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知母糖基转移酶UGT708Z1基因的克隆与功能分析
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作者 张倩 纪中菊 +4 位作者 李志新 董子舒 刘红宁 王晓云 黄佳 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第10期2800-2809,共10页
目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因... 目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因克隆;通过同源重组技术构建pET-32a(+)-UGT708Z1重组质粒,并利用原核表达和纯化蛋白技术获得可溶性目的蛋白。最后,采用体外酶促反应对UGT708Z1进行功能鉴定。结果 序列分析表明UGT708Z1的开放阅读框为1377 bp,编码458个氨基酸。原核表达结果显示,UGT708Z1成功表达出可溶性目的蛋白,纯化后重组蛋白大小为70.86 kDa。体外酶促反应结果表明,UGT708Z1具有类黄酮7-OH糖基化活性,能够催化淫羊藿素生成淫羊藿次苷Ⅰ。此外,UGT708Z1还具有催化槲皮素和芹菜素的7-O-糖基化活性的功能。结论 本研究从知母中成功克隆并鉴定出一个黄酮醇糖基转移酶UGT708Z1,为后续深入解析黄酮醇苷的生物合成奠定基础。 展开更多
关键词 知母 糖基转移酶 基因克隆 原核表达 功能表征
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甘薯抗病基因及其功能的研究进展
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作者 杨冬静 高方园 +5 位作者 马居奎 唐伟 陈晶伟 梁昭 张成玲 孙厚俊 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期1021-1030,共10页
甘薯是重要的粮食、饲料和能源作物,中国是世界上最大的甘薯种植国,甘薯在中国国民经济中占有十分重要的地位。近年来随着气候变化和种薯、种苗地频繁调运,甘薯病害发生日趋严重,新病害不断产生,严重影响甘薯的产量和品质,制约了中国甘... 甘薯是重要的粮食、饲料和能源作物,中国是世界上最大的甘薯种植国,甘薯在中国国民经济中占有十分重要的地位。近年来随着气候变化和种薯、种苗地频繁调运,甘薯病害发生日趋严重,新病害不断产生,严重影响甘薯的产量和品质,制约了中国甘薯产业的健康发展。分子生物技术的快速发展给甘薯抗病分子育种研究提供了新的技术支撑和研究思路。本文主要从甘薯抗真菌病、抗细菌病、抗线虫病以及抗病毒病相关基因等方面概述了近年来甘薯抗病相关基因及其功能的研究进展,为甘薯抗病基因的进一步研究和抗病分子育种提供参考。 展开更多
关键词 甘薯 基因克隆 真菌 细菌 线虫 基因功能 抗病性
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水稻矮化多分蘖基因DT1的图位克隆与功能分析 被引量:2
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作者 李春梅 陈洁 +7 位作者 郎兴宣 庄海民 朱靖 杜梓君 冯浩天 金涵 朱国林 刘凯 《作物学报》 北大核心 2025年第2期347-357,共11页
分蘖是影响水稻株型和产量的重要性状。本研究获得一个稳定遗传的矮化多分蘖自然突变体dt1 (dwarf and tillering 1)。此外, dt1突变体穗长、结实率、粒长、粒宽、千粒重、维管束鞘细胞数量及大小较野生型均显著降低。图位克隆证实dt1... 分蘖是影响水稻株型和产量的重要性状。本研究获得一个稳定遗传的矮化多分蘖自然突变体dt1 (dwarf and tillering 1)。此外, dt1突变体穗长、结实率、粒长、粒宽、千粒重、维管束鞘细胞数量及大小较野生型均显著降低。图位克隆证实dt1突变体是由编码独脚金内酯生物合成途径关键酶类胡萝卜素裂解双加氧酶(Carotenoid Cleavage Dioxygenase7,CCD7)的D17/HTD1(LOC_Os04g46470)第2个外显子上8bp的插入导致的,是一个D17/HTD1的新等位突变。此外, dt1突变体萌发率、根长、根直径均显著降低,外施独脚金内酯类似物GR24能恢复dt1突变体的这些表型。转录组测序结果显示, dt1突变体有579个基因上调, 506个基因下调。GO分析显示上调基因显著富集在生长素响应、内源刺激响应和激素响应等通路,下调基因显著富集在胞内碳水化合物代谢和组蛋白甲基化等通路。KEGG分析显示上调基因在植物激素信号转导等通路显著富集,下调基因在氨基糖和核苷酸糖代谢及二萜生物合成等通路上显著富集。研究结果丰富和拓展了CCD7和独脚金内酯在水稻中的调控作用,对水稻育种具有重要理论意义。 展开更多
关键词 水稻 矮化多分蘖 图位克隆 生物学功能
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长牡蛎(Crassostrea gigas)环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)的基因克隆与功能研究
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作者 白晶 毛帆 +3 位作者 刘客林 宋菁晨 喻子牛 张扬 《热带海洋学报》 北大核心 2025年第1期24-34,共11页
环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框... 环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框(open reading frame,ORF)全长1623bp,编码540个氨基酸,理论相对分子质量为62.3kDa,并具有保守的Mab21结构域。系统进化分析表明了CgcGAS为软体动物cGAS家族中的一员。定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)结果显示CgcGAS广泛表达于各组织,并在消化腺的相对表达量最高。亚细胞定位实验观察到CgcGAS蛋白在细胞核和细胞质中都有分布,主要定位于细胞核,提示其可能在细胞核内的DNA感应以及细胞质内的DNA结合和信号传递中发挥作用。另外,双荧光素酶报告基因系统和RNA干扰实验结果显示,CgcGAS能够显著激活核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)和干扰素刺激性反应元件(interferon-sensitive response element,ISRE)信号通路,及其下游的炎症相关因子干扰素诱导病毒抑制蛋白(virus inhibitory protein endoplasmic reticulum-associated interferon-inducible,viperin)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及转录因子干扰素调节因子2/8(interferon regulatory factor 2/8,IRF2/8)的表达。综上所述,CgcGAS在长牡蛎的先天性免疫反应中的信号传递过程中发挥了关键作用。 展开更多
关键词 长牡蛎 先天性免疫 环GMP-AMP合酶 基因克隆 功能
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桂花OfSAUR21基因的克隆及功能验证
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作者 郭罕年 熊欣 +2 位作者 胡飞杨 邹晶晶 蔡璇 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第5期1059-1067,共9页
【目的】桂花Osmanthus fragrans花期短、花瓣易衰老褐化,制约了桂花经济价值的开发利用。探究桂花Of SAUR21基因对衰老的调控功能,可为桂花花瓣衰老调控的分子机制研究提供理论依据。【方法】以桂花‘柳叶金桂’O. fragrans‘Liuye Jin... 【目的】桂花Osmanthus fragrans花期短、花瓣易衰老褐化,制约了桂花经济价值的开发利用。探究桂花Of SAUR21基因对衰老的调控功能,可为桂花花瓣衰老调控的分子机制研究提供理论依据。【方法】以桂花‘柳叶金桂’O. fragrans‘Liuye Jingui’为材料进行OfSAUR21基因的克隆,利用生物信息学分析OfSAUR21蛋白的理化性质和系统进化关系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析OfSAUR21基因在不同花期的表达模式,并通过瞬时转化桂花花瓣进行基因功能的鉴定。【结果】克隆得到1个长度为294 bp的OfSAUR21基因cDNA序列,可编码产生97个氨基酸,无信号肽与跨膜结构域,亚细胞定位预测在叶绿体,含有Auxin_inducible superfamily保守结构域。同源性比对及进化树分析发现:OfSAUR21基因与野生油橄榄Olea europaea var. sylvestris亲缘关系最近。RT-qPCR分析显示:Of SAUR21基因在花瓣衰老期表达最高。经RT-qPCR与乙烯分析发现:将OfSAUR21基因通过瞬时转化侵染到桂花花瓣中,花瓣的褐化率提高,乙烯的释放量增加。【结论】OfSAUR21基因包含完整的Auxin_inducible superfamily保守结构域,是生长素早期响应基因家族成员,在盛花末期表达量最高,对促进乙烯生成及调控桂花衰老具有正调节功能。 展开更多
关键词 桂花 SAUR基因 乙烯 基因克隆 功能验证
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薰衣草花青素合成相关基因LaCHS的克隆与功能分析
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作者 李鹏飞 王爱凡 +3 位作者 黄佳慧 陈伊娜 张明浩 苏秀娟 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第5期1048-1058,共11页
【目的】查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是植物花青素合成的关键酶。探究薰衣草Lavandula angustifolia LaCHS基因与花青素代谢的关系并分析其生物学功能,为薰衣草花色调控机制研究提供参考。【方法】以薰衣草‘莱文丝深紫’L. an... 【目的】查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是植物花青素合成的关键酶。探究薰衣草Lavandula angustifolia LaCHS基因与花青素代谢的关系并分析其生物学功能,为薰衣草花色调控机制研究提供参考。【方法】以薰衣草‘莱文丝深紫’L. angustifolia‘Levens Deep Purple’的幼嫩叶片为材料克隆LaCHS基因,利用生物信息学分析LaCHS蛋白的理化性质和系统进化关系;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析LaCHS基因在薰衣草‘优白’L. angustifolia‘Superior White’、‘优粉’‘Premium Pink’、‘太空蓝’‘Space Blue’、‘新农薰1号’‘Xinnongxun No.1’和‘莱文丝深紫’不同器官中的表达水平,并分析其花青素相对含量差异;通过异源过表达本氏烟草Nicotiana benthamiana和病毒诱导沉默(VIGS)‘莱文丝深紫’薰衣草验证LaCHS基因的功能。【结果】获得长1 173 bp的LaCHS基因c DNA序列,该基因编码390个氨基酸,LaCHS蛋白二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,属于PLN03173超级家族。LaCHS蛋白与圣罗勒Ocimum tenuiflorum、紫苏Perilla frutescens等物种的CHS蛋白的亲缘关系较近。RT-qPCR分析表明:LaCHS基因具有明显的组织特异性,主要在花器官中表达。在5个薰衣草品种的不同花器官发育时期中,LaCHS基因的表达量在盛花期或衰败期的表达量最高;花青素相对含量均在衰败期达到最高。在营养器官中,该基因表达量最高的组织为苞叶或茎,而花青素相对含量.最高的均为苞叶;LaCHS基因的表达变化趋势与花青素积累规律基本一致。在异源过表达烟草株系中,LaCHS基因的表达量上调,花青素生物合成途径中关键结构基因(NbF3′H、NbDFR)的表达水平同步上调,且花青素相对含量也同步提高。在基因沉默薰衣草株系中,LaCHS基因的表达量显著下调,花青素相对含量也同步降低。【结论】LaCHS基因对薰衣草花青素生物合成具有正向调控作用,影响花青素积累。 展开更多
关键词 薰衣草 查尔酮合成酶 基因克隆 功能验证 花青素
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澳洲坚果锌指蛋白基因MiZFP9的克隆与功能分析 被引量:1
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作者 杨祥燕 蔡元保 +3 位作者 黄思婕 李季东 潘如军 黄运鹏 《南方农业学报》 北大核心 2025年第2期544-552,共9页
【目的】克隆澳洲坚果CCCH型锌指蛋白基因MiZFP9,并分析其在不同组织及低温、干旱胁迫下的表达情况,为深入探究澳洲坚果锌指蛋白基因的抗寒和耐旱分子机理提供理论依据。【方法】从澳洲坚果叶片克隆MiZFP9基因,并对其进行生物信息学分... 【目的】克隆澳洲坚果CCCH型锌指蛋白基因MiZFP9,并分析其在不同组织及低温、干旱胁迫下的表达情况,为深入探究澳洲坚果锌指蛋白基因的抗寒和耐旱分子机理提供理论依据。【方法】从澳洲坚果叶片克隆MiZFP9基因,并对其进行生物信息学分析。通过实时荧光定量PCR检测MiZFP9基因在不同组织中的表达特性及低温和干旱胁迫下的表达模式。【结果】从澳洲坚果叶片中克隆获得MiZFP9基因,属于CCCH型锌指蛋白基因C3H64亚类,其编码蛋白含有活性位点、Zn2+结合位点及CCCH型锌指蛋白的典型结构域ZF_C3H,为稳定的亲水性蛋白,以丝氨酸磷酸化为主,可能定位于细胞质,属于非分泌型蛋白。MiZFP9蛋白的高级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋和延伸链交错组成。MiZFP9基因在Own Choice品种的不同组织中均显著差异表达(P<0.05,下同),其中在刚开放和未开放小花中的相对表达量最高,其次是根和叶,而在茎的相对表达量则最低。在低温胁迫和干旱胁迫下,MiZFP9基因在Own Choice和HAES695品种的相对表达量较对照(处理0 h)均显著上调,其中MiZFP9基因在Own Choice品种中呈先升高后降低的表达模式,在HAES695品种的相对表达量呈波动式变化模式,出现2个峰值,说明其在不同品种中的响应模式存在差异。【结论】MiZFP9基因具有组织表达特异性,并在低温和干旱处理后表达水平明显升高,推测MiZFP9在澳洲坚果组织生长发育及响应低温和干旱胁迫中发挥重要的正向调控作用。 展开更多
关键词 澳洲坚果 CCCH型锌指蛋白 基因克隆 功能分析
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蓝莓花青素相关VcGSTF19基因的克隆及功能研究
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作者 张永艳 郭思健 +4 位作者 李晶 郝思怡 李瑞得 刘嘉鹏 程春振 《生物技术通报》 北大核心 2025年第9期139-146,共8页
【目的】Phi亚家族谷胱甘肽转移酶(GSTF)在多种植物花青素积累和转运中发挥关键作用。为研究蓝莓GSTF的功能,对蓝莓花青素相关GSTF19基因进行克隆和功能研究。【方法】利用反转录PCR克隆获得蓝莓花青素相关GSTF19的编码序列并构建过表... 【目的】Phi亚家族谷胱甘肽转移酶(GSTF)在多种植物花青素积累和转运中发挥关键作用。为研究蓝莓GSTF的功能,对蓝莓花青素相关GSTF19基因进行克隆和功能研究。【方法】利用反转录PCR克隆获得蓝莓花青素相关GSTF19的编码序列并构建过表达载体,基于蓝莓果实瞬时转化和拟南芥tt19突变体互补实验研究其功能。【结果】VcGSTF19的瞬时过表达可以显著促进蓝莓果皮中花青素的积累。过表达VcGSTF19的蓝莓果皮花青素含量达到空载对照的6.61倍。其瞬时过表达显著提高了蓝莓果皮中VcCHS、VcCHI、VcF3H、VcDFR、VcANS和VcUFGT等花青素合成结构基因的表达水平。此外,VcGSTF19异源转化拟南芥tt19突变体恢复了突变体花青素积累,转基因莲座叶中花青素含量约为突变体的6.21倍。【结论】蓝莓VcGSTF19基因在花青素积累和转运中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 花青素 蓝莓 Phi亚家族谷胱甘肽转移酶 基因克隆 功能研究
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马铃薯扩展蛋白基因StEXLB1a的表达模式分析及功能初步鉴定
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作者 杜冲 贺付蒙 +6 位作者 隋嘉 赵潇璨 车云竹 张增利 刘丹 王雪 李凤兰 《华北农学报》 北大核心 2025年第5期161-170,共10页
探究马铃薯基因StEXLB1a的表达模式和功能,为后续马铃薯病害的抗性研究提供理论依据。在东北农业大学植物资源与分子生物学实验室前期研究基础上,以马铃薯大西洋品种为材料,克隆了StEXLB1a基因并对其进行了生物信息学、表达模式和抗病... 探究马铃薯基因StEXLB1a的表达模式和功能,为后续马铃薯病害的抗性研究提供理论依据。在东北农业大学植物资源与分子生物学实验室前期研究基础上,以马铃薯大西洋品种为材料,克隆了StEXLB1a基因并对其进行了生物信息学、表达模式和抗病功能初步分析。结果表明:StEXLB1a基因cDNA全长序列768bp,编码255个氨基酸,注释显示其属于扩展蛋白家族基因。亚细胞定位显示,该蛋白定位于细胞壁上。在马铃薯不同组织中,StEXLB1a基因在叶中表达量最高,根和地上茎其次,在花和块茎中最低。在激素(吲哚乙酸、赤霉素、脱落酸)、逆境(高温、低温、盐、干旱)和真菌病害干腐病(燕麦镰孢菌)、细菌病害软腐病(胡萝卜软腐欧文氏菌)及青枯病(茄科雷尔氏菌)等多种胁迫处理下,StEXLB1a基因的表达量在各个处理中均有显著变化。获得过表达转基因马铃薯植株后,接种干腐病致病菌燕麦镰孢菌,转基因比野生型植株叶片受到病菌的侵染严重。过表达植株中的活性氧清除系统相关酶活性发生显著变化,POD、SOD活性受到抑制,MDA含量高于野生型植株,植株受损程度加重。分析结果表明,过表达StEXLB1a的转基因马铃薯植株相较野生型对干腐病的抗病性下降。 展开更多
关键词 马铃薯 扩展蛋白 基因克隆 表达模式分析 功能鉴定
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大豆GmWRKY44生物信息学分析及功能验证
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作者 黄友举 于泳波 +3 位作者 逄翠晶 孙轼絮 路晨 于延冲 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期29-35,共7页
WRKY是植物特有的一类转录因子,在非生物胁迫应答、种子休眠与发芽、生长发育等方面起重要作用。为揭示大豆WRKY转录因子家族中GmWRKY44基因的功能和潜在的分子机制,对大豆Williams 82中GmWRKY44基因进行了生物信息学分析及功能验证。... WRKY是植物特有的一类转录因子,在非生物胁迫应答、种子休眠与发芽、生长发育等方面起重要作用。为揭示大豆WRKY转录因子家族中GmWRKY44基因的功能和潜在的分子机制,对大豆Williams 82中GmWRKY44基因进行了生物信息学分析及功能验证。结果表明,GmWRKY44基因CDS全长1077 bp,编码358个氨基酸;结构预测与进化分析结果显示,其编码的蛋白质二级结构由23.46%α-螺旋、4.75%β-折叠、58.94%无规则卷曲和12.85%延伸链构成,三级结构与二级结构相统一;含一个保守的WRKY结构域,锌指结构为C_(2)H_(2)类型,属WRKY IIc亚家族;该基因是拟南芥AtWRKY71的同源基因,相似度为35.56%,两者具有相似的基因结构。RT-qPCR分析表明,GmWRKY44响应盐胁迫,表达量先下降后上升。在盐胁迫下,野生型(Col-0)和GmWRKY44过表达拟南芥株系的萌发率和根长均受到一定程度抑制,但GmWRKY44过表达株系明显优于Col-0。另外,在盐处理后,GmWRKY44过表达株系生长受抑制程度低于Col-0。生理指标分析发现,在盐胁迫下,GmWRKY44过表达株系的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于Col-0,而丙二醛(MDA)含量显著低于Col-0。以上表明,GmWRKY44过表达可以提高转基因拟南芥的耐盐性。 展开更多
关键词 大豆 GmWRKY44 基因克隆 生物信息学分析 功能验证 盐胁迫
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宁夏枸杞LbALDH3F1基因克隆及耐盐性分析
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作者 马小霞 胡进红 +5 位作者 梁旺利 麻玉荣 孙雯 王玲霞 秦垦 梁文裕 《植物遗传资源学报》 北大核心 2025年第2期380-393,共14页
宁夏枸杞为著名耐盐药用植物,本研究以宁夏枸杞为材料,采用RACE方法克隆LbALDH3F1基因并进行序列分析,PCR法克隆LbALDH3F1基因启动子序列,构建过表达载体pCAMBIA 2300 EGFP-LbALDH3F1进行拟南芥遗传转化和亚细胞定位,并进行转LbALDH3F1... 宁夏枸杞为著名耐盐药用植物,本研究以宁夏枸杞为材料,采用RACE方法克隆LbALDH3F1基因并进行序列分析,PCR法克隆LbALDH3F1基因启动子序列,构建过表达载体pCAMBIA 2300 EGFP-LbALDH3F1进行拟南芥遗传转化和亚细胞定位,并进行转LbALDH3F1拟南芥耐NaCl胁迫检验及PCR鉴定。结果表明,宁夏枸杞LbALDH3F1基因全长1700 bp,编码序列为1446 bp,编码481个氨基酸残基;上游启动子序列为1850 bp;LbALDH3F1二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,定位于细胞核和细胞膜中。随着NaCl胁迫程度加深,宁夏枸杞的LbALDH3F1表达量呈先升后降的趋势,且在200 mmol/L NaCl胁迫时表达量最高。对LbALDH3F1进行遗传转化,发现转基因拟南芥对NaCl胁迫的耐受能力明显增强,超氧化物歧化酶表现出更高的活性,脯氨酸及叶绿素a含量在300 mmol/L NaCl胁迫下显著升高,而过氧化氢及丙二醛等含量在高盐胁迫下显著低于野生型拟南芥,表明LbALDH3F1具有提高植物抗氧化能力从而增强耐NaCl胁迫的能力。该研究结果为深入探讨宁夏枸杞LbALDH3F1基因功能及其在响应盐胁迫过程中的应答机制奠定了基础。 展开更多
关键词 LbALDH3F1 克隆 遗传转化 盐胁迫 基因功能 宁夏枸杞
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茶树CsWAK8克隆及其在响应冷胁迫过程中的功能分析
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作者 焦小雨 吴琼 +4 位作者 刘丹丹 孙明慧 阮旭 王雷刚 王文杰 《生物技术通报》 北大核心 2025年第2期210-220,共11页
【目的】细胞壁关联蛋白激酶(wall associated kinase,WAK)是一类特殊的类受体激酶(receptor like kinase,RLK),其在调节植物生长和应对生物或非生物胁迫等方面发挥着重要作用。探究CsWAK8在响应冷胁迫过程中的功能,为今后解析茶树抗寒... 【目的】细胞壁关联蛋白激酶(wall associated kinase,WAK)是一类特殊的类受体激酶(receptor like kinase,RLK),其在调节植物生长和应对生物或非生物胁迫等方面发挥着重要作用。探究CsWAK8在响应冷胁迫过程中的功能,为今后解析茶树抗寒机理提供理论依据。【方法】从茶树叶片中克隆了CsWAK8。采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析CsWAK8在不同组织以及越冬期不同抗寒性茶树品系中的表达模式。通过农杆菌介导法在拟南芥中异源表达CsWAK8,并对转基因植株进行冷处理表型观察、酶活测定和冷响应相关基因表达检测。【结果】CsWAK8的CDS全长2307 bp,编码768个氨基酸,具有WAK家族特征保守结构域。CsWAK8在茶树成熟叶片中高表达,在越冬期,冷敏感型茶树品系叶片和根中CsWAK8表达量多显著高于冷耐受型茶树品系。通过异源过表达获得了9株转CsWAK8拟南芥纯合株系,对其中3个株系进行了耐冷性分析,发现在冷胁迫下,转基因株系的根长和存活率显著低于野生型,盆栽苗莲座叶的枯死程度较野生型更高,且转基因株系L48在冷冻处理6 h时的MDA含量显著高于野生型。此外,q PCR分析结果显示,在冷胁迫下,转CsWAK8拟南芥中AtCBFs的相对表达量大多显著低于野生型。【结论】转CsWAK8拟南芥相较于野生型拟南芥对冷处理更敏感。CsWAK8可能通过CBF介导的冷信号途径在响应和耐受冷胁迫过程中起负调节作用。 展开更多
关键词 茶树 细胞壁关联蛋白激酶(WAK) 基因克隆 功能验证 冷胁迫
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韭菜MYB12基因克隆、表达及功能分析
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作者 付桃桃 王雪营 +5 位作者 马爱锄 廖春丽 张华敏 马培芳 李涛涛 王莲哲 《中国蔬菜》 北大核心 2025年第4期80-86,共7页
植物MYB转录因子存在广泛,成员众多,在植物生长发育、次生代谢、抗病抗逆等过程中发挥重要作用。本试验对韭菜MYB12基因编码的蛋白进行生物信息学分析,探究其在不同胁迫处理下的基因表达,并研究转化MYB12基因的酵母在应对不同胁迫时的... 植物MYB转录因子存在广泛,成员众多,在植物生长发育、次生代谢、抗病抗逆等过程中发挥重要作用。本试验对韭菜MYB12基因编码的蛋白进行生物信息学分析,探究其在不同胁迫处理下的基因表达,并研究转化MYB12基因的酵母在应对不同胁迫时的抗性功能。结果表明,韭菜MYB12基因编码298个氨基酸,分子质量为33.4 kDa,且为亲水蛋白,其三级结构包含6个α螺旋并形成HLH结构,属于典型的R2R3型MYB。基因表达分析显示AtuMYB12在干旱胁迫和盐胁迫下极显著上调,且转AtuMYB12基因的酵母对盐胁迫表现出更好的耐受性。 展开更多
关键词 韭菜 MYB 基因克隆 基因表达 功能
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云南金花茶苯丙氨酸解氨酶基因CfPAL的克隆及体外酶活鉴定
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作者 王何泽 母德锦 +2 位作者 陈思慧 田自能 唐军荣 《山东农业科学》 北大核心 2025年第5期54-63,共10页
为给云南金花茶(Camellia fascicularis)调控黄酮类化合物分子育种提供基因来源及依据,本研究对从前期转录组测序数据获得的苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆和生物信息学分析,并利用体外酶活测定进行功能鉴定。结果从云南金花茶中克隆获得Cf... 为给云南金花茶(Camellia fascicularis)调控黄酮类化合物分子育种提供基因来源及依据,本研究对从前期转录组测序数据获得的苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆和生物信息学分析,并利用体外酶活测定进行功能鉴定。结果从云南金花茶中克隆获得CfPAL基因,GenBank登录号为PP502845。生物信息学分析结果表明,CfPAL的cDNA全长为2145 bp,编码714个氨基酸,蛋白分子量为77.76 kDa;CfPAL基因的表达偏好A和T,最优密码子为AGG;无信号肽和跨膜结构域,是一个位于细胞质和内质网的亲水稳定型的酸性蛋白;其二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构呈现典型的“海马状”结构;CfPAL从属于裂解酶ILike超家族,具有PAL家族保守序列(GTITASGDLVPLSYIAG),与9条同源PAL蛋白序列相似性为90.21%;与茶(C.sinensis)和狭叶油茶(C.lanceoleosa)的亲缘进化关系最近,相似度分别为99.02%、98.19%;CfPAL蛋白与黄酮类化合物特异性合成途径的关键酶CHS存在关联性。体外酶促反应结果表明,CfPAL蛋白能催化苯丙氨酸生成反式肉桂酸,但不能将酪氨酸催化生成对香豆酸。CfPAL属于典型的苯丙氨酸解氨酶基因家族,在调控黄酮类化合物合成途径中起重要作用。 展开更多
关键词 云南金花茶 苯丙氨酸解氨酶 基因克隆 序列分析 功能验证
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茶树CsNPF家族6个基因的克隆与表达分析及CsNPF7.3功能验证
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作者 韩昱 袁青云 +3 位作者 章青平 吴春来 贺巍 张芬 《生物技术通报》 北大核心 2025年第10期264-276,共13页
【目的】硝酸转运蛋白1/多肽转运蛋白家族(NRT1/PTR family,NPF)在植物氮素吸收、激素运输及逆境响应中发挥关键作用,解析茶树CsNPFs基因特性及表达模式,为茶树氮素高效利用和抗逆分子育种提供理论依据。【方法】通过基因克隆、生物信... 【目的】硝酸转运蛋白1/多肽转运蛋白家族(NRT1/PTR family,NPF)在植物氮素吸收、激素运输及逆境响应中发挥关键作用,解析茶树CsNPFs基因特性及表达模式,为茶树氮素高效利用和抗逆分子育种提供理论依据。【方法】通过基因克隆、生物信息学分析及RT-qPCR方法,鉴定CsNPFs基因家族成员,探究其组织表达特性及对激素(IAA、ABA、GA3)和硝酸盐(NO3-)处理的响应规律,并通过拟南芥异源表达验证CsNPF7.3的功能。【结果】共克隆得到6个CsNPFs基因全长CDS序列,其编码蛋白均为疏水性跨膜蛋白;系统进化分析显示,CsNPFs与狭叶油茶ClNPFs亲缘关系最近。基因组织表达特性分析显示,CsNPF5.5/7.3主要在根部表达,CsNPF2.13/2.7/3.1/7.1主要在叶片中积累。激素处理可显著诱导基因的表达,其中CsNPF7.3在根系中受激素诱导呈现明显的上调表达现象,推测其可能为根系中激素传递的关键基因,而CsNPF5.5则在激素的诱导下在叶片中呈现明显上调表达的现象,受到组织内部的相关因素调控。NO3-处理下,叶片中CsNPFs基因响应显著,且除CsNPF2.7和CsNPF3.1外,基本都呈下调表达模式;根系中CsNPF5.5和CsNPF7.3则呈显著上调的表达规律。拟南芥超表达验证显示,CsNPF7.3过表达可显著增加拟南芥的生物量积累,并增强植株对IAA、ABA和GA3的响应,促进其侧根发育、根系伸长及叶柄长度的增加。【结论】CsNPFs在茶树的氮素吸收和激素响应过程中发挥着重要作用,其中CsNPF7.3为茶树根系中的关键功能基因,可参与调控茶树的生长及逆境适应。 展开更多
关键词 茶树 CsNPF家族 基因克隆 植物激素 NO3- 表达分析 CsNPF7.3 功能验证
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Molecular cloning and functional analyses of low-temperature induced genes from Ammopiptanthus mongolicus
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作者 CAO Peng-xiu1,SONG Jian1,ZHOU Chun-jiang1,WENG Man-li1,JIN De-min1,ZHAO Feng1,LIU Jing2,FENG Dian-qi2,WANG Bin1(1.The State Key Laboratory of Plant Genomics,Institute of Genetics and Developmental Biology,CAS,Beijing,100101,China 2.Taishan Branch of Shandong Academy of Forestry Sciences,Taian 271000,China) 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期240-,共1页
Studies on the cold-responsive genes and cold signaling of woody species drop far behind in comparison to herbaceous plants.Due to similar lignified structure,perennial characteristic,and enhanced tolerance,it seems m... Studies on the cold-responsive genes and cold signaling of woody species drop far behind in comparison to herbaceous plants.Due to similar lignified structure,perennial characteristic,and enhanced tolerance,it seems much easier to find strongly antifreeze genes and obtain effective results in transgenic woody plants.In this study,Ammopiptanthus mongolicus,an evergreen,broadleaf and cold-resist leguminous shrub growing in the desert of Inner Mongolia,was used as a material for low-temperature induced gene isolation.Through differential expression analysis induced by low-temperature,thirteen up-regulated cDNAs were identified.One of them,AmEBP1,(accession number:DQ519359)confers enhanced cold-tolerance to both transgenic E.coli and transgenic Arabidopsis.Results suggest that AmEBP1 can stimulate the synthesis of ribosome and the dephosphyration of the α-subunit of initiation factor 2(eIF2α),and subsequently promote the translation process.By which the transgenic plants obtained increased cold-resistant ability. 展开更多
关键词 Molecular cloning and functional analyses of low-temperature induced genes from Ammopiptanthus mongolicus
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Cloning GhSCFP Gene and Its Function in Cotton Fiber Development
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作者 HOU Lei,YANG Xia,LIU Hao,LI Jia-bao,PEI Yan(Key Laboratory of Biotechnology and Crop Quality Improvement,Ministry of Agriculture Biotechnology Research Center,Southwest University,Chongqing 400716,China) 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2008年第S1期54-,共1页
As a major raw material for the textile industry and the most important fiber crop in the world,cotton is of great significance in Chinese economy.The development of cotton fiber can be divided
关键词 GENE Cloning GhSCFP Gene and Its function in Cotton Fiber Development
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黑芥和埃塞俄比亚芥PAP2基因克隆及B基因组PAP2功能验证 被引量:1
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作者 谢娜娜 黄伟 +6 位作者 高国应 张大为 周定港 吴金锋 向建华 刘丽莉 严明理 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期274-283,共10页
PAP2(Production of anthocyanin pigment 2)编码MYB转录因子,与bHLH、WD40形成MYB-bHLH-WD40复合体来调控花青素合成。本研究从埃塞俄比亚芥和黑芥中分别克隆出2个和1个PAP2基因拷贝,分别命名为BcaB.PAP2、BcaC.PAP2、BniB.PAP2,这三... PAP2(Production of anthocyanin pigment 2)编码MYB转录因子,与bHLH、WD40形成MYB-bHLH-WD40复合体来调控花青素合成。本研究从埃塞俄比亚芥和黑芥中分别克隆出2个和1个PAP2基因拷贝,分别命名为BcaB.PAP2、BcaC.PAP2、BniB.PAP2,这三个基因均由3个外显子和2个内含子组成,均编码247个氨基酸。基于本研究克隆的PAP2基因序列和已报道的其他芸薹属PAP2基因序列,设计了3对能分别检测A、B、C基因组PAP2基因的引物,通过等位特异PCR可以区分芸薹属禹氏三角中的6个物种PAP2的基因组来源。选取芥菜型油菜B基因组的BjuB.PAP2基因构建过表达载体,转化拟南芥,其叶片变紫,表明PAP2基因正调控花青素合成。遮光处理10天后紫叶埃塞俄比亚芥的叶片紫色变淡,花青素含量下降了41.22%。荧光定量PCR和转录组研究表明,遮光处理植株叶片中BcaB.PAP2和BcaC.PAP2表达量均下降,花青素合成的结构基因查尔酮合成酶基因(CHS)、查尔酮异构酶基因(CHI)、黄烷酮3-羟化酶基因(F3H)、二氢黄酮醇还原酶基因(DFR)、花青素合成酶基因(ANS)、类黄酮3-葡糖基转移酶基因(UFGT)等基因的表达量也下降。本研究完成了对芸薹属植物中埃塞俄比亚芥和黑芥PAP2基因的克隆,并对其进行进化分析。根据本实验中克隆及其他已报道的PAP2基因序列设计等位基因特异性PCR引物,为芸薹属种间杂交后代PAP2基因的基因组传递鉴定提供了分子标记。通过BjuB.PAP2基因转拟南芥植株结果表明PAP2基因参与花青素的积累。紫叶埃塞俄比亚芥经遮光处理后,发现BcaPAP2基因及花青素合成结构基因的表达受光照的诱导。本研究在芸薹属中克隆PAP2基因,并初步验证PAP2的功能,为进一步解析芸薹属植物花青素合成的调控机制提供参考。 展开更多
关键词 PAP2基因 花青素 芸薹属 克隆 功能验证
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鱼类低温适应性机制与抗冻蛋白的研究进展 被引量:2
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作者 王彤 陈生熬 +4 位作者 刘一萌 隋智海 张海光 全先庆 刘云国 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2024年第4期509-519,共11页
温度对调节鱼类的生物功能至关重要,长期生活在极端寒冷环境中的鱼类通过发生适应性进化而存活下来,抗冻蛋白的产生是其中最重要的适应性特征之一。为全面了解鱼类的低温适应性机制研究进展,首先从内分泌系统、代谢系统和免疫系统3个方... 温度对调节鱼类的生物功能至关重要,长期生活在极端寒冷环境中的鱼类通过发生适应性进化而存活下来,抗冻蛋白的产生是其中最重要的适应性特征之一。为全面了解鱼类的低温适应性机制研究进展,首先从内分泌系统、代谢系统和免疫系统3个方面阐述了低温水环境对鱼类的基因表达和激素分泌的影响,以及对机体代谢过程的整体影响;其次,从鱼类的生理适应和进化适应两部分综述了鱼类的低温适应性机制;最后,详细阐述了抗冻蛋白的研究起源与结构特性、克隆与功能鉴定等方面的研究进展。相关研究现状表明,利用组学方法可以研究低温胁迫下鱼类的代谢途径和分子信号通路,在生物整体水平上分析低温适应机制;利用该方法,已经挖掘了多种低温耐受功能基因。由于不同鱼类及其温度适应性存在差异,未来还需要开展更多基础性研究工作。 展开更多
关键词 低温适应性 抗冻蛋白 克隆 功能鉴定 鱼类
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紫花苜蓿MsBBX20基因克隆及耐盐功能分析 被引量:5
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作者 周昕越 蒋庆雪 +3 位作者 贾会丽 马琳 樊璐 王学敏 《草业学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期55-73,共19页
BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物,其品质优良,有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基因... BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物,其品质优良,有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基因响应非生物胁迫的分子机理,有助于揭示紫花苜蓿抗逆生物学基础,为紫花苜蓿抗逆分子育种提供新的基因资源。通过RT-PCR、3'/5'RACE PCR技术克隆得到MsBBX20基因cDNA序列,生物信息学分析发现其CDS全长834 bp,编码278个氨基酸,该基因编码的蛋白质为锌指结构蛋白家族成员。利用qRTPCR技术分析MsBBX20在紫花苜蓿不同组织和不同非生物胁迫下的表达模式。通过基因枪轰击技术,在洋葱表皮瞬时表达MsBBX20进行亚细胞定位。克隆得到大小为1737 bp的MsBBX20启动子序列并分析了顺式作用元件,该启动子可驱动GUS报告基因在烟草的叶、茎和根中高效表达。将MsBBX20启动子序列与包含GUS基因的pCAMBIA-1301载体连接,瞬时转化烟草并通过组织化学染色对不同组织进行GUS活性分析。构建pCAMBIA3301-MsBBX20植物超表达载体,通过农杆菌介导的方法遗传转化野生型拟南芥,获得超表达MsBBX20的拟南芥株系。用不同浓度盐溶液(150、200和300 mmol·L^(-1)NaCl)处理拟南芥转基因株系并分析其MDA含量和抗氧化酶活性。进化分析表明紫花苜蓿MsBBX20蛋白与红三叶TpBBX20的亲缘关系最近。MsBBX20蛋白定位于细胞核。MsBBX20基因在花中表达量最高,且MsBBX20可以响应干旱、盐、冷、脱落酸、赤霉素、光照等多种非生物胁迫。遗传转化获得MsBBX20过表达拟南芥株系,并选择3个高表达阳性株系进行功能验证。在不同浓度NaCl处理条件下,过量表达MsBBX20的拟南芥株系的丙二醛(MDA)含量显著低于对照,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均显著高于对照。克隆获得紫花苜蓿锌指蛋白转录因子基因MsBBX20,该基因在花中表达量最高,能够响应多种非生物逆境胁迫和外源激素处理,表明MsBBX20可能参与紫花苜蓿的多个逆境响应过程。进一步的研究证明MsBBX20可能通过调节植物的抗氧化酶系统,缓解逆境造成的植物细胞氧化损伤,提高转基因拟南芥对盐胁迫的抗性,进而增强植株的耐盐性。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MsBBX20 基因克隆 耐盐性 功能分析
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