利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案

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作者 唐雪明 沈微 +3 位作者 邵蔚蓝 王正祥 方惠英 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期11-14,共4页

在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙... 在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。 展开更多

关键词 fplc技术 碱性蛋白酶 基因工程菌 快速蛋白液相层析 分离纯化

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阳离子交换FPLC二步法制备级纯化单克隆抗体

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作者 刘智广 陈志南 +2 位作者 刘成刚 米力 徐力青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期43-50,共8页

作者在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法．是将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ透析或稀释８倍后，直接上ＳＰ－４０ＨＲＦＰＬＣ进行一次纯化，纯化的ＩｇＧ组分再用４０％饱... 作者在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法．是将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ透析或稀释８倍后，直接上ＳＰ－４０ＨＲＦＰＬＣ进行一次纯化，纯化的ＩｇＧ组分再用４０％饱和硫酸铵盐析进行二次纯化和浓缩，即得到ＭｃＡｂ纯品。每次上作量８０～８５ｍｌ腹水，可得到纯化抗体６００～６５０ｍｇ，得率约为７．３ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为７３％，一次色谱纯化周期仅需５０ｍｉｎ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法凝胶过滤色谱法和ＤＥＡＥ阴离子交换色谱法检测抗体纯度，一次纯化的ＭｃＡｂ大于９２％，二次纯化的ＭｃＡｂ大于９７％。用免疫组织化学ＡＢＣ测定抗体活性，一次纯化的ＭｃＡｂ为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ），二次纯化的ＭｃＡｂ为１：１０００００（６．２５×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）．纯化ＭｃＡｂ的热稳定性好，３７℃保温１４４ｈ后抗体活性无明显变化（Ｐ＞０．０５）；特异性高，与正常组和其它癌组织几乎无交叉反应。该法操作简单，既具有常压色谱的制备量，又具有ＨＰＬＣ法的纯化速度及分辨率，同时又解决了色谱纯化ＭｃＡｂ的浓缩问题，是获得高纯度、高活性ＩｇＧ类单克隆抗体的实用方法．用本方法提纯? 展开更多

关键词 抗体单克隆 纯化 离子交换色谱法 盐析 快速蛋白液相色谱系统

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牦牛乳中主要过敏原的分离纯化 被引量：2

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作者 李海梅 马莺 +3 位作者 崔艳华 汪加琦 李启明 何胜华 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期80-85,共6页

为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化.在牦牛脱脂乳中添加10%醋酸至酪蛋白的等电点pH4.6,使酪蛋白和乳清蛋白分离.根据酪蛋白... 为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化.在牦牛脱脂乳中添加10%醋酸至酪蛋白的等电点pH4.6,使酪蛋白和乳清蛋白分离.根据酪蛋白在尿素溶液中的溶解度和对钙的敏感性不同,对酪蛋白进行粗分级,得到αs-酪蛋白和β-酪蛋白.应用离子交换色谱和葡聚凝胶sephadex G100进一步纯化粗分级得到的酪蛋白,得到αs-casein和β-酪蛋白.以柠檬酸钠为螯合剂、在低pH并有盐存在的条件下从酸乳清中分离出β-乳球蛋白,FPLC纯化后用RP-HPLC检测其纯度,得到αs-casein和β-酪蛋白纯度分别为87.13%和88.58%,β-乳球蛋白的纯度为80.00%. 展开更多

关键词 牦牛乳 酪蛋白分离 β-乳球蛋白分离 快速蛋白纯化色谱

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毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究 被引量：2

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作者 张晖 薛洪宝 +3 位作者 陈勇 李柏青 梁丽丽 陶兆林 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1545-1550,共6页

采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进... 采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进样时间3.0s;分离温度:25℃;UV-Vis检测器检测波长:200nm。本方法能分离溶菌酶标准蛋白和牛血清白蛋白标准品,根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分,线性回归方程相关系数r2在0.99673以上,定量限在19.47μg·mL-1左右。样品加标回收率在96.09%左右,相对标准偏差小于8.13%,本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法简便、灵敏、快速、可靠、重现性好,能用于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。 展开更多

关键词 毛细管电泳法( CE) 结核杆菌耐热抗原( Mtb-Ag) 活性成分 快速蛋白液相色谱法( fplc)

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水稻白叶枯病菌解毒素蛋白提纯和作用机制研究 被引量：2

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作者 邵敏 陆徐忠 王金生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期28-32,共5页

采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ... 采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ,第Ⅱ吸收峰具有生物活性 ;再经SDS PAGE电泳和考马斯亮蓝染色 ,第Ⅱ吸收峰收集物有明显的一条带 ,相对分子质量为 4 7 9× 10 3 。野生菌产生的CDP解毒活性明显低于其毒性基因突变体。CDP对热和蛋白酶K均不稳定 ,对毒素的解毒主要是通过脱羧起作用。用CDP处理水稻后 ,水稻体内与抗病性相关的酶活性显著提高 ;接种水稻白叶枯病菌 。 展开更多

关键词 水稻白叶枯病菌 解毒素蛋白 提纯 作用机制 有机酸毒素 等电聚集电泳 离子交换层析

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快速蛋白液相色谱系统纯化肺癌组织热休克蛋白70及其鉴定 被引量：2

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作者 张慧珍 杨继要 +2 位作者 范清堂 许东 吴逸明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第1期20-22,共3页

目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础。方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FR-LC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应... 目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础。方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FR-LC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot进行蛋白相对分子质量及免疫原性鉴定。结果与结论:所获蛋白的相对分子质量为70000,经Western-blot鉴定为HSP70。 展开更多

关键词 快速蛋白液相色谱系统 肺癌组织 热休克蛋白70

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唐菖蒲球茎中抗真菌物质的部分性质研究 被引量：2

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作者 刘小烛 袁芳 +1 位作者 郝柳欢 龚秀会 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2007年第B05期43-45,共3页

本文报道唐菖蒲球茎中抗真菌活性物质的成分及其分子量测定方法和结果。用沸水提取，经过超滤、透析、柱层析，纯化到一种有抗真菌活性的物质。排除了它是蛋白质、核酸、脂类及小分子物质的可能性，确定这是一种多糖，定名为唐菖蒲抗真... 本文报道唐菖蒲球茎中抗真菌活性物质的成分及其分子量测定方法和结果。用沸水提取，经过超滤、透析、柱层析，纯化到一种有抗真菌活性的物质。排除了它是蛋白质、核酸、脂类及小分子物质的可能性，确定这是一种多糖，定名为唐菖蒲抗真菌多糖（Gladiolus hntifungal Polysaccharide，简称GAFS）。真空旋转蒸发干燥后，用苯酚-硫酸法测得干燥后的样品糖含量为44．08％，用FPLC（快速蛋白质液相层析仪）测其分子量为15750。 展开更多

关键词 多糖 苯酚-硫酸法 含糖量 快速蛋白质液相色谱仪 分子量

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快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70的研究 被引量：2

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作者 马萍 孟凡东 +3 位作者 傅庆国 陈冬 李莉 刘杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期243-244,共2页

目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳... 目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果 :纯化蛋白经鉴定为分子量70 0 0 0的HSP70。结论 :用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。 展开更多

关键词 快速蛋白液相色谱 肝癌细胞 热休克蛋白70

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酸化沉淀蛋白-超快速液相色谱-串联质谱法测定肝损伤大鼠血浆中的头孢呋辛 被引量：2

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作者 赵龙山 李清 +6 位作者 杨威 何博赛 魏斌斌 刘然 刘晶晶 陈晓辉 毕开顺 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期705-710,共6页

为了研究二代头孢类新药头孢呋辛赖氨酸在肝损伤大鼠体内的药代动力学过程,建立了采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)快速测定肝损伤模型大鼠血浆中头孢呋辛含量的方法。血浆样品在酸性条件下用乙腈沉淀蛋白,采用Shim-pack XR-OD... 为了研究二代头孢类新药头孢呋辛赖氨酸在肝损伤大鼠体内的药代动力学过程,建立了采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)快速测定肝损伤模型大鼠血浆中头孢呋辛含量的方法。血浆样品在酸性条件下用乙腈沉淀蛋白,采用Shim-pack XR-ODS色谱柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm)为分析柱、乙腈-0.1%甲酸水溶液(40∶60,v/v)为流动相、流速为400μL/min进行色谱分离,采用电喷雾负离子(ESI-)模式电离、多反应监测(MRM)模式进行质谱检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 423.2→206.8(头孢呋辛)和m/z 454.1→238.4(内标头孢噻肟)。结果表明,大鼠血浆中头孢呋辛的质量浓度在0.01～1 mg/L和1～400 mg/L范围内线性关系良好(r>0.99),定量限为0.01 mg/L,日内和日间精密度(以相对标准偏差(RSD)计)均小于11.5%,准确度(RE)为-7.1%～2.2%,平均萃取回收率大于83.5%,样品运行时间仅为3.0 min,能够满足生物样品的测定需求。该法简便、快速,已用于肝损伤大鼠静脉注射头孢呋辛赖氨酸的药代动力学预实验研究。 展开更多

关键词 超快速液相色谱-串联质谱法 酸化沉淀蛋白 头孢呋辛 血药浓度

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天麻糖蛋白GGE2b的分离纯化及对急性血瘀大鼠血液流变的影响 被引量：7

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作者 丁诚实 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期240-242,共3页

目的:从天麻中分离纯化得到糖蛋白组分GGE2b,研究其对急性血瘀大鼠血液流变学指标的影响。方法:采用离子交换和快速蛋白液相层析色谱(FPLC)技术分离天麻水溶性提取物,得到组分GGE2b。采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冷刺激的方法制造急性... 目的:从天麻中分离纯化得到糖蛋白组分GGE2b,研究其对急性血瘀大鼠血液流变学指标的影响。方法:采用离子交换和快速蛋白液相层析色谱(FPLC)技术分离天麻水溶性提取物,得到组分GGE2b。采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冷刺激的方法制造急性血瘀大鼠模型。观察GGE2b各剂量组对急性血瘀大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数和红细胞变形指数的影响。结果:离子交换结合FPLC技术分离纯化得到天麻糖蛋白组分GGE2b。GGE2b60、120mg/kg能够显著降低急性血瘀模型大鼠高切、中切的全血黏度(P<0.05或0.01)和血浆黏度(P<0.01),降低红细胞聚集指数(P<0.05或0.01),增大红细胞变形指数(P<0.05)。结论:层析技术用于天麻糖复和物的分离纯化是可行的,且得到的糖蛋白组分GGE2b对急性血瘀大鼠异常的血液流变有良好的治疗效果。 展开更多

关键词 天麻糖蛋白 快速蛋白液相色谱 急性血瘀 血液流变

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一种实用高效的高纯氮气制备装置的介绍 被引量：1

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作者 晋日亚 钟国晋 胡国胜 《陕西化工》 CSCD 1999年第3期38-39,共2页

着重介绍了用催化剂制备高纯氮气的新型装置，该装置可使普通氮气中氧的含量降到 ５×１０－ ６ 以下。

关键词 氮气 催化剂 制备装置

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快速蛋白质液相色谱法分离鉴定脱氧寡核苷酸片段

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作者 唐惠炜 金由辛 朱德煦 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期438-440,共3页

由机器合成的反义核酸药物需要有效的纯度鉴定方法。用 Ｍ Ｏ Ｎ Ｏ Ｑ 柱在 ｐ Ｈ １２ 时以 Ｎａ Ｃｌ的浓度梯度洗脱，可将 １９ 至 ２１ Ｎｔｓ 的小片段寡核苷酸很好分开。

关键词 寡聚脱氧核苷酸 反义核酸药物 寡核苷酸 LC 测定

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