hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响 被引量：5

1

作者 李红梅 宋天保 +4 位作者 于月成 曹云新 王红英 宋晖 张明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期243-246,共4页

目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法... 目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段。测序正确后,利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTER-Tpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。用脂质体转染法,将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况,以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用。结果:经酶切鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确。转染hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后,SKOV3细胞的增殖受到抑制,出现明显凋亡。结论:hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达,并发挥其促凋亡作用。构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体,可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径。 展开更多

关键词 htert基因核心启动子 TRAIL基因 表达载体 卵巢癌细胞 凋亡

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绵羊瘤胃上皮细胞VTN基因启动子转录调控特性研究

2

作者 钟秉潜 苏比奴尔·艾力 +3 位作者 朱爱文 孙岩 王玉涛 闫伟 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3527-3539,共13页

【目的】探究绵羊瘤胃上皮细胞玻连蛋白(vitronectin,VTN)基因核心启动子的转录活性及转录因子CCCTC-结合因子(CCCTC-bindingfactor,CTCF)基因过表达对VTN等基因表达的影响。【方法】通过在线生物信息学分析软件预测绵羊VTN基因启动子... 【目的】探究绵羊瘤胃上皮细胞玻连蛋白(vitronectin,VTN)基因核心启动子的转录活性及转录因子CCCTC-结合因子(CCCTC-bindingfactor,CTCF)基因过表达对VTN等基因表达的影响。【方法】通过在线生物信息学分析软件预测绵羊VTN基因启动子核心区域并设计6对启动子缺失片段引物,采集湖羊血液提取DNA,克隆VTN基因CDS区上游6个启动子缺失片段区域,构建荧光素酶重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic、L4-basic、L5-basic及L6-basic,转染绵羊瘤胃上皮细胞,并以荧光素酶报告基因试验验证启动子活性区域位置。通过在线生物信息学分析软件预测转录因子CTCF与VTN基因启动子的结合位点,以绵羊瘤胃上皮细胞为材料,提取RNA后进行反转录,克隆绵羊CTCF基因CDS区,构建CTCF基因的过表达载体,与VTN基因启动子重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic及L4-basic共转染绵羊瘤胃上皮细胞,以单独转染的重组质粒为对照组,通过荧光素酶报告基因试验验证以确定转录因子CTCF可能结合VTN基因启动子的核心区域;利用实时荧光定量PCR分析CTCF基因过表达转染组CTCF、VTN、C-MYC、GLUT1与SP1基因的表达情况。【结果】试验成功构建绵羊VTN基因启动子区6个重组荧光素酶报告载体。生物信息学网站预测与荧光素酶报告基因试验结果显示,VTN基因核心启动子可能位于―933/―440bp处,且转录因子CTCF可能与VTN基因启动子核心区域存在互作。CTCF基因过表达后,与对照组相比,VTN、C-MYC与GLUT1基因表达量显著降低(P<0.05),而SP1基因表达量则无显著变化(P>0.05)。【结论】绵羊瘤胃上皮细胞中转录因子CTCF可能主要结合VTN基因启动子的区域(―439/+26bp)与核心区域(―933/―440bp)影响VTN基因表达,且CTCF基因过表达影响VTN、C-MYC、GLUT1基因转录,提示CTCF基因潜在影响绵羊瘤胃上皮细胞生长增殖与物质代谢。 展开更多

关键词 绵羊 VTN基因 核心启动子 瘤胃上皮细胞 CTCF基因

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乙型肝炎病毒核心启动子区基因异质性及对其转录活性的影响 被引量：23

3

作者 刘妍 董菁 +5 位作者 皇甫竞坤 成军 韩萍 牟劲松 李克 钟彦伟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期128-130,共3页

从慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染患者外周血中扩增核心启动子 (CP)基因序列 ,克隆入pGEM Teasy质粒 ,随机挑选克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果提示 ,HBV长期携带者体内有准种共存 ,CP区内存在热点缺失突变及散在点突变。为了... 从慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染患者外周血中扩增核心启动子 (CP)基因序列 ,克隆入pGEM Teasy质粒 ,随机挑选克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果提示 ,HBV长期携带者体内有准种共存 ,CP区内存在热点缺失突变及散在点突变。为了进一步探讨CP区基因异质性对其转录活性的影响 ,将野生株及不同缺失突变的CP基因片段克隆入pcDNA3 1( )载体的EcoRI位点 ,筛选反向克隆 ,经KpnI和XhoI双酶切后克隆入氯霉素乙酰转移酶 (CAT )报告基因表达载体pCAT3 basic上 ,构建重组报告质粒。以Lipofec taminePLUS转染试剂转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,用ELISA方法检测CAT表达量 ,反映了CAT基因上游启动子的转录活性。结果显示 ,成功构建了重组报告质粒 ,与野生株比较 ,HBVCP区准种群的存在不同程度地降低了CP基因的转录活性。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心启动子 异质性 报告基因 基因转染 HBV

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hTERT启动子调控的HSV-tk基因逆转录病毒载体的构建及SKOV3转染细胞的生物学特性观察 被引量：3

4

作者 郭玉忠 姜国忠 +3 位作者 李克虹 史惠蓉 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第4期566-569,共4页

目的 :观察转染有人端粒酶逆转录酶基因 (humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控的单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (herpessimplexvirusthymidinekinase ,HSV tk)基因的人卵巢癌细胞的部分生物学特性。方法 :构建hTERT启动... 目的 :观察转染有人端粒酶逆转录酶基因 (humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控的单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (herpessimplexvirusthymidinekinase ,HSV tk)基因的人卵巢癌细胞的部分生物学特性。方法 :构建hTERT启动子调控的HSV tk基因重组逆转录病毒载体 ,筛选携带该载体的包装细胞 ,测定包装细胞产生的逆转录病毒滴度 ,并用病毒颗粒感染人卵巢癌SKOV3细胞 (SKOV3/tk细胞 )并经RT PCR方法鉴定。然后倒置显微镜下观察SKOV3/tk细胞形态 ,MTT法研究细胞生长特性 ,并观察转染细胞裸鼠体内的成瘤能力。结果 :包装细胞产生的病毒滴度可达 2× 1 0 3 cfu·ml-1 。SKOV3/tk细胞扩增出 770bp的tk基因片段 ,形态与SKOV3细胞无明显差异 ;倍增时间 72h ,无明显变化 ;裸鼠体内的成瘤能力较SKOV3细胞下降。结论 :hTERT调控的HSV tk基因逆转录病毒载体构建成功 ; 展开更多

关键词 htert启动子 HSV-TK基因 卵巢癌细胞 逆转录病毒载体

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乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析 被引量：5

5

作者 方钟燎 庄辉 +7 位作者 杨进业 葛宪民 王学燕 龚健 李荣成 王佑春 Roger Ling Tim J Harrison 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期183-184,共2页

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、176... 用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。 展开更多

关键词 肝硬化 HBV前C区 基本核心基因启动子 序列分析 乙型肝炎

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hTERT核心启动子调控的hNIS重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：3

6

作者 张俊 王爱东 +4 位作者 申咏梅 石怡珍 崔学军 刘增礼 欧阳松应 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期549-553,共5页

目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶... 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用AdEasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照。应用RT-PCR方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性。结果:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS并经PCR验证正确。RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。结论:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS;hTERT核心启动子在转染的肺癌A549细胞中具有转录活性。为下一步的碘治疗实验提供了实验依据。 展开更多

关键词 钠碘转运体(hNIS) 端粒酶逆转录酶(htert) 重组腺病毒 核心启动子

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hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达载体的构建与功能研究

7

作者 张志伟 贺修胜 +2 位作者 罗招阳 李艳兰 曹建国 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期416-425,共10页

为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感... 为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感染肺癌A549细胞,检测hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对细胞形态、细胞生长、细胞凋亡以及Caspase-3表达的影响.另外,观察hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对裸鼠成瘤的抑制作用、瘤组织细胞的凋亡及Caspase-3表达情况.结果发现:a.hTERT启动子核心区能调控rVBMDMP基因的表达(n=3,P<0.05);b.hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6,P<0.05);c.rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达.以上结果说明,hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后,通过提高Caspase-3的表达水平,促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长. 展开更多

关键词 htert启动子 rVBMDMP基因 细胞凋亡 CASPASE-3蛋白

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HRE增强hTERT启动子-tk/GCV基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的杀伤作用

8

作者 胡薇 艾永兴 +1 位作者 郑梅竹 张玉静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期14-19,F0002,共7页

目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因表达的重组逆转录... 目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因表达的重组逆转录病毒载体,在脂质体介导下分别转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。将重组病毒感染人肺癌细胞SPC-A1和人肝癌细胞Bel-7402,G418筛选出抗性克隆肿瘤细胞。实验分为对照组、SPC-A1/tk组和Bel-7402/tk组。在缺氧处理条件下,MTT法检测前体药物丙氧鸟苷(GCV)对SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞的杀伤效应,流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果:与对照组比较,缺氧环境培养的SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞对GCV的敏感性明显增强,其中细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞周期各期细胞数有所减少(P<0.05)。与hTERT启动子引导的tk基因系统组细胞比较,[HRE]hTERT杂合启动子引导的tk基因系统组肿瘤细胞存活率更低(P<0.01),诱导肿瘤细胞凋亡率明显升高(P<0.01),G1期和G0期细胞数有所增高(P<0.05),S期细胞数减少(P<0.05)。结论:HRE能增强hTERT启动子-tk/GCV自杀基因系统对缺氧环境中肿瘤细胞的体外杀伤作用。 展开更多

关键词 肿瘤 htert启动子 缺氧反应元件 HSV—tk基因 缺氧

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银黑狐MC1R基因核心启动子区的鉴定 被引量：2

9

作者 刘华云 张磊 +5 位作者 徐桂利 张天浩 谢遇春 段玲欣 刘铮铸 巩元芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期2442-2450,共9页

【目的】确定银黑狐黑素皮质激素受体1(melanocortin 1 receptor,MC1R)基因的核心启动子区,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据。【方法】以银黑狐基因组DNA为模板,PCR扩增获得MC1R基因5′-UTR区序列,利用3个在线生物学软件综合预... 【目的】确定银黑狐黑素皮质激素受体1(melanocortin 1 receptor,MC1R)基因的核心启动子区,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据。【方法】以银黑狐基因组DNA为模板,PCR扩增获得MC1R基因5′-UTR区序列,利用3个在线生物学软件综合预测MC1R基因启动子活性区;PCR扩增获得该基因5′-UTR区不同长度的缺失片段,并克隆至pMD19-T载体,将重组质粒转染至黑色素B16细胞中,利用双荧光素酶检测技术对10个缺失片段进行荧光素酶活性检测。【结果】成功获得银黑狐MC1R基因5′-UTR区序列,软件预测显示-596/+73 bp可能为启动子活性区。双荧光素酶活性检测发现,构建的10个缺失片段的荧光素酶表达载体均具有启动子活性,其中pGL3-MC1RP8(-520/+73 bp)有较强的活性,提示其为核心启动子区,与软件预测结果基本一致。【结论】试验确定了银黑狐MC1R基因的核心启动子区为―520/+73 bp,为深入研究该基因的毛色调控机制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 银黑狐 MC1R基因 启动子 核心区

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鸡PERP1基因功能分析、核心启动子筛选及其转录因子预测 被引量：2

10

作者 陈林 王家乡 +3 位作者 吴艳 皮劲松 张颖 李成凤 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3449-3458,共10页

【目的】研究TP53凋亡效应因子(PERP1)在卵泡发育中的调控作用及表达机制。【方法】以蛋鸡卵巢组织为材料,克隆蛋鸡PERP1基因CDS区全长序列,并构建PERP1基因过表达载体,通过转染鸡卵泡颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR检测转染后PERP1基因... 【目的】研究TP53凋亡效应因子(PERP1)在卵泡发育中的调控作用及表达机制。【方法】以蛋鸡卵巢组织为材料,克隆蛋鸡PERP1基因CDS区全长序列,并构建PERP1基因过表达载体,通过转染鸡卵泡颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR检测转染后PERP1基因,增殖凋亡相关基因BCL2、c-Myc,以及氧化应激相关基因SOD2、CAT的相对表达量。利用3个在线生物信息学分析软件分别预测鸡PERP1基因核心启动子区,并根据预测结果设计6个启动子缺失片段引物,以蛋鸡血液组织为材料,克隆PERP1基因5′-UTR的6个启动子缺失片段并构建重组质粒,并以荧光素酶报告基因试验验证启动子活性区域位置。采用4个转录因子在线预测软件进行启动子活性区转录因子的预测分析。【结果】本研究成功获得鸡PERP1基因的CDS区全长序列并成功构建了PERP1基因的过表达载体。PERP1基因过表达后,与对照组相比,抗凋亡基因BCL2和促增殖基因c-Myc表达量极显著下调(P<0.01),抗氧化应激基因CAT和SOD2的相对表达量无显著差异(P>0.05)。生物信息学软件预测和荧光素酶报告载体试验结果表明,PERP1基因核心启动子位于CDS区上游(―441/―71 bp)的位置。转录因子预测结果发现Sp1、ZEB1、Zic3、c-Jun、AP-2alpha、AP-1、NF-1、c/EBPalp、Adf-1、HNF-3、CACCC-bi、c-Myc和Smad4共13个候选转录因子。【结论】PERP1基因具有促进颗粒细胞凋亡的功能,调控该基因的表达对卵泡发育具有重要意义。 展开更多

关键词 鸡 PERP1基因 核心启动子 颗粒细胞 转录因子

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猪CYP11A1基因编码区扩增及核心启动子区的鉴定与分析 被引量：1

11

作者 曾强 关钦泽 +2 位作者 王思琪 李齐发 杜星 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期743-751,共9页

[目的]本文旨在扩增猪CYP 11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP 11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP 11A1基因编码区全序列并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性鉴定猪CYP 11A1基因核心... [目的]本文旨在扩增猪CYP 11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP 11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP 11A1基因编码区全序列并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性鉴定猪CYP 11A1基因核心启动子区,再通过生物信息学分析猪CYP 11A1基因核心启动子区潜在的甲基化位点与转录因子结合位点;利用Western blot、RT-qPCR以及染色质免疫沉淀(ChIP)等分子生物学手段解析转录因子NR2C1对猪CYP 11A1基因的转录调控功能。[结果]猪CYP 11A1基因的编码区序列全长为1563 bp,在哺乳动物的进化过程中高度保守;猪CYP 11A1基因的核心启动子区为-398~-108 bp(转录起始位点为+1),序列特征分析发现猪CYP 11A1基因核心启动子区包含多个潜在的转录因子的结合元件,包括NR2C1、SOX10、NFIX和ELF5等;另外,转录因子NR2C1可促进猪CYP 11A1基因核心启动子区活性,同时显著上调体外培养的猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的表达。[结论]哺乳动物CYP 11A1基因在进化过程中高度保守,转录因子NR2C1能够促进猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的转录。 展开更多

关键词 猪 CYP11A1基因 核心启动子 鉴定 分析 NR2C1 转录调控

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MicroRNA-4279通过靶向核心启动子区域上调Notch-1基因表达进而抑制细胞凋亡

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作者 彭高 黄卓琼 +2 位作者 罗海华 刘超 张意军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期641-649,共9页

【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用... 【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用进行实验验证;通过突变核心启动子上的结合位点进一步确定该miRNA特异性靶向基因核心启动子区域。检测转染该miRNA后H9细胞中Notch-1的mRNA与内源蛋白表达水平。另外通过转染该miRNA并用H2O2诱导凋亡,研究该miRNA对H9细胞凋亡的影响。进一步在上述实验条件下,使用siRNA降低靶基因(Notch-1)的表达,然后检测miRNA对H9细胞系的凋亡的影响。【结果】首先通过软件预测,我们发现了miR-4279可以与Notch-1的核心启动子序列结合。荧光素酶报告实验表明miR-4279可以增强Notch-1启动子的转录活性;而在miR-4279的靶位点引入突变后,该增强作用消失。RT-qPCR和Western Blot实验表明miR-4279能够显著增强内源Notch-1 mRNA与蛋白的表达。H2O2诱导凋亡实验表明,miR-4279可以抑制H9细胞的凋亡。siRNA干扰实验表明,当Notch-1通路被抑制后,miR-4279导致的细胞凋亡抑制的效果消失。【结论】miR-4279通过靶向Notch-1基因核心启动子区域,特异性增加Notch-1基因的表达,进而增强H9细胞对H2O2诱导的凋亡的抗性。 展开更多

关键词 miR-4279 核心启动子 Notch-1基因 凋亡 H9细胞系

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c-myc调节人端粒酶逆转录酶(htert)启动子活性的体外研究 被引量：10

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作者 林勇 谢渭芬 +4 位作者 陈伟忠 张新 张兴荣 张忠兵 沈建伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期34-36,共3页

目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有... 目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有htert 80 0bp启动子的质粒TERTLuc(80 0 )在肿瘤细胞HepG2 中活性显著增强。外源性转录因子c myc可显著上调htert启动子的表达 ,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 :c myc可直接激活htert启动子的表达 ,是调节端粒酶活性的重要转录因子。 展开更多

关键词 C-MYC 人端粒酶逆转录酶 htert 启动子 基因调控 脂质体 肝癌细胞

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人NPCEDRG基因启动子的克隆及CCAAT/NFY结合位点初步分析 被引量：12

14

作者 侯德富 关勇军 +3 位作者 关瑞 欧阳咏梅 余艳辉 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期713-723,共11页

NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子... NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,联合应用生物信息学和报告基因载体系统分析方法对NPCEDRG基因启动子区进行克隆及功能分析,系统发育进化足迹分析结果表明,NPCEDRG基因5′端调控区-180～+235 bp区间在脊椎动物中高度保守,该保守区域中存在包括CCAAT/NFY、STAT1和SP1等转录因子结合位点.构建Luc和/或EGFP报告基因表达载体并检测其启动子活性,-146～-8 bp区域有较强的启动子活性,电泳迁移阻滞分析实验(EMSA)提示,CCAAT/NFY转录因子结合位点是NPCEDRG基因的转录调控元件.因此,研究确定-146～-8 bp区域是NPCEDRG基因核心启动子区域且启动子核心元件CCAAT/NFY可能参与NPCEDRG基因的转录调控. 展开更多

关键词 NPCEDRG基因 核心启动子 转录调控 CCAAT/NFY结合位点

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端粒酶启动子调控tk基因靶向性杀伤鼻咽癌细胞的实验研究 被引量：4

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作者 徐芳 文忠 +3 位作者 邱元正 肖健云 赵素萍 郭梦和 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期695-699,共5页

目的探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应。方法通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的... 目的探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应。方法通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的效应及其tk基因、端粒酶表达。结果转染hTERTp/tk/pGL3后可见tk基因表达,端粒酶及其hTERT表达较对照组下降。hTERTp/tk/pGL3能特异性杀伤鼻咽癌HNE1细胞,而对正常成纤维细胞无杀伤作用,hTERTp/tk/pGL3杀伤细胞的效应比阳性对照CMV/tk/pGL3的无选择性杀细胞作用略低。结论hTERTp/tk基因特异表达系统具有靶向性杀伤鼻咽癌细胞的作用及抑制肿瘤细胞端粒酶活性。 展开更多

关键词 htert启动子 tk自杀基因 鼻咽癌 靶向基因治疗

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NCOA2核心启动子甲基化分析及其与肾周和皮下脂肪组织差异表达的关系 被引量：6

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作者 李艳 孙文星 +3 位作者 徐春瑛 褚维伟 谷淑华 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期131-136,共6页

为探讨核受体辅激活蛋白2(NCOA2)基因启动子区甲基化水平与其在肾周脂肪组织及皮下脂肪组织中差异表达的相关性,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测NCOA2基因在肾周脂肪组织和皮下脂肪组织中的表达水平;通过构建系列NCOA2基因5'... 为探讨核受体辅激活蛋白2(NCOA2)基因启动子区甲基化水平与其在肾周脂肪组织及皮下脂肪组织中差异表达的相关性,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测NCOA2基因在肾周脂肪组织和皮下脂肪组织中的表达水平;通过构建系列NCOA2基因5'侧翼区缺失表达载体,并采用双荧光素酶报告系统鉴定NCOA2基因核心启动子区;在分析核心启动子区CpG岛的基础上,采用亚硫酸氢盐测序(BSP)法测定NCOA2基因核心启动子区CpG岛甲基化水平。结果表明:肾周脂肪组织中NCOA2基因的mRNA表达水平显著低于皮下脂肪组织;NCOA2基因核心启动子区位于-483^-179 bp;预测发现该区域存在1个CpG岛,BSP法表明该区域内的25个CpG位点在皮下和肾周脂肪组织均为非甲基化状态,无明显组织差异性。结论:肾周脂肪组织和皮下脂肪组织中NCOA2基因表达存在显著差异,而核心启动子区甲基化状态没有参与差异调控。 展开更多

关键词 NCOA2基因 肾周脂肪 皮下脂肪 核心启动子 甲基化

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人端粒酶催化亚基启动子联合mad1基因体外抑制膀胱癌细胞的研究 被引量：1

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作者 罗春丽 蔡晓钟 +3 位作者 邹琳 唐敏 胡宏波 吴小候 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1338-1341,共4页

目的探讨人端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子联合mad1基因对膀胱癌细胞T24和EJ细胞的生长抑制作用及机制。方法采用细胞计数、电子显微镜、流式细胞术、RT-PCR及免疫组化等方法,观察hTERT启动子联合mad... 目的探讨人端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子联合mad1基因对膀胱癌细胞T24和EJ细胞的生长抑制作用及机制。方法采用细胞计数、电子显微镜、流式细胞术、RT-PCR及免疫组化等方法,观察hTERT启动子联合mad1基因表达质粒转染T24和EJ细胞后的膀胱肿瘤细胞的增殖能力、生长周期、细胞超微结构的变化以及hTERT和TGF-β1mRNA基因和蛋白表达影响。结果转染hTERT启动子联合mad1基因后对T24和EJ细胞生长有明显抑制作用、出现凋亡小体和细胞周期相的改变,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞明显增多,下调T24和EJ细胞hTERT和TGF-β1的mRNA表达,并能抑制hTERT和TGF-β1蛋白表达。结论hTERT启动子联合mad1基因能够抑制膀胱肿瘤细胞的增殖能力,可望为膀胱癌基因治疗提供新思路。 展开更多

关键词 htert启动子 mad1基因 膀胱癌细胞 基因治疗

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HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建 被引量：2

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作者 彭劼 骆抗先 +3 位作者 林裕龙 侯金林 郭亚兵 王战会 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第11期806-808,818,共4页

目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具，采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ... 目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具，采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，鉴定和测 序分析等技术构建目的载体。结果　成功构建了ＨＢＶ全基因ＣＰ ２０／２１个ｂｐ缺失（ｎｔ １７４８／１７４７－１７６７）和ＣＰ２０／２１个ｂｐ 缺失＋１８９６热点变异的重组真核质粒表达质粒，并经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ序列分析证实。结论　此重组真核表达质粒构建可为 体外进一步研究上述变异的生物学意义奠定基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心启动子 基因缺失 基因重组 CP HBV 质粒

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hTERT启动子驱动的肿瘤抑素靶向肝癌细胞表达及其抗血管形成的作用 被引量：1

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作者 李倩倩 邓志华 +1 位作者 郎伟宁 贺丹丹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期251-257,共7页

目的:观察人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的肿瘤抑素(tamsta-tin)基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用。方法:构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin(阳性对照)、... 目的:观察人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的肿瘤抑素(tamsta-tin)基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用。方法:构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin(阳性对照)、phTERT-EGFP(阴性对照)质粒,脂质体介导转染HepG2肝癌细胞、L-02正常肝细胞,荧光显微镜检测EGFP的表达。Western blotting检测tumstatin在HepG2细胞内的表达,MTS法检测稳定转染后HepG2细胞的增殖以及含或不含tumstatin蛋白的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖的影响。通过计数管样分支数检测tumstatin蛋白对HUVEC管道结构形成的影响。结果:成功构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin和phTERT-EGFP质粒,质粒转染后tumstatin基因在肝癌细胞HepG2中特异地表达,在正常肝细胞L-02中无表达。phTERT-tumstatin和phTERT-EG-FP转染均不影响HepG2细胞的增殖。含tumstatin蛋白的条件培养基CM-T抑制HUVEC的增殖[抑制率为(56.49±0.33)%];CM-T与不含tumstatin蛋白的条件培养基CM-N、CM-NT相比显著抑制了HUVEC血管结构的形成[(3.33±1.53)%vs(24.44±3.11)%、(23.94±2.92)%,P<0.01)]。结论:phTERT基因启动子可驱动tumstatin靶向表达于肝癌细胞,并抑制HUVEC血管管道结构形成。 展开更多

关键词 肿瘤抑素 肝肿瘤 htert启动子 基因治疗 抗血管生成

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人端粒酶逆转录酶核心启动子调控的人TRAIL蛋白在人卵巢癌细胞中的表达 被引量：2

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作者 李红梅 于月成 +4 位作者 宋天保 辛晓燕 张明 魏晓丽 许静洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1106-1109,共4页

目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真... 目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。采用脂质体介导的方法将hTERT调控的TRAIL基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;应用免疫细胞化学法、蛋白质印迹分析、流式细胞术(FCM)结合间接免疫荧光、RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达。结果:经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确。转染细胞中的TRAIL表达明显高于对照组细胞。结论:成功地构建了hTRET基因核心启动子调控的TRAIL基因真核表达载体,并在人卵巢癌细胞系SKOV3中得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶基因核心启动子 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 基因治疗 卵巢癌细胞

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