用于Real-time PCR检测的牛肉组织DNA提取方法探索

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作者 李璟 陈世界 陈洋 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第5期1028-1029,1056,共3页

使用Chelex-100提取牛肉组织DNA,并用紫外分光光度法检测所提取的DNA浓度和纯度,结果表明所提取的DNA A260 nm/A280 nm在1.662～1.826之间,纯度较高。Real-time PCR扩增提取的DNA模板,表现出较高的敏感性。该DNA提取方法效率较高,操作简... 使用Chelex-100提取牛肉组织DNA,并用紫外分光光度法检测所提取的DNA浓度和纯度,结果表明所提取的DNA A260 nm/A280 nm在1.662～1.826之间,纯度较高。Real-time PCR扩增提取的DNA模板,表现出较高的敏感性。该DNA提取方法效率较高,操作简便,能够获得较高质量的DNA,适合检疫部门的快速检测需要。 展开更多

关键词 dna 提取 REAL-TIME pcr 牛肉组织

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围绕FFPE样本特性的DNA纯化纳米磁珠优化 被引量：1

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作者 肖林 吕晓芳 +4 位作者 曹师瑜 江丹 孙林雍 李坤 叶丰 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期725-730,共6页

目的 探讨围绕福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed paraffin embedded, FFPE)样本特性获取更高质量/得率的纳米磁珠核酸提取方案,改进分子病理技术。方法 合成4大类15个小类的备选磁珠,以FFPE样本为中心,筛选高质量/得率磁珠。模拟常... 目的 探讨围绕福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed paraffin embedded, FFPE)样本特性获取更高质量/得率的纳米磁珠核酸提取方案,改进分子病理技术。方法 合成4大类15个小类的备选磁珠,以FFPE样本为中心,筛选高质量/得率磁珠。模拟常规组织、粗针穿刺(肝脏)、纤维支气管镜样本(肺),装管相同张数连片。采用筛选的最佳磁珠与市场出售的常见磁珠试剂提取核酸,横向对比纯化总量、片段大小等质量参数。应用PCR和Sanger验证核酸的下游应用。结果 以FFPE样本DNA为中心筛选自制纳米磁珠,获得最佳性能纳米磁珠总回收率为58.5%±1.58%,5种市售商品化磁珠和3种国产磁珠总回收率为18.68%~40.71%。相同组织量(连片)提取的DNA总量,在模拟常规组织、粗针穿刺和纤维支气管镜样本核酸得率比市售试剂盒提高39.49%~181.72%(P<0.05)。模拟纤维支气管镜样本1张(4μm)总量可达100 ng以上、5张总量可达400 ng以上。结论 以FFPE样本DNA为中心筛选的DNA纯化纳米磁珠,与商品化磁珠相比有较大提升,为临床分子病理检测的质量保证、自动化检测和项目拓展提供空间。 展开更多

关键词 石蜡包埋组织 dna提取 纳米磁珠 pcr Sanger

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一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法 被引量：8

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作者 张惠丹 任辉 +1 位作者 王晓楠 方瑾 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期590-593,共4页

目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片... 目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片段分布,紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度。以提取的DNA为模板,PCR扩增不同长度产物片段并进行产物的直接测序以评价提取方法。结果该提取方法能够获得较长片段的基因组DNA,从一片10μm厚石蜡切片中即可获得大约60μg的DNA,在0.5h消化条件下获取的模板DNA,即可实现对152bp、293bp、392bp和541bp等4种不同片段的100%扩增,1h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序。结论建立了一种简单、快速地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA。 展开更多

关键词 甲醛固定 石蜡包埋组织 dna提取 聚合酶链式反应(pcr)

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甲醛固定组织中DNA提取与扩增技术的初步研究 被引量：2

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作者 李莉 阙庭志 +1 位作者 林源 龚毓昌 《法医学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期87-88,共2页

目的：探索从甲醛固定组织中提取并扩增DNA的方法。方法：采用高pH缓冲液，结合有机溶剂法抽提DNA，选择扩增片段较短的DQa位点作为检测位点。结果：甲醛固定组织中的DNA降解程度随浸泡时间的延长而加重，但浸泡1、5、10个月的3份心脏... 目的：探索从甲醛固定组织中提取并扩增DNA的方法。方法：采用高pH缓冲液，结合有机溶剂法抽提DNA，选择扩增片段较短的DQa位点作为检测位点。结果：甲醛固定组织中的DNA降解程度随浸泡时间的延长而加重，但浸泡1、5、10个月的3份心脏组织均获得了240bp的扩增产物。 展开更多

关键词 甲醛固定组织 dna提取 pcr扩增

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一种简便高效提取两栖动物肌肉组织基因组DNA的方法 被引量：4

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作者 李佳璇 陈卓 +2 位作者 朱艳军 何玉晓 陈晓虹 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第3期73-75,共3页

为得到一种高效的适用于两栖动物的基因提取方法,以臭蛙属6个物种的肌肉组织为材料,通过充分破碎组织、频繁更换双蒸水、加快消化速度和低温沉淀加速DNA析出等方法,对常规的DNA提取方法(酚-氯仿抽提法)加以改进.改进后的DNA提取过程耗... 为得到一种高效的适用于两栖动物的基因提取方法,以臭蛙属6个物种的肌肉组织为材料,通过充分破碎组织、频繁更换双蒸水、加快消化速度和低温沉淀加速DNA析出等方法,对常规的DNA提取方法(酚-氯仿抽提法)加以改进.改进后的DNA提取过程耗时缩短至12 h,提取的基因组DNA适合长片段PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,基因组DNA和12S、16S rDNA片段均得到清晰、明亮、整齐的条带,证实该方法在提取基因组DNA时,具有快速、准确、可靠的特点. 展开更多

关键词 两栖动物 肌肉组织 基因组dna pcr检测 高效提取

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几种动物生鲜肌肉组织样品DNA提取方法的比较研究 被引量：2

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作者 纪艺 姜媛媛 +4 位作者 汪小福 徐晓丽 徐俊锋 李玥莹 陈笑芸 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1471-1477,共7页

比较不同提取原理的试剂盒对动物生鲜肌肉组织DNA提取效果,为日常肉制品掺假检测与监测选择合适的DNA提取方法提供参考。以生鲜牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉为试验材料,采用改良CTAB法、蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法等原理的8种不同... 比较不同提取原理的试剂盒对动物生鲜肌肉组织DNA提取效果,为日常肉制品掺假检测与监测选择合适的DNA提取方法提供参考。以生鲜牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉为试验材料,采用改良CTAB法、蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法等原理的8种不同方法来提取组织样品DNA,并对提取DNA的完整性、浓度、纯度、试验耗时和后续实时荧光定量PCR检测等指标进行评价。结果表明,8种提取方法均可用于常见动物源性肌肉DNA的提取。与改良CTAB法相比,原理为蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法的试剂盒避免了有机试剂的使用,且操作耗时短。实际操作中,可优先选择基于蛋白酶K法和SDS法的试剂盒进行DNA提取,其提取的DNA纯度和总量高,盐残留少,对实时荧光定量PCR的抑制少,满足肉制品掺假检测与监测的核酸提取需求。 展开更多

关键词 dna提取 实时荧光定量pcr 肌肉组织 评估

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一种快速简单高效提取植物DNA的方法 被引量：23

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作者 汤文开 谭新 +3 位作者 张辉 黄耿青 许文亮 李学宝 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2007年第3期447-449,共3页

在综合分析多种提取植物DNA方法的基础上,改良发展了一种快速简便高效的DNA抽提方法.以多种植物的子叶、叶片以及愈伤组织为材料,采用本方法进行抽提纯化,得到的DNA质量好、得率高,且提取过程简单,适合于大批量快速提取植物DNA.

关键词 植物组织 dna提取 方法改良 多聚酶链反应

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动物肌肉组织基因组DNA两种提取方法的比较 被引量：20

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作者 徐伟丽 杜明 +3 位作者 李启明 汪家琦 张伟洋 马莺 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期81-84,共4页

以猪、牛、羊、鸡等动物新鲜冷冻样品为实验材料,采用SDS法和异硫氰酸胍法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较了这两种方法的提取效果。结果表明:采用SDS法和异硫氰酸胍法均能从动物肌肉... 以猪、牛、羊、鸡等动物新鲜冷冻样品为实验材料,采用SDS法和异硫氰酸胍法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较了这两种方法的提取效果。结果表明:采用SDS法和异硫氰酸胍法均能从动物肌肉组织提取到完整的基因组DNA,均可满足PCR等后继分子生物学实验的要求。但是异硫氰酸胍法提取的基因组在纯度和浓度及稳定性方面优于SDS法,且操作简单,耗时短,更利于快速检测。 展开更多

关键词 动物肌肉组织 基因组dna 提取 聚合酶链式反应

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石蜡组织DNA提取方法的比较 被引量：3

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作者 周敏 谢海龙 +1 位作者 马恒辉 周晓军 《医学研究生学报》 CAS 2003年第10期726-729,共4页

目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　... 目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。　结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。 展开更多

关键词 dna提取 石蜡组织 聚合酶链反应 CYCLIN DI基因

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2种车轮虫DNA抽提方法比较 被引量：4

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作者 何根林 唐发辉 +1 位作者 周萍 赵元莙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12948-12950,共3页

[目的]比较研究了2种抽提车轮虫DNA的方法,苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法。[方法]采用苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法对采自重庆地区淡水鱼外寄生的纤细小车轮虫进行了DNA抽提比较研究。通过琼脂糖凝胶电泳技术和核酸蛋白检测技术对所抽提的DNA... [目的]比较研究了2种抽提车轮虫DNA的方法,苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法。[方法]采用苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法对采自重庆地区淡水鱼外寄生的纤细小车轮虫进行了DNA抽提比较研究。通过琼脂糖凝胶电泳技术和核酸蛋白检测技术对所抽提的DNA及PCR扩增产物进行了分析。[结果]苯酚-氯仿法抽提的DNA中杂质含量较少,但需要的车轮虫个体数量多;而试剂盒则可有效地抽提极微量的车轮虫DNA,对于无法进行单克隆培养的生物或无法得到足量标本的种类,则具有更好的应用前景。[结论]在试验过程中可以根据研究的实际情况因地制宜地选择使用不同的方法,以达到高效、经济的目的。 展开更多

关键词 车轮虫 dna抽提 苯酚-氯仿法 试剂盒抽提法 比较研究

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一种从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA的改良方法 被引量：3

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作者 夏米西努尔.伊力克 杨曦 +2 位作者 武贵臻 马琦 阿布力孜.阿布杜拉 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1042-1046,共5页

目的:比较现有的DNA制备方法,建立一种从甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraf-fin-embedded tissues,FFPET)提取高质量基因组DNA的方法。方法:将传统基因组DNA提取方法与市场供应的DNA亲和层析柱结合在一起,以水浴脱腊法替代二... 目的:比较现有的DNA制备方法,建立一种从甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraf-fin-embedded tissues,FFPET)提取高质量基因组DNA的方法。方法:将传统基因组DNA提取方法与市场供应的DNA亲和层析柱结合在一起,以水浴脱腊法替代二甲苯脱腊法,设计一种改良的基因组DNA快速提取方法,从石蜡包埋宫颈癌组织标本提取基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和聚合酶链式反应法进行鉴定。结果:改良的基因组DNA提取法整合了水浴脱蜡与DNA亲和层析柱的优点,从石蜡包埋宫颈癌组织中获得了高质量的基因组DNA,特别是能以很高的效率回收大于20 kb的基因组DNA大片段。结论:改良的基因组DNA提取方法简单快捷,是一种从石蜡包埋组织中回收高质量基因组DNA的有效途径。 展开更多

关键词 dna提取 石蜡包埋组织 聚合酶链反应

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