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伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株微滴数字PCR鉴别方法的建立
被引量：
14
1
作者
兰德松
魏澍
+1 位作者
顾贵波
侯振中
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期1137-1141,1156,共6页
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和Taq Man探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的dd PCR方法。结果显示,本...
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和Taq Man探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的dd PCR方法。结果显示,本研究建立的dd PCR方法能够特异性地鉴别检测PRV野毒株和疫苗株,与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应;该方法针对PRV gD、gE基因的检测限分别为3.9拷贝/μL、2.3拷贝/μL,分别比相应的荧光定量PCR (qPCR)方法敏感性高10倍和5倍;针对PRV gD、gE基因的批内和批间重复性试验结果变异系数(C.V)均小于4%;通过对45份临床样品的检测,结果显示,与病毒分离方法相比,dd PCR方法敏感性为91.7%,特异性为97.2%,符合率为97.8%;与dd PCR方法相比,q PCR的敏感性为83.3%,特异性为94.3%,符合率为95.6%。本研究建立的dd PCR方法在检测低拷贝临床样品时敏感性更高、特异性强、重复性好,可以作为PRV野毒株与疫苗株的鉴别、准确定量的有效检测手段。
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关键词
伪狂犬病病毒
野毒
株
ge基因缺失疫苗株
微滴数字PCR
鉴别
定量检测
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职称材料
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立
被引量：
5
2
作者
兰德松
顾贵波
侯振中
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第7期1804-1812,共9页
为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法...
为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法,对引物和探针浓度、退火温度等进行了优化,对方法进行敏感性、特异性、重复性试验,并进行临床样品检测。结果显示,建立的针对gD、gE基因的TaqMan实时荧光定量PCR方法线性相关系数(R2)分别为0.996和0.980,均呈良好的线性关系;检测限分别为39.4和12.1拷贝/μL;与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验结果显示,针对gD基因的批内和批间变异系数分别为1.43%~1.86%、1.10%~2.07%,针对gE基因的批内和批间变异系数分别为0.98%~1.41%、1.12%~1.86%。应用建立的TaqMan实时荧光定量PCR与普通PCR分别对11份临床疑似感染样品进行检测,阳性率分别为36.4%和27.3%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株的早期鉴别诊断和定量检测的有效手段。
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关键词
伪狂犬病病毒(PRV)
野毒
株
ge基因缺失疫苗株
TaqMan实时荧光定量PCR
鉴别
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职称材料
题名
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株微滴数字PCR鉴别方法的建立
被引量：
14
1
作者
兰德松
魏澍
顾贵波
侯振中
机构
东北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学重点实验室
辽宁省动物疫病预防控制中心
辽宁省动物医学研究院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期1137-1141,1156,共6页
基金
辽宁省"百千万人才工程"资助项目(2016921040)
文摘
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和Taq Man探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的dd PCR方法。结果显示,本研究建立的dd PCR方法能够特异性地鉴别检测PRV野毒株和疫苗株,与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应;该方法针对PRV gD、gE基因的检测限分别为3.9拷贝/μL、2.3拷贝/μL,分别比相应的荧光定量PCR (qPCR)方法敏感性高10倍和5倍;针对PRV gD、gE基因的批内和批间重复性试验结果变异系数(C.V)均小于4%;通过对45份临床样品的检测,结果显示,与病毒分离方法相比,dd PCR方法敏感性为91.7%,特异性为97.2%,符合率为97.8%;与dd PCR方法相比,q PCR的敏感性为83.3%,特异性为94.3%,符合率为95.6%。本研究建立的dd PCR方法在检测低拷贝临床样品时敏感性更高、特异性强、重复性好,可以作为PRV野毒株与疫苗株的鉴别、准确定量的有效检测手段。
关键词
伪狂犬病病毒
野毒
株
ge基因缺失疫苗株
微滴数字PCR
鉴别
定量检测
Keywords
pseudorabies virus
wild-type strain
ge
-deleted vaccine strain
droplet digital PCR
differentiation
quantitative detection
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立
被引量：
5
2
作者
兰德松
顾贵波
侯振中
机构
东北农业大学动物医学院
农业部动物疫病病原生物学重点实验室
辽宁省动物疫病预防控制中心
辽宁省动物医学研究院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第7期1804-1812,共9页
基金
辽宁省"百千万人才工程"资助项目(2016921040)
文摘
为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法,对引物和探针浓度、退火温度等进行了优化,对方法进行敏感性、特异性、重复性试验,并进行临床样品检测。结果显示,建立的针对gD、gE基因的TaqMan实时荧光定量PCR方法线性相关系数(R2)分别为0.996和0.980,均呈良好的线性关系;检测限分别为39.4和12.1拷贝/μL;与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验结果显示,针对gD基因的批内和批间变异系数分别为1.43%~1.86%、1.10%~2.07%,针对gE基因的批内和批间变异系数分别为0.98%~1.41%、1.12%~1.86%。应用建立的TaqMan实时荧光定量PCR与普通PCR分别对11份临床疑似感染样品进行检测,阳性率分别为36.4%和27.3%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株的早期鉴别诊断和定量检测的有效手段。
关键词
伪狂犬病病毒(PRV)
野毒
株
ge基因缺失疫苗株
TaqMan实时荧光定量PCR
鉴别
Keywords
pseudorabies virus （PRV）
wild strain
ge
-deleted vaccine strain
TaqMan Real-time PCR
differentiation
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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1
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株微滴数字PCR鉴别方法的建立
兰德松
魏澍
顾贵波
侯振中
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
14
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职称材料
2
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立
兰德松
顾贵波
侯振中
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
5
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