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重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性被引量：2: 1; 作者曾令娥黄晶 +3 位作者白惠卿范慧黄大无王露《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期684-687,共4页; 目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯... 展开更多; 关键词 DNA聚合酶 I/生物合成人血清白蛋白重组融合蛋白质类/生物合成 DNA聚合酶 I klenow片段; 在线阅读下载PDF 职称材料

In-fusion连接技术优化及其在大片段重组载体构建中的应用被引量：3: 2; 作者李玲玲张伟 +3 位作者宋玲珍胡新德陈树林赵善廷《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期1-7,共7页; 随着大规模基因组测序的完成和表达序列标签数据库的建立,基因组的研究已由结构基因组向功能基因组转化,而基因功能研究的关键是基因融合技术。为高效率高保真地构建融合大片段的重组载体,本试验利用In-fusion技术进行大片段载体构建,... 展开更多; 关键词基因融合 In—fusion 大片段PCR扩增产物优化重组载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因被引量：2: 3; 作者刘定燮李德祥骆抗先《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期60-61,共2页; 目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体ｐｃＤＮＡ３，用ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取ＨＢＶｐｒｅＳ／... 展开更多; 关键词基因重组 klenow大片段乙型肝炎病毒部分补平法克隆 preS/S基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析被引量：1: 4; 作者王明永张雅妮 +3 位作者雷鸣左大明张丽芸陈政良《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期731-735,共5页; 目的获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白。方法以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA... 展开更多; 关键词破伤风毒素C蛋白基因克隆重组表达免疫原性模式抗原; 在线阅读下载PDF 职称材料

玉米DNA限制性片段长度多态(RFLPs)的研究被引量：2: 5; 作者季良越罗福和《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1993年第2期120-126,共7页; 文章简要介绍了10余年来有关玉米DNA限制性片段长度多态(RFLPs)的研究,说明RFLP的分析原理和特点,构建玉米RFLP连锁图的方法,以及玉米RFLPs在遗传育种中的主要应用。; 关键词杂交数量性状遗传玉米; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性被引量：2: 1; 作者曾令娥黄晶白惠卿范慧黄大无王露; 机构北京医学高等专科学校北京大学基础医学院免疫学系; 出处《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期684-687,共4页; 文摘目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯化 ,并进行活性及稳定性的研究。结果 :发现Klenow HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达。体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性 ,其稳定性明显提高。结论 :融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性。; 关键词 DNA聚合酶 I/生物合成人血清白蛋白重组融合蛋白质类/生物合成 DNA聚合酶 I klenow片段; Keywords DNA polymerase Ⅰ/biosyn Serum albumin recombinant fusion proteins/biosyn klenow fragment of DNA polymerase Ⅰ; 分类号 TQ464.7 [化学工程—制药化工]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名In-fusion连接技术优化及其在大片段重组载体构建中的应用被引量：3: 2; 作者李玲玲张伟宋玲珍胡新德陈树林赵善廷; 机构西北农林科技大学动物医学院; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期1-7,共7页; 基金西北农林科技大学人才专项基金(№Z111021101); 文摘随着大规模基因组测序的完成和表达序列标签数据库的建立,基因组的研究已由结构基因组向功能基因组转化,而基因功能研究的关键是基因融合技术。为高效率高保真地构建融合大片段的重组载体,本试验利用In-fusion技术进行大片段载体构建,以不同的融合时间进行比较,通过细胞转染以及免疫印迹等方法对载体质量进行验证。通过对体系中连接时间的优化,构建出了含插入片段10、8、4ku的真核表达载体,并可正确表达。In-fusion技术的优化,提高了大片段真核表达载体构建的效率,为研究大片段基因的生物学功能奠定了基础。; 关键词基因融合 In—fusion 大片段PCR扩增产物优化重组载体; Keywords gene fusion In-fusion large DNA fragments of PCR amplification recombinant vector; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因被引量：2: 3; 作者刘定燮李德祥骆抗先; 机构第一军医大学南方医院感染内科解放军; 出处《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期60-61,共2页; 文摘目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体ｐｃＤＮＡ３，用ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取ＨＢＶｐｒｅＳ／Ｓ基因片段。ｐｃＤＮＡ３的ＸｂａｌＩ及ｐｒｅＳ／Ｓ基因的Ｈｉｎｄ Ⅲ切口端经Ｋｌｅｎｏｗ大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰后的ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段与ｐｃＤＮＡ３并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示ｐｒｅＳ／Ｓ基因被定向克隆于载体ｐｃＤＮＡ３的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配ＤＮＡ粘性末端的较好选择。; 关键词基因重组 klenow大片段乙型肝炎病毒部分补平法克隆 preS/S基因; Keywords gene recombinant, klenow fragment hepatitis B virus; 分类号 R373 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析被引量：1: 4; 作者王明永张雅妮雷鸣左大明张丽芸陈政良; 机构南方医科大学免疫学教研室; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期731-735,共5页; 基金广东省自然科学基金研究团队项目(015003)~~; 文摘目的获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白。方法以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA琼脂糖柱分离目的蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性。结果获得1373bp的TTC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a(+)-TTC并在大肠杆菌中表达。TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22%,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5%的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1∶25600。结论所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原。; 关键词破伤风毒素C蛋白基因克隆重组表达免疫原性模式抗原; Keywords tetanus toxin fragment C gene cloning recombinant expression immunogenicity model antigen; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名玉米DNA限制性片段长度多态(RFLPs)的研究被引量：2: 5; 作者季良越罗福和; 机构河南农业大学农学系; 出处《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1993年第2期120-126,共7页; 文摘文章简要介绍了10余年来有关玉米DNA限制性片段长度多态(RFLPs)的研究,说明RFLP的分析原理和特点,构建玉米RFLP连锁图的方法,以及玉米RFLPs在遗传育种中的主要应用。; 关键词杂交数量性状遗传玉米; Keywords restriction fragment polymorphism probe southern blot hybridization gene mapping linkage map recombination inbred quantitative trait loci genetic distance cluster analysis; 分类号 S513.032 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性	曾令娥黄晶白惠卿范慧黄大无王露	《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2002	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	In-fusion连接技术优化及其在大片段重组载体构建中的应用	李玲玲张伟宋玲珍胡新德陈树林赵善廷	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2014	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因	刘定燮李德祥骆抗先	《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心	2001	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析	王明永张雅妮雷鸣左大明张丽芸陈政良	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	玉米DNA限制性片段长度多态(RFLPs)的研究	季良越罗福和	《河南农业大学学报》 CAS CSCD	1993	2	在线阅读下载PDF 职称材料