中药复方病毒克对兔HCLV模型组织病毒含量影晌的研究

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作者 江平康 刘群 +4 位作者 周李 杨荣 康莲莲 王赛 毕琳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期41-43,46,共4页

探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药... 探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药复方制剂在对兔感染HCLV后脾脏、肠系膜淋巴结病毒增殖的变化情况。研究结果表明,高、中、低3个中药剂量组在连续5次给药后的24 h,即攻毒后的72、96、120、144 h,脾脏和肠系膜淋巴结中的HCLV含量低于对照组,脾脏中144 h病毒含量尤为明显(P<0.05),肠系膜淋巴结中72 h病毒含量尤为明显(P<0.05),说明该中药复方制剂在大剂量连续使用的情况下能明显抑制猪瘟兔化弱毒"C"株在淋巴结和脾脏中的增殖作用,并预示着这种抑制作用可能存在量效关系和时效关系。 展开更多

关键词 中药复方 猪瘟兔化弱毒“C”株 组织器官 含量

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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量：11

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作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页

【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(hclv) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度

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猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：6

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作者 刘大伟 张小飞 +3 位作者 胡来根 李郁 尹秀凤 毛火云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期446-450,共5页

为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/... 为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%～1.84%,批间变异系数为3.70%～5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 荧光定量RT—PCR 检测 初步应用

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荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系 被引量：10

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作者 葛叶 张兴娟 +5 位作者 朱庆虎 韩秋影 王牟平 李伟杰 孙建宏 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期699-703,共5页

为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低... 为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应。荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5 h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 荧光定量RT-PCR 兔体定型热试验

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猪瘟淋脾毒(耐热保护剂)活疫苗的热稳定性研究 被引量：4

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作者 刘业兵 张万林 +2 位作者 孙晔 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第1期22-24,共3页

通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2～ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准... 通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2～ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准的要求。经 4770余头份疫苗的田间试验 ,证明该产品安全、有效 ,且便于运输和使用 ,显示出良好的热稳定性能。 展开更多

关键词 耐热保护剂 猪瘟兔化弱毒疫苗 田间实验 猪瘟淋脾毒活疫苗 产品质量标准

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猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗的中试生产及区域试验 被引量：1

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作者 刘业兵 孙晔 +2 位作者 张万林 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第7期32-33,共2页

按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了 5批该疫苗的中试生产 ,计 15万头份 ,检验全部合格。在北京、河北等地选择 9个猪场进行区域试验 ,共免疫 3个品种约 3万余头猪 ,均安全、未显现任何不良反应 ... 按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了 5批该疫苗的中试生产 ,计 15万头份 ,检验全部合格。在北京、河北等地选择 9个猪场进行区域试验 ,共免疫 3个品种约 3万余头猪 ,均安全、未显现任何不良反应 ,跟踪观察 ,免疫过的猪未发生猪瘟 。 展开更多

关键词 猪瘟 淋脾毒耐热保护剂 活疫苗 中试生产 区域试验

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猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗保存期的测定及免疫保护试验 被引量：1

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作者 刘业兵 孙晔 +2 位作者 张万林 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第3期28-29,共2页

　对添加耐热保护剂的猪瘟淋脾毒活疫苗进行保存期的测定和保存后的免疫保护试验。结果表明,研制的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗在2～8℃条件下保存24个月后免疫猪,能100%抵抗猪瘟石门系强毒的攻击。

关键词 猪瘟淋脾毒活疫苗 耐热保护剂 保存期 免疫保护试验

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猪瘟兔化弱毒株E^(rns)基因在大肠埃希氏菌中的表达、纯化

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作者 王丽 杨艳艳 +3 位作者 张红 李清州 李学伍 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第12期121-123,127,共4页

将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子... 将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子量约为55kD,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45%。表达蛋白与兔抗CSFV多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。利用GST亲和层析柱对Erns融合蛋白进行了纯化。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 Erns基因 原核表达 纯化 猪瘟

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猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5

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作者 范斌 许文花 +4 位作者 韩建强 马志亮 胡骑 信爱国 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期56-61,共6页

为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活... 为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测的敏感度达1.20×105拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%~0.39%,批间变异系数为0.32%~0.61%。应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异。结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 实时荧光定量RT-PCR 病毒含量

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抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究——猪瘟病毒抗原的提纯 被引量：2

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作者 王承浩 周作红 +3 位作者 王亚鸣 王兴金 沈秋姑 徐兰芳 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1989年第1期36-44,共9页

本文介绍了用 PEG 和蔗糖密度梯度区带离心纯化猪瘟病毒的方法和步骤。先用 PEG 沉淀浓缩猪瘟兔化弱毒感染的牛睾丸细胞培养液,再经蔗糖密度梯度区带离心,出现4条区带,其中病毒感染力最强的位于Ⅱ带,其次为Ⅰ带,蛋白质含量多为0.14～0.1... 本文介绍了用 PEG 和蔗糖密度梯度区带离心纯化猪瘟病毒的方法和步骤。先用 PEG 沉淀浓缩猪瘟兔化弱毒感染的牛睾丸细胞培养液,再经蔗糖密度梯度区带离心,出现4条区带,其中病毒感染力最强的位于Ⅱ带,其次为Ⅰ带,蛋白质含量多为0.14～0.19毫克/毫升和0.21～0.12毫克/毫升。电镜检查可见带有膜囊的病毒粒子,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ带均各出现一条明显蓝色条带外,在它前后侧还隐约可见一条浅带。用这些方法浓缩提纯兔化猪瘟弱毒效果较好,且较简便易行。 展开更多

关键词 提纯 中国株猪瘟兔化弱毒 蔗糖密度梯度区带离心 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

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IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒病毒含量 被引量：13

11

作者 李晶梅 朱薇 +8 位作者 秦红刚 靖志强 廖园园 于义娟 肖敏 袁刚 谢红玲 漆世华 温文生 《中国兽药杂志》 2013年第10期35-38,共4页

使用间接免疫荧光方法(IFA)和过氧化物酶单层试验(IPMA)测定猪瘟兔化弱毒的病毒含量(TCID50)。两种方法都使用韩国JBT公司猪瘟单抗作为一抗,此单抗的稀释倍数最高为300倍。Trueblue过氧化物酶底物显色的、感染猪瘟兔化弱毒的阳性细胞呈... 使用间接免疫荧光方法(IFA)和过氧化物酶单层试验(IPMA)测定猪瘟兔化弱毒的病毒含量(TCID50)。两种方法都使用韩国JBT公司猪瘟单抗作为一抗,此单抗的稀释倍数最高为300倍。Trueblue过氧化物酶底物显色的、感染猪瘟兔化弱毒的阳性细胞呈现蓝色,易于辨识,所以确定Trueblue为IPMA方法中的酶作用底物。建立的的IFA和IPMA方法与兔体反应热法进行了比较,证明两者存在一定平行关系,但IFA和IPMA比兔体反应热法检测结果的数值低1个数量级左右。基于以上结果,TCID50方法可作为猪瘟疫苗效力检验的候选方法。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 TCID50 IPMA IFA

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猪瘟兔化弱毒间接免疫荧光鉴定方法的建立 被引量：4

12

作者 牛成明 姚静 +3 位作者 杨灵芝 杨琴 马景霞 朱杰 《中国动物检疫》 CAS 2016年第10期86-89,共4页

为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IF... 为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IFA检测HCLV感染的ST细胞清晰、特异,检测猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒感染细胞阴性。对不同猪瘟疫苗半成品的检测结果显示,IFA测定半数组织感染量(TCID50)与兔体定型热试验测定兔体感染量(RID)具有较好的相关性,其拟合曲线为RID/m L=2.783TCID50/m L+110107.213。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒(hclv) 间接免疫荧光试验 兔体感染量

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不同猪瘟病毒株在ST细胞上的增殖研究 被引量：5

13

作者 陈景容 《福建畜牧兽医》 2017年第3期9-11,共3页

在做荧光抗体检测病毒中和试验时,用不同毒株检测同一份血清样品经常出现不一样的效果。通过开展猪瘟病毒(兔化弱毒株)和猪瘟病毒(法国Thiveral株)在ST细胞上的增殖研究,掌握猪瘟活疫苗收获抗原的最佳时间,选择更好的毒株进行荧光抗体... 在做荧光抗体检测病毒中和试验时,用不同毒株检测同一份血清样品经常出现不一样的效果。通过开展猪瘟病毒(兔化弱毒株)和猪瘟病毒(法国Thiveral株)在ST细胞上的增殖研究,掌握猪瘟活疫苗收获抗原的最佳时间,选择更好的毒株进行荧光抗体检测病毒中和试验。结果表明:猪瘟病毒(兔化弱毒株)增值效果差,猪瘟病毒(法国Thiveral株)繁殖速度很快,在接种后30 h就能达到10^(5.4)TCID_(50)/mL,55 h达到最高峰10^(6.0)TCID_(50)/mL,72 h后呈平稳状态。 展开更多

关键词 ST细胞 猪瘟病毒(兔化弱毒株) 猪瘟病毒(法国Thiveral株)

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仙人掌提取物对断奶仔猪猪瘟抗体水平及其生长性能的影响

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作者 顾文松 葛洪伟 《饲料博览》 2014年第8期44-47,共4页

仙人掌提取物是一种新型中草药提取物,为研究其对断奶仔猪的免疫促进及其生产性能的作用,试验选用21日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪96头,随机分成4组,分别为对照组和3个试验组,试验期为42 d。在免疫前及免疫后第14、21、28、35... 仙人掌提取物是一种新型中草药提取物,为研究其对断奶仔猪的免疫促进及其生产性能的作用,试验选用21日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪96头,随机分成4组,分别为对照组和3个试验组,试验期为42 d。在免疫前及免疫后第14、21、28、35和42天从前腔静脉采血,分离血清,间接方法测定猪瘟抗体,于第14天称重。采用在整个保育期饲料中添加不同剂量的仙人掌提取物和猪瘟疫苗颈部接种断奶仔猪,研究猪瘟兔化弱毒疫苗与不同剂量仙人掌提取物处理后对断奶仔猪免疫机能及生长性能的影响。结果表明,仙人掌提取物按400mg·kg-1剂量添加与猪瘟疫苗使用,能够显著提高断奶仔猪猪瘟抗体水平,促进疫苗的免疫效果。同时发现不同剂量的仙人掌提取物组均能不同程度提高断奶仔猪生长性能。 展开更多

关键词 仙人掌提取物 猪瘟兔化弱毒疫苗 猪瘟抗体 日增重

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两种脾毒浓度对猪瘟活疫苗原料兔利用率的影响

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作者 林志坤 《福建畜牧兽医》 2016年第4期1-2,共2页

将原料兔随机分成两组(A、B),每组各4 772只。A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率(等同利用率... 将原料兔随机分成两组(A、B),每组各4 772只。A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率(等同利用率)为90.49%,变动幅度为±7.0%;B组的平均反应率为67.71%,变动幅度为±16.24%,差异极显著。同时,A组的变异系数低于B组,表明A组利用率批间稳定性优于B组。 展开更多

关键词 猪瘟活疫苗 猪瘟活疫苗种毒

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