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重组胶质细胞生长因子2蛋白的原核表达及纯化
被引量：
1
1
作者
薛亚军
赵耀东
+3 位作者
董艳
蔡如珏
卢亦成
楼美清
《生物医学工程与临床》
CAS
2012年第2期181-185,共5页
目的通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白。方法将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJ18质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。表达载体转...
目的通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白。方法将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJ18质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。表达载体转染4种宿主菌,筛选合适者。优化表达时程和IPTG诱导剂量。GGF2大量表达后回收包涵体,复性。复性产物利用His Bind树脂进一步纯化。纯化产物用Western blot鉴定。结果测序鉴定表明,成功构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。筛选结果表明Origami B(DE3)为合适宿主菌。适宜的表达条件为30℃诱导前扩增,浓度25μmol/L IPTG,37℃诱导2 h。所表达外源蛋白相对分子质量和预期一致。回收、纯化后得到纯度约为96%的产物。Western blot鉴定表明所获为GGF2重组蛋白。结论原核表达方法得到足量GGF2重组蛋白。
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关键词
胶质细胞生长因子
2
原核表达
蛋白纯化
pET-3
2
b
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职称材料
铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究
被引量：
1
2
作者
张勇
程敬亮
+1 位作者
李华丽
王娟
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2010年第8期744-747,共4页
目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μ...
目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μg/ml(28 μg/ml标记组)、56 μg/ml(56 μg/ml标记组)和112 μg/ml(112 μg/ml标记组);另取无铁培养液的BMSCs作为对照组。各组BMSCs经DMSO+丁羟茴醚诱导6 h后,分别采用RT PCR和Western blot法检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的mRNA表达和nestin表达。结果与对照组比较,不同浓度标记组nestin、NSE和GFAP的mRNA均呈高表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。各组nestin表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 14～112μg/ml的SHU555A标记浓度对大鼠BMSCs向神经样细胞分化无明显影响。
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关键词
间质干细胞
细胞分化
成纤维细胞生长因子
2
磷酸丙酮酸水合酶
神经胶质原纤维酸性蛋白质
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职称材料
题名
重组胶质细胞生长因子2蛋白的原核表达及纯化
被引量：
1
1
作者
薛亚军
赵耀东
董艳
蔡如珏
卢亦成
楼美清
机构
同济大学附属第十人民医院神经外科
上海长征医院神经外科
出处
《生物医学工程与临床》
CAS
2012年第2期181-185,共5页
基金
国家自然科学基金资助(811011909)
文摘
目的通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白。方法将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJ18质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。表达载体转染4种宿主菌,筛选合适者。优化表达时程和IPTG诱导剂量。GGF2大量表达后回收包涵体,复性。复性产物利用His Bind树脂进一步纯化。纯化产物用Western blot鉴定。结果测序鉴定表明,成功构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。筛选结果表明Origami B(DE3)为合适宿主菌。适宜的表达条件为30℃诱导前扩增,浓度25μmol/L IPTG,37℃诱导2 h。所表达外源蛋白相对分子质量和预期一致。回收、纯化后得到纯度约为96%的产物。Western blot鉴定表明所获为GGF2重组蛋白。结论原核表达方法得到足量GGF2重组蛋白。
关键词
胶质细胞生长因子
2
原核表达
蛋白纯化
pET-3
2
b
Keywords
glial growth factor 2
prokaryotic expression
protein purification
pET-3
2
b
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究
被引量：
1
2
作者
张勇
程敬亮
李华丽
王娟
机构
郑州大学第一附属医院放射科
出处
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2010年第8期744-747,共4页
基金
河南省杰出人才计划(84200510012)
郑州市科技攻关计划(083SGYS33262-5)
文摘
目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μg/ml(28 μg/ml标记组)、56 μg/ml(56 μg/ml标记组)和112 μg/ml(112 μg/ml标记组);另取无铁培养液的BMSCs作为对照组。各组BMSCs经DMSO+丁羟茴醚诱导6 h后,分别采用RT PCR和Western blot法检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的mRNA表达和nestin表达。结果与对照组比较,不同浓度标记组nestin、NSE和GFAP的mRNA均呈高表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。各组nestin表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 14～112μg/ml的SHU555A标记浓度对大鼠BMSCs向神经样细胞分化无明显影响。
关键词
间质干细胞
细胞分化
成纤维细胞生长因子
2
磷酸丙酮酸水合酶
神经胶质原纤维酸性蛋白质
Keywords
mesenchymal stem cells
cell differentiation
fibroblast
growth
factor
2
phosphopyruvate hydratase
glial
fibrillary acidic protein
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组胶质细胞生长因子2蛋白的原核表达及纯化
薛亚军
赵耀东
董艳
蔡如珏
卢亦成
楼美清
《生物医学工程与临床》
CAS
2012
1
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职称材料
2
铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究
张勇
程敬亮
李华丽
王娟
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2010
1
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