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基于Fe_3O_4@SiO_2/Ni-NTA磁性微球的His-tag融合蛋白纯化体系的建立 被引量:6
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作者 王文加 郭晓林 +2 位作者 韦安慧 付常皓 韩振国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期303-307,共5页
合成了表面共价结合Ni-氨基三乙酸(Ni-NTA)基团的Fe3O4@SiO2微球,这种磁性微球可用于分离含有His-tag标签的融合蛋白.微球中心由尺寸约402 nm的Fe3O4微粒组成,赋予了微球极好的磁性分离和离心分离的特性.应用Fe3O4@SiO2/Ni-NTA磁性微球... 合成了表面共价结合Ni-氨基三乙酸(Ni-NTA)基团的Fe3O4@SiO2微球,这种磁性微球可用于分离含有His-tag标签的融合蛋白.微球中心由尺寸约402 nm的Fe3O4微粒组成,赋予了微球极好的磁性分离和离心分离的特性.应用Fe3O4@SiO2/Ni-NTA磁性微球对含有6×His-tag(6聚组氨酸)标签的蛋白进行了分离纯化,结果表明,10 mg Fe3O4@SiO2/Ni-NTA微球能够从10 mL重组蛋白裂解液中纯化出约1 mg带有6×His-tag标签的融合蛋白.微球的高效分离效果使其能够用于含量较低的带有6×His-tag标签蛋白的分离纯化. 展开更多
关键词 磁性微球 his-tag蛋白 亲和纯化 Ni-氨基三乙酸
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His-tag对亚油酸异构酶在大肠杆菌中可溶性表达的影响 被引量:1
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作者 张白曦 许正凯 +4 位作者 汪昶沛 陈海琴 宋元达 陈卫 张灏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期217-220,共4页
为了研究6×His-tag对来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶(PAI)可溶性重组表达的影响,我们构建了三种大肠杆菌重组菌株,表达了三种重组PAI:C端带有His-tag亲和标签、N端带有His-tag亲和标签和不加His-tag亲和标签。通过SDS-PAGE和Wes... 为了研究6×His-tag对来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶(PAI)可溶性重组表达的影响,我们构建了三种大肠杆菌重组菌株,表达了三种重组PAI:C端带有His-tag亲和标签、N端带有His-tag亲和标签和不加His-tag亲和标签。通过SDS-PAGE和Westernblot分析重组蛋白表达情况,并利用气相色谱检测酶活。实验结果表明:在相似的诱导表达条件及生长状态下,三种大肠杆菌重组菌株均成功表达了具有亚油酸异构酶活性的重组蛋白质,三种重组PAI的表达总量相当,6×His-tag的融合表达促进了PAI蛋白质包涵体的形成,而C端6×His-tag带来的影响最大。 展开更多
关键词 亚油酸异构酶 大肠杆菌 his-tag 可溶性
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嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达 被引量:2
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作者 潘渠 胡福泉 +3 位作者 陈恬 邱岳 王广科 李晋川 《成都医学院学报》 CAS 2009年第2期86-90,共5页
目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜酸乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特性做准备。方法从嗜酸乳杆菌ATCC4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b-lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在大肠杆菌中诱导表达,并测定表达产... 目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜酸乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特性做准备。方法从嗜酸乳杆菌ATCC4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b-lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在大肠杆菌中诱导表达,并测定表达产物的β-半乳糖苷酶活性。结果无标签的重组嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶LacZ获得了功能性表达,表达量可达2.28kU/L.而融合His-Tag的重组嗜酸乳杆菌LacZ却失去了β-半乳糖苷酶活性,即使复性也不能恢复。结论克隆表达的成功为该酶的酶学性质研究和可能的应用打下了基础。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 Β-半乳糖苷酶 克隆表达 his-tag 复性
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一种检测二恶英的单链抗体方法
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《化学分析计量》 CAS 2006年第2期12-12,共1页
本发明公开了一种检测二恶英的单链抗体方法。该单链抗体基因来源于小鼠,克隆到表达载体pET20b,在大肠杆菌BL21中表达,利用表达蛋白上带有的His-tag标记可通过亲和层析纯化单链抗体蛋白,并利用C-myc标记检测单链抗体蛋白。本发明克... 本发明公开了一种检测二恶英的单链抗体方法。该单链抗体基因来源于小鼠,克隆到表达载体pET20b,在大肠杆菌BL21中表达,利用表达蛋白上带有的His-tag标记可通过亲和层析纯化单链抗体蛋白,并利用C-myc标记检测单链抗体蛋白。本发明克隆到鼠源的抗二恶英类化学物质的单链抗体,该抗体能应用于检测二恶英类化学物质,检测成本低,应用前景广泛。 展开更多
关键词 单链抗体 二恶英类 抗体方法 检测 his-tag 抗体蛋白 化学物质 C-MYC 基因来源 表达载体
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