 流感病毒A型 腺病毒 中医药疗法

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导的LacZ基因在乳腺癌细胞中的表达 被引量：1

13

作者 颜世庆 林文玉 +1 位作者 王申五 孙卫东 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第3期218-220,共3页

目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长... 目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长没有明显影响。低温冻存可使病毒的感染性明显下降。结论：腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞中有高的转导效率，而病毒载体本身对细胞的生长没有影响，可用作乳癌特异药物前体酶激活基因治疗的基因转移方法。 展开更多

关键词 基因转移 腺病毒 基因疗法 乳腺肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装 被引量：3

14

作者 任充华 张婷婷 +3 位作者 杨涵江 王昕 陈知龙 张智英 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第7期39-43,50,共6页

【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经... 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因 重组腺病毒 细胞永生化

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导的CD基因在人胰腺癌细胞中的靶向性表达 被引量：1

15

作者 张世能 袁世珍 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第3期176-178,共3页

【目的】探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。【方法】将含癌胚抗原 (carcinoembryonicantigenCEA)启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌SW1990细胞 (CEA+ )、Capan 2细胞 (CE... 【目的】探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。【方法】将含癌胚抗原 (carcinoembryonicantigenCEA)启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌SW1990细胞 (CEA+ )、Capan 2细胞 (CEA-)和人宫颈癌Hela细胞 ,观察CD基因在 3种细胞中的表达及细胞对 5 FC的敏感性差异。【结果】腺病毒介导CD基因仅在SW1990细胞中呈专一性表达 ,转导CD基因的SW1990细胞对 5 FC的敏感性明显提高。【结论】含CEA启动子的CD基因疗法可能是胰腺癌靶向性基因治疗的可行途径。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 腺病毒 CD基因 基因治疗 靶向性表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

丙型肝炎病毒HLA-A2限制性复合多表位基因重组腺病毒的包装、筛选及鉴定

16

作者 韦三华 任继鸿 +7 位作者 刘丽 贾战生 董轲 林芳 王希 张利军 刘昕阳 张惠中 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第1期53-56,共4页

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将... 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep和腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-Ub-Mep,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒,并测定重组腺病毒滴度。结果经酶切鉴定、PCR鉴定和荧光分析,均证实得到重组的腺病毒。测定病毒滴度为1.2×1011cfu/L。结论成功包装出重组腺病毒rAd-Ub-Mep,构建了HCV HLA-A2限制性多表位基因的重组腺病毒疫苗,为进一步研究HLA-A2限制性复合多表位基因诱导的细胞免疫应答奠定了基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 表位 腺病毒 人

在线阅读 下载PDF 职称材料

人骨形态发生蛋白-2基因腺病毒载体异位成骨

17

作者 韩冬 李建军 +2 位作者 孙鸿斌 张巨 王健 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期985-988,F0002,共5页

目的:评价人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)基因腺病毒表达载体(recombinant adenoviral vectorcarrying the human BMP-2 gene,AdBMP-2)成骨能力并探讨其成骨机制。方法:应用AdBMP-2体外感染兔骨髓间质干细胞(BMSC),7 d后观察hBMP-2和碱性磷... 目的:评价人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)基因腺病毒表达载体(recombinant adenoviral vectorcarrying the human BMP-2 gene,AdBMP-2)成骨能力并探讨其成骨机制。方法:应用AdBMP-2体外感染兔骨髓间质干细胞(BMSC),7 d后观察hBMP-2和碱性磷酸酶(ALP)的表达,21 d后观察感染细胞钙结节形成能力。同时将AdBMP-2行裸鼠腓肠肌组织内注射,术后20 d取材,观察hBMP-2的表达及肌组织内异位成骨情况。结果:AdBMP-2可高效感染BMSC并获得hBMP-2的有效表达,ALP表达增高并形成钙结节。AdBMP-2在体内同样表达hBMP-2,并且以软骨化骨的方式启动成骨。结论:感染AdBMP-2的BMSC向成骨细胞分化,AdBMP-2在体内有着良好的成骨能力。 展开更多

关键词 腺病毒 人 骨形态发生蛋白类 基因 遗传载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导的反义AT1R转染对血管平滑肌细胞迁移的影响

18

作者 涂明利 涂远超 +6 位作者 曹政 王卫民 陈霞萍 王晓勋 王汉琴 王家宁 杨桂元 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期429-432,共4页

目的:观察腺病毒介导的反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法:用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制缺陷型重组腺病毒(AdCMV/ahAT1),转染体外培养的VSMCs,用RT-PCR半定量法和免疫组化法检... 目的:观察腺病毒介导的反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法:用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制缺陷型重组腺病毒(AdCMV/ahAT1),转染体外培养的VSMCs,用RT-PCR半定量法和免疫组化法检测AT1R的表达,用改良趋化小室法检测细胞迁移。结果:与对照组相比转染AdCMV/ahAT1后48h的VSMCs,AT1RmRNA表达少50％,AT1R的蛋白表达也显著低下(P<0.01);迁移距离为(41.7±9.7)μm,显著短于空白对照组(77.5±12.7)μm和Ad/CMV.LacZ组(77.2±10.6)μm,均为P<0.01。结论:腺病毒介导的反义hAT1R转染,通过抑制AT1R的表达,明显抑制了大鼠VSMCs的迁移。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 腺病毒 人 肌 平滑 血管 细胞运动

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒感染时抗体依赖细胞溶解效应的实验研究

19

作者 姜崇 陈远耀 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1993年第4期320-322,共3页

本文利用同位素释放法及胎盼蓝染色等技术进行实验。结果表明,受腺病毒感染的靶细胞在抗体致敏后,补体及抗体依赖性细胞毒细胞均未能诱发出特异的细胞溶解效应,即无补体素(CDC)及抗体依赖性细胞毒(ADCC),由此证明 在腺病毒感染后它们在... 本文利用同位素释放法及胎盼蓝染色等技术进行实验。结果表明,受腺病毒感染的靶细胞在抗体致敏后,补体及抗体依赖性细胞毒细胞均未能诱发出特异的细胞溶解效应,即无补体素(CDC)及抗体依赖性细胞毒(ADCC),由此证明 在腺病毒感染后它们在组织细胞的损伤中不起作用。提示:细胞免疫在腺病毒感染损伤中起中心作用;被输入的抗体能达到中和病毒、防止感染扩散的作用。 展开更多

关键词 腺病毒 感染 抗体 病毒 免疫学

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组胶质细胞源性神经营养因子腺病毒保护培养的原代脊髓运动神经元 被引量：2

20

作者 尚铁燕 万有 +1 位作者 姚磊 韩济生 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-19,共5页

目的 :观察胶质细胞源性神经营养因子 (gliacellline derivedneurotrophicfactor ,GDNF)重组腺病毒 (Ad CMVgdnf)对培养的原代脊髓运动神经元的保护作用。 方法 :原代培养的脊髓运动神经元转染不同滴度Ad CMVgdnf不同时间后计数 ,并计... 目的 :观察胶质细胞源性神经营养因子 (gliacellline derivedneurotrophicfactor ,GDNF)重组腺病毒 (Ad CMVgdnf)对培养的原代脊髓运动神经元的保护作用。 方法 :原代培养的脊髓运动神经元转染不同滴度Ad CMVgdnf不同时间后计数 ,并计算凋亡的运动神经元的百分率。 结果 :1 0 4 ～ 1 0 7pfu·ml 1 (pfu ,plaqueformunit)AdCMVgdnf的保护作用中 ,以 1 0 7pfu·ml 1 作用最显著 ,腺病毒的滴度过大或过小 ,保护作用都减弱 ;观察 1～ 9d不同转染时间的效果时 ,在第 3～ 9天均可观察到保护作用 ,以第 9天最明显 ,存活的运动神经元数比对照组增多2 80 % ,同时凋亡神经元的百分比较对照组减少 1 2 .9%。结论 :在一定的时间 (9天 )和合适的腺病毒滴度 (1 0 7pfu·ml 1 )条件下 ,腺病毒介导的GDNF对体外培养的脊髓运动神经元起到了保护作用。 展开更多

关键词 脊髓损伤 脊髓运动神经元 腺病毒 重组胶质细胞源性神经营养因子 培养 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料