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猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
1
作者
李慧敏
雷铭楷
+3 位作者
阮胜男
李盼盼
李文涛
何启盖
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4572-4580,共9页
本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双...
本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL^(-1),较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min。方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%,方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
N蛋白
时间分辨荧光微球
免疫层析法
定量检测
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职称材料
题名
猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
1
作者
李慧敏
雷铭楷
阮胜男
李盼盼
李文涛
何启盖
机构
华中农业大学动物医学院
农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室
湖北洪山实验室
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4572-4580,共9页
基金
国家自然科学基金面上项目(32473007)
国家现代农业(生猪)产业技术体系(CARS-35)。
文摘
本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL^(-1),较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min。方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%,方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具。
关键词
猪流行性腹泻病毒
N蛋白
时间分辨荧光微球
免疫层析法
定量检测
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
nucleocapsid protein
time-resolved fluorescence nanoparticles(TRFNPs)
fluorescent
microsphere
immunochromatographic
assay
(
fmica
)
quantitative detection
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
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1
猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
李慧敏
雷铭楷
阮胜男
李盼盼
李文涛
何启盖
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
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