禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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作者 张玉倩 李长乐 +2 位作者 吕志航 姚鑫炎 张雪莲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期224-229,共6页

旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(D... 旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析ORF3蛋白的表达形式后进行纯化,并免疫新西兰白兔以获得兔抗ORF3蛋白多克隆抗体,利用间接ELISA试验检测多克隆抗体的效价,利用Western Blot试验和间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。结果显示,成功构建了pET-32a-ORF3重组原核表达质粒,并通过原核表达系统成功诱导表达了27 ku不可溶性的aHEV ORF3重组蛋白;Western Blot试验和IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别ORF3蛋白,ELISA结果显示,多克隆抗体效价为1∶51 200。成功表达CaHEV-GDSZ01株的ORF3蛋白,并制备了其多克隆抗体。 展开更多

关键词 禽戊型肝炎病毒 多克隆抗体 原核表达 免疫 ORF3蛋白

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西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究 被引量：1

2

作者 刘二战 赵国辉 +8 位作者 孙恩成 崔焕忠 杨涛 徐青元 孙晶 孙亮 席娜 魏天 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期881-884,共4页

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,... 为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,在细胞内完成病毒粒子的组装制备重组腺病毒。通过间接免疫荧光和western blot检测表明:重组腺病毒中的外源基因表达的融合蛋白NS1-2A-E可以自我裂解为NS1和E蛋白。将构建的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明该重组病毒可以诱导机体产生良好的体液免疫应答。本实验为WNV重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 西尼罗病毒 NS1 e 重组腺病毒 体液免疫

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表达PRRSVE基因重组质粒在小鼠诱导的体液免疫应答

3

作者 高云 杨汉春 +4 位作者 刘平黄 陈声 郭鑫 韩军 黄芳芳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第11期6-8,共3页

利用 PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) BJ- 4株的 E基因进行修饰和改造 ,在 E基因上游加入 Kozak序列 ,扩增并克隆 E基因。将 E基因 c DNA亚克隆至真核表达载体 pc DNA3.1(+)中 ,构建了真核重组表达质粒 pc DNA- E。用pc DNA- ... 利用 PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) BJ- 4株的 E基因进行修饰和改造 ,在 E基因上游加入 Kozak序列 ,扩增并克隆 E基因。将 E基因 c DNA亚克隆至真核表达载体 pc DNA3.1(+)中 ,构建了真核重组表达质粒 pc DNA- E。用pc DNA- E免疫小鼠 ,经免疫荧光抗体试验检测结果表明 ,重组质粒 pc DNA- E经 3次免疫后 ,所有小鼠血清抗体均为阳性 ,说明pc DNA- E在小鼠体内可诱导特异性的体液免疫应答反应。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 e基因 重组质粒 体液免疫应答 表达

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共表达牛病毒性腹泻病毒E0基因和牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的重组质粒DNA构建及其对小鼠的免疫效应 被引量：5

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作者 马小静 李梦莹 +5 位作者 张淮瑜 宋阿北 许立华 吴心华 张巧娥 李继东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期154-165,共12页

本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果,旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考。采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-IRES... 本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果,旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考。采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-IRES中,构建pVAX1-E0-IRES-gD重组真核表达载体;将pVAX1-E0-IRES-gD转染至293T细胞中,间接免疫荧光法检测目的基因在细胞中的表达情况;将pVAX1-E0-IRES-gD以不同剂量采用肌内注射的方式接种小鼠,通过抗体水平和细胞因子检测以及脾淋巴细胞增殖试验对该重组质粒的免疫效果进行评价。结果表明,成功构建pVAX1-E0-IRES-gD重组质粒,目的基因在293T细胞内成功表达。在抗体和细胞因子水平以及脾淋巴细胞增殖能力这3个指标,重组质粒组均极显著高于空载体和阴性对照组,高剂量免疫组优于中、低剂量组;另外,高剂量重组质粒免疫组与二联灭活疫苗组相比无显著性差异。结果显示,成功构建了共表达BVDV E0和IBRV gD基因的重组质粒,体外表达检测证明目的蛋白具有良好的反应原性,动物免疫试验证明其能刺激机体产生良好免疫应答。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 e0 牛传染性鼻气管炎病毒 gD 重组质粒 共表达 免疫效果

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HBsAg水平对ALT正常的HBeAg阳性慢性HBV感染者肝脏炎症发生的预测价值 被引量：10

5

作者 曾湛 高媛娇 +7 位作者 毕潇月 陈凤欣 邓雯 蒋婷婷 林妍洁 杨柳 李明慧 谢尧 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期1030-1034,共5页

目的探讨ALT正常且高病毒载量的HBeAg阳性慢性HBV感染者人群的肝炎发生情况及预测因素。方法本研究临床注册号为NCT04032275。回顾性选取2008年10月—2015年5月ALT正常、高病毒载量、HBeAg阳性的慢性HBV感染者183例,根据其肝穿刺活检结... 目的探讨ALT正常且高病毒载量的HBeAg阳性慢性HBV感染者人群的肝炎发生情况及预测因素。方法本研究临床注册号为NCT04032275。回顾性选取2008年10月—2015年5月ALT正常、高病毒载量、HBeAg阳性的慢性HBV感染者183例,根据其肝穿刺活检结果分为肝炎组和无肝炎组。计量资料两组间比较采用t检验或Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。使用单因素二元logistics回归分析预测因素,使用逐步后退法进行多因素二元logistics回归,使用受试者工作特征曲线(ROC)和约登指数分析截断值。结果肝炎组37例(20.2%),无肝炎组146例(79.8%),肝炎组的男性比例低于无肝炎组(45.9%vs 68.5%,χ^(2)=6.508,P=0.011)、AST高于无肝炎组[24(21.25~35.55)U/L vs 21.2(18.08~24.65)U/L,Z=-3.344,P=0.001]、HBsAg log值低于无肝炎组[4.4(4.28~4.49)vs 4.46(4.4~4.74),Z=-2.184,P=0.029]。HBsAg log值是肝炎发生的预测因素(OR=0.077,P=0.017)。HBsAg的截断值为33884.4 IU/mL。结论ALT正常、高病毒载量的HBeAg阳性患者中有20.2%肝脏存在炎症,HBsAg或许是肝脏炎症发生的预测因素。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 乙型肝炎表面抗原 乙型肝炎e抗原 免疫耐受 炎症

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戊型肝炎病毒感染调控宿主抗病毒信号通路的研究进展 被引量：1

6

作者 钟国 陈冬雪 +1 位作者 魏大巧 黄芬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期782-789,共8页

先天免疫是抵御病毒感染的第一道防线。戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染免疫健全人群导致急性自限性疾病,但免疫功能低下患者或孕妇感染HEV后会导致慢性化感染。HEV感染宿主细胞后,体内的模式识别受体(pattern recognition rec... 先天免疫是抵御病毒感染的第一道防线。戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染免疫健全人群导致急性自限性疾病,但免疫功能低下患者或孕妇感染HEV后会导致慢性化感染。HEV感染宿主细胞后,体内的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)将识别病毒基因组,进而诱导宿主多条抗病毒信号通路快速激活,使干扰素(Interferons,IFNs)和干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)表达,从而抑制病毒的复制。而HEV编码的蛋白参与了逃逸宿主的抗病毒先天免疫反应,抑制宿主细胞因子或趋化因子的产生,从而建立适宜病毒复制的环境。现将HEV感染对宿主信号通路的调控以及HEV逃逸宿主先天免疫的研究进行综述。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 先天免疫 信号通路 免疫逃逸 干扰素

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戊型病毒性肝炎研究进展 被引量：34

7

作者 夏宁邵 张军 +5 位作者 李少伟 葛胜祥 吴婷 郑子峥 吴文翰 史维国 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期431-436,共6页

戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越... 戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越引起人们的重视.由我国自主创新研制的重组戊型肝炎疫苗现已在中国完成世界上首个Ⅲ期临床试验,其预防戊型肝炎的保护率达到100%（95%CI,72.1%~100.0%）. 展开更多

关键词 戊型病毒性肝炎 戊型肝炎病毒 e2 诊断试剂 重组戊型肝炎疫苗

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戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同 被引量：10

8

作者 赵宇 梁久红 +4 位作者 孟继鸿 张兰芳 张红梅 丁福 季晓辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期591-595,共5页

目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 ... 目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 p16 6MexMcAbs的杂交瘤细胞株 ,然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEVORF2编码蛋白p16 6的免疫反应性。结果 :获得 4株杂交瘤细胞株 ,即分泌抗 p16 6BurMcAbs的 2C2 、2B1 以及分泌抗 p16 6MexMcAbs的D8G1 0 和E5E1 2 ,其中 2B1 分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合 ,而其余 3株分泌的McAbs既能与I、II基因型HEV的p16 6重组蛋白发生反应 ,也能与III、IV基因型的p16 6蛋白反应。结论 :HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 抗原表位 单克隆抗体 重组蛋白 基因型

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戊型肝炎病毒ORF2片段与ORF3嵌合重组抗原的纯化与免疫学性质 被引量：3

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作者 唐浩 马雁冰 +6 位作者 杜瑞娟 乐耕耘 李春宏 庄俊英 刘勇 孙茂盛 戴长柏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期382-385,共4页

目的 考察具有多个优势抗原表位区段嵌合表达的戊型肝炎病毒（HEV）重组抗原的免疫学性质。方法 将构建的含有3个不同HEV抗原表位基因(ORF2．1: 6287 ～ 6403nt, ORF2．2: 6743 ～ 7126nt, ORF3)的表达质粒pThioHisORF(2．1＋2．2＋3 )... 目的 考察具有多个优势抗原表位区段嵌合表达的戊型肝炎病毒（HEV）重组抗原的免疫学性质。方法 将构建的含有3个不同HEV抗原表位基因(ORF2．1: 6287 ～ 6403nt, ORF2．2: 6743 ～ 7126nt, ORF3)的表达质粒pThioHisORF(2．1＋2．2＋3 )在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，其表达产物P_(2．1＋2．2＋3 )在8 mol/L尿素下经阳离子柱SP Sepharose FF层析纯化，透析复性。以P_(2．1＋2．2＋3 )免疫家兔和小鼠, 通过ELISA检测实验动物血清及戊型肝炎患者阳性血清IgG抗体，以Western蛋白印迹检测动物免疫血清对杆状病毒系统表达的抗原片段及嵌合抗原P_(2．1＋2．2＋3 )对患者阳性血清的免疫反应性。结果 纯化的抗原纯度达90%以上；免疫动物血清中检测到特异性抗体的滴度分别为1∶25 600（家兔）和1∶12 800（小鼠）以上，抗血清能够特异识别杆状病毒系统表达的HEV抗原片段，P_(2．1＋2．2＋3 )能与患者阳性血清特异反应。结论 嵌合表达的HEV重组抗原P_(2．1＋2．2＋3 )具有良好的免疫原性和免疫反应性，为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 重组 纯化 免疫

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与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究 被引量：20

10

作者 丁福 孟继鸿 +5 位作者 张兰芳 程险峰 张汇东 贺星亮 杨志国 许家璋 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期52-55,共4页

目的　用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法　用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并... 目的　用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法　用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果　在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论　用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 易感性 重组蛋自 双抗原夹心法eLISA 逆转录巢式PCR

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禽戊型肝炎血清学调查以及与肝脾肿大综合征关系的研究 被引量：17

11

作者 张璐 周恩民 +6 位作者 崔治中 董施伟 荆胜涛 彭军 孙陪明 孙淑红 秦卓明 《中国家禽》 北大核心 2008年第20期22-24,共3页

禽戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)是肝脾肿大(hepatitis-splenomegaly,HS)综合征的主要病原。禽HEV与人和猪HEV均属于肝病毒属。我们的前期研究结果表明基因重组禽HEV的ORF2蛋白含有其独有的抗原表位,同时含有与人、猪HEV共有的抗... 禽戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)是肝脾肿大(hepatitis-splenomegaly,HS)综合征的主要病原。禽HEV与人和猪HEV均属于肝病毒属。我们的前期研究结果表明基因重组禽HEV的ORF2蛋白含有其独有的抗原表位,同时含有与人、猪HEV共有的抗原表位。本研究用禽HEVORF(Open Reading Frame)2-1蛋白作为包被抗原所建立的检测血清抗体的间接ELISA对从山东、广东、黑龙江采集的914份鸡血清进行了血清学检测,用疑似肝脾肿大综合征鸡肝组织感染SPF鸡群,检测攻毒后血清中可能存在的抗禽HEVORF2抗体。检测结果显示健康鸡群的抗体阳性率平均为28.5%,而患有肝脾肿大综合征的鸡群中的阳性率则为43.3%。用疑似肝脾肿大综合征鸡肝组织感染的SPF鸡群血清抗禽HEVORF2抗体的阳性率则高达62.5%。本研究进一步阐明了禽HEV在我国部分地区的流行状况以及与HS的直接关系。 展开更多

关键词 禽戊型肝炎病毒 血清学调查 ORF2重组蛋白 肝脾重大综合征

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一种新型戊型肝炎病毒样颗粒的表达、纯化及其免疫原性 被引量：15

12

作者 董晨 孟继鸿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期339-342,共4页

目的：以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒（HEV）中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法：将HEV开放阅读框架2（ORF2）编码452～617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a（＋）,转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA... 目的：以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒（HEV）中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法：将HEV开放阅读框架2（ORF2）编码452～617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a（＋）,转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA层析柱纯化表达的蛋白,并用SDS-PAGE、Western blot和直接电镜负染等方法分析鉴定,最后免疫小鼠检测特异性抗体的产生水平.结果：表达的重组蛋白天然可溶,相对分子质量（Mr）约为22 000,并可形成直径为20 nm左右的病毒样颗粒,能与戊型肝炎患者血清发生Westem blot阳性反应,免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性抗体.体外中和试验显示产生的抗体具有中和HEV的活性.结论：原核表达的、含HEV中和抗原表位的、长度仅166个氨基酸的HEV ORF2近3＇端编码蛋白能够形成病毒样颗粒,而且该新型病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性. 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 重组蛋白 中和抗原表位 病毒样颗粒

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载体和基因片段的选择对戊型肝炎病毒基因免疫抗原表达的影响 被引量：4

13

作者 房雪峰 王立新 +3 位作者 孟继鸿 董晨 田华 翟理杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-25,共4页

目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1... 目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平。结果成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达。结论载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 基因免疫 中和抗原表位 基因表达

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戊型肝炎的病原学及流行病学研究 被引量：18

14

作者 庄辉 刘崇柏 +1 位作者 曹学义 王光明 《北京医科大学学报》 CSCD 1992年第4期281-284,共4页

本文对我国戊型肝炎的流行病学、病原学、动物实验感染、临床、组织病理学及预防进行了研究。戊型肝炎主要侵犯青壮年;儿童和老人发病较少;男性多于女性;主要经污染的水和食物传播。从戊型肝炎病人和实验感染HEV猕猴粪便中检测到HEV并获... 本文对我国戊型肝炎的流行病学、病原学、动物实验感染、临床、组织病理学及预防进行了研究。戊型肝炎主要侵犯青壮年;儿童和老人发病较少;男性多于女性;主要经污染的水和食物传播。从戊型肝炎病人和实验感染HEV猕猴粪便中检测到HEV并获得HEV cDNA克隆。中国和缅甸株HEV核甙酸和氨基酸的同源性分别为94.3％和99.6％。对562例戊型肝炎病人的临床特点和7例黄疸型成型肝炎病人的肝活检组织病理学改变进行了分析。随机双盲对照试验证明,血清免疫球蛋白对控制戊型肝炎无效。 展开更多

关键词 戊型肝炎 免疫球蛋白

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猪源戊型肝炎病毒ORF2部分基因的原核表达及其鉴定 被引量：2

15

作者 欧阳昀 张亮权 +5 位作者 刘志刚 齐海涛 徐廷川 张民泽 张超逸 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期86-89,共4页

本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。... 本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 ORF2基因 重组质粒 原核表达

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一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段 被引量：1

16

作者 张红梅 孟继鸿 +1 位作者 戴星 单祥年 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期483-487,共5页

目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472～617)和pN477-C613(aa477～613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间... 目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472～617)和pN477-C613(aa477～613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价,并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果:pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV,阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制;而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论:重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力,是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段,可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 重组蛋白 中和抗原表位 中和抗体

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戊型肝炎病毒感染研究概况 被引量：3

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作者 李文贵 段新慧 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期99-103,共5页

戊型肝炎病毒(HEV)以肝脏为主要靶器官,人感染后表现典型的病毒性肝炎,多呈急性经过。肝脏移植患者、混合感染HIV者及接受化疗的血液病患者可引起慢性感染,迅速导致肝硬化。戊型肝炎的症状及病变与基因型有密切相关。HEV含3个开放阅读框... 戊型肝炎病毒(HEV)以肝脏为主要靶器官,人感染后表现典型的病毒性肝炎,多呈急性经过。肝脏移植患者、混合感染HIV者及接受化疗的血液病患者可引起慢性感染,迅速导致肝硬化。戊型肝炎的症状及病变与基因型有密切相关。HEV含3个开放阅读框架(ORF),ORF2编码病毒衣壳蛋白,包裹病毒基因组形成新的病毒粒子,ORF3编码的蛋白可辅助转运新病毒粒子至宿主细胞膜。HEV感染可引起机体的有效免疫应答,自然杀伤细胞(NK)和T细胞介导HEV感染免疫应答中起关键作用。妊娠期间免疫系统的功能和性激素水平的波动,直接影响到孕妇体内的HEV复制,加剧了急性肝衰竭发生的频率。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 病毒性肝炎 致病机制 免疫应答

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圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查 被引量：1

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作者 张成林 丁叶 +5 位作者 闫鹤 普天春 佘锐萍 尹君 杨明海 张金国 《野生动物》 2013年第6期323-326,共4页

采用ELISA、巢式RT-PCR、免疫组织化学等多种方法对北京动物园保存的大熊猫组织材料和部分现存活个体的粪便、血清等样品进行戊型肝炎病毒抗原调查。调查发现在死亡大熊猫肝脏组织中戊肝病毒抗原阳性检出率为88.9%(8/9),肾脏的阳性检出... 采用ELISA、巢式RT-PCR、免疫组织化学等多种方法对北京动物园保存的大熊猫组织材料和部分现存活个体的粪便、血清等样品进行戊型肝炎病毒抗原调查。调查发现在死亡大熊猫肝脏组织中戊肝病毒抗原阳性检出率为88.9%(8/9),肾脏的阳性检出率为85.7%(6/7)。现活体动物的粪便、血清抗原检查没有出现阳性结果。结果说明死亡大熊猫曾感染过戊型肝炎病毒,现有个体中没有戊肝病毒感染。 展开更多

关键词 大熊猫 戊型肝炎病毒(HeV) 免疫组化 巢式RT—PCR eLISA

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抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

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作者 赵宇 陈文学 +1 位作者 孟继鸿 季晓辉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期368-369,385,共3页

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联... 目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性克隆,并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株(Burmastrain)和美国株(USAstrain)的重组蛋白(p166Bur、p166US)进行交叉反应测定。结果:最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株,即D8G10、E5E12、D4A3、B7E6。其中D8G10,E5E12和B7E6细胞株的培养上清液,还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论:利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体,初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Bur、p166US、p166Mex)含有一种共同的抗原表位。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 重组蛋白 单克隆抗体 抗原表位 制备

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表达戊型肝炎病毒ORF2蛋白的重组腺病毒构建及其经粘膜途径免疫小鼠 被引量：3

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作者 董雪 胡金勇 +3 位作者 谢天宏 孙茂盛 戴长柏 马雁冰 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期324-328,共5页

目的构建可表达戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)ORF2蛋白(112-660aa)的重组腺病毒Adasy-EORF2,探讨其经鼻腔和腹腔免疫小鼠后,诱导机体产生特异性体液免疫和粘膜免疫应答的能力,为研制戊型肝炎疫苗探索新的途径。方法经PCR扩增编码O... 目的构建可表达戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)ORF2蛋白(112-660aa)的重组腺病毒Adasy-EORF2,探讨其经鼻腔和腹腔免疫小鼠后,诱导机体产生特异性体液免疫和粘膜免疫应答的能力,为研制戊型肝炎疫苗探索新的途径。方法经PCR扩增编码ORF2蛋白(112-660aa)的基因片段,将其连接于重组腺病毒Adasy系统的穿梭质粒pTrack-CMV上,与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化宿主菌BJ5183,经细菌内同源重组获得重组腺病毒基因组质粒,转染293细胞以产生、扩增重组腺病毒。将重组腺病毒以107pfu的剂量经鼻腔和腹腔免疫小鼠,通过ELISA检测血液IgG和粘膜IgA的应答情况。结果重组腺病毒经鼻腔免疫小鼠后可刺激机体产生特异性IgA、IgG免疫应答,IgG最高滴度达1∶1000。经腹腔免疫可刺激小鼠产生IgG免疫应答,最高滴度可达1∶10000,未检测到明显的IgA应答。结论表达HEVORF2蛋白的重组腺病毒能刺激机体产生有效的免疫应答,具有成为新型戊型肝炎疫苗的潜力。 展开更多

关键词 重组腺病毒 戊型肝炎病毒 疫苗

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