fps基因过量表达对烟叶类胡萝卜素生物合成的影响 被引量：7

1

作者 王冰莹 杨永霞 +3 位作者 闫鼎 滑夏华 冯琦 崔红 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期44-48,共5页

为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析... 为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析了叶片发育过程中类胡萝卜素及其各组分含量的变化规律。结果表明:外源fps在烟草中的过量表达,对烟叶类胡萝卜素合成相关基因Psy、Lycb皆有正向调节作用,但对Zds的表达影响不大;化学分析表明,fps转基因烤烟株系中,总类胡萝卜素及其各组分的含量在叶片不同发育期均高于未转基因K326对照株系。说明外源fps基因在烟草中的过表达,对类胡萝卜素生物合成具有促进作用。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 转基因 类胡萝卜素

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fps转基因烤烟类胡萝卜素及其降解产物的研究 被引量：28

2

作者 李雪君 崔红 +1 位作者 刘海礁 王燕萍 《中国烟草科学》 CSCD 2006年第3期25-27,共3页

为探索法呢基焦磷酸合酶(fps)对烤烟中类胡萝卜素及其降解产物的影响,利用常规和GS/MS方法,对转fps基因烟草株系(K-4、K-6、K-17、K-35)烤后烟叶中类胡萝卜素含量及萜烯类香气物质含量进行了分析,结果发现,烤后烟叶类胡萝卜素含量有较... 为探索法呢基焦磷酸合酶(fps)对烤烟中类胡萝卜素及其降解产物的影响,利用常规和GS/MS方法,对转fps基因烟草株系(K-4、K-6、K-17、K-35)烤后烟叶中类胡萝卜素含量及萜烯类香气物质含量进行了分析,结果发现,烤后烟叶类胡萝卜素含量有较大差异,与未转基因对照相比普遍有所提高,其中K-35含量最高;8种类胡萝卜素降解产物及茄酮、新植二烯含量有不同程度的提高,其中K-35香气降解产物含量整体较高,表明外源fps基因在烟草中的表达对类胡萝卜素合成具有促进作用,从而有利于烟叶品质的提高。 展开更多

关键词 转基因烟草 法呢基焦磷酸合酶 类胡萝卜素 香气物质

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三七与其它植物FPS序列的比较分析 被引量：1

3

作者 吴耀生 陈莉 +2 位作者 蓝秀万 朱华 赵瑞强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1563-1570,共8页

三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ05... 三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ059550;结合生物信息数据库及相关分析软件,对三七根FPS进行性质预测,并与GenBank中记载的植物FPS进行比对分析,构建了植物FPS系统进化树,进行聚类关系分析,根据FPS聚类关系将这些植物异戊二烯类物质合成途径的产物分组.结果表明,植物FPS有2个保守核心区,分别为DDIMD和QVQDDYLD;比对分析及构建的系统进化树表明,三七与人参、积雪草的FPS序列一致性分别为99%、95%,其三萜物质结构也相似. 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶 三七 异戊二烯 三萜 系统进化树

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暗紫贝母FPS基因克隆与表达特性分析 被引量：4

4

作者 张志勇 陈莹 +3 位作者 江学波 祝漂 曾燕羚 齐泽民 《种子》 北大核心 2019年第11期39-45,共7页

法尼基焦磷酸合酶(FPS)是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶。为探究FPS在暗紫贝母生物碱合成代谢过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了暗紫贝母法基尼焦磷酸合酶基因的全长cDNA序列,命名为FrFPS,GenBank登录号为KX 90048... 法尼基焦磷酸合酶(FPS)是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶。为探究FPS在暗紫贝母生物碱合成代谢过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了暗紫贝母法基尼焦磷酸合酶基因的全长cDNA序列,命名为FrFPS,GenBank登录号为KX 900485。该序列全长1333 bp,具有长度为1059 bp的完整开放阅读框,编码352个氨基酸,预测分子量40.13 kDa,等电点pH值为5.17。FrFPS基因的推导氨基酸序列含有高等植物FPS蛋白的典型保守结构域,亚细胞定位预测其在细胞质、线粒体基质空间及微体上。系统进化分析显示,暗紫贝母与铁炮百合处于同一分支,其亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析结果表明,FrFPS主要在鳞茎表达,且表达量随海拔梯度升高而降低,而在茎、叶中表达量很低。HPLC测定暗紫贝母鳞茎中生物碱含量,发现随海拔梯度升高生物碱含量降低。研究认为,FrFPS基因响应了对不同海拔梯度的应答。 展开更多

关键词 暗紫贝母 fps 基因克隆 基因表达

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三疣梭子蟹fps克隆及其在卵巢发育中的表达分析 被引量：4

5

作者 朱韬 朱冬发 +3 位作者 邱锡尔 周彦琦 柳志业 谢熙 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期10-14,19,共6页

法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的... 法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的序列全长(Gen Bank登录号:KM013803)。结果显示:Ptfps cDNA全长为2 360 bp,开放阅读框长1 290 bp,编码429个氨基酸。生物信息学分析发现PtFPS具有7个异戊烯基转移酶的保守结构域,与已公布的内华达古白蚁FPS同源性最高(达到58%)。实时荧光定量PCR分析结果显示:fps主要在大颚器(MO)中表达,远高于其它组织的表达水平(P<0.01);在第1次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅳ期显著升高(P<0.05),之后略有下降;在第2次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅲ期显著升高(P<0.05),并在IV期达到最大。以上结果表明fps可能参与三疣梭子蟹卵巢发育的调控。 展开更多

关键词 三疣梭子蟹 法尼基焦磷酸合成酶 克隆 卵巢发育 表达水平

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枸骨IcFPS1基因的克隆、表达及生物信息学分析 被引量：3

6

作者 马良琼 曾慧 +3 位作者 罗彩霞 张威威 许锋 程水源 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期328-335,共8页

法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是三萜皂苷生物合途径的一个关键酶,为研究FPS基因在枸骨中的功能,该研究采用PCR技术将一个FPS基因的cDNA序列从枸骨叶中分离出来,并命名为IcFPS1。结果表明:根据测序结果分析发现... 法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是三萜皂苷生物合途径的一个关键酶,为研究FPS基因在枸骨中的功能,该研究采用PCR技术将一个FPS基因的cDNA序列从枸骨叶中分离出来,并命名为IcFPS1。结果表明:根据测序结果分析发现扩增获得的IcFPS1基因cDNA长度为1 591 bp,包含一个完整的开放阅读框,大小为1 029 bp。通过序列分析发现枸骨IcFPS1基因编码342个氨基酸,分子量和等电点分别为39.58 kDa和5.18。通过理化性质预测分析发现IcFPS1蛋白不含信号肽,不含有跨膜区域,该IcFPS1蛋白为亲水性蛋白质。通过序列多重比对发现IcFPS1蛋白质与其他植物的FPS蛋白质高度同源,有共同的保守区域和氨基酸序列,其中与西洋参FPS序列的相似性高达89%。通过系统进化树分析发现枸骨FPS蛋白与同属于被子植物的五加科植物FPS蛋白亲缘关系较近,说明FPS基因在进化过程中相对比较保守。根据蛋白调控网络预测分析结果发现该蛋白可能与IPP1、IPP2、GGPS3、GGPS6和ERA1相互作用,参与类异戊二烯的合成代谢过程。通过实时荧光定量PCR分析发现IcFPS1基因在枸骨各个组织部位中均有表达,其中在枸骨根中表达量最高,在茎和雌花中表达量最低。 展开更多

关键词 枸骨 法尼基焦磷酸合酶 三萜皂苷 克隆 表达

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PjFPS和Pjβ-AS双基因协同作用对珠子参皂苷生物合成的影响 被引量：1

7

作者 陈勤 刘美佳 +3 位作者 刘迪秋 曲媛 崔秀明 葛锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期428-436,共9页

法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同... 法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同作用。结果表明,PjFPS和Pjβ-AS是PJS生物合成途径中的关键酶基因,对珠子参皂苷的生物合成具有调节作用。过表达PjFPS和Pjβ-AS的细胞系中,PJS合成途径相关的多个关键酶基因的表达水平有不同程度的提高,且PJS的含量最高为普通细胞系的2.4倍。虽然单独过表达PjFPS也可增加PJS的合成,但双基因(PjFPS和Pjβ-AS)协同调控PJS合成的效果更好。 展开更多

关键词 三萜皂苷 生物合成 珠子参 法尼基焦磷酸合酶 β-香树脂醇合酶

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杧果FPPS基因的鉴定和序列分析

8

作者 盖江涛 朱敏 +3 位作者 党志国 陈华蕊 陈振玺 王鹏 《广东农业科学》 CAS 2016年第6期69-75,F0002,共8页

法尼基焦磷酸合成酶(Farnesyl Pyrophosphate Synthase,FPPS,EC∶2.5.1.1)是倍半萜合成中的一个关键酶,在植物萜类合成过程中有关键作用。以杧果FPPS基因为研究对象,以拟南芥FPPS基因为参考,通过BLAST方法从番木瓜、金钱橘、甜橙、苹果... 法尼基焦磷酸合成酶(Farnesyl Pyrophosphate Synthase,FPPS,EC∶2.5.1.1)是倍半萜合成中的一个关键酶,在植物萜类合成过程中有关键作用。以杧果FPPS基因为研究对象,以拟南芥FPPS基因为参考,通过BLAST方法从番木瓜、金钱橘、甜橙、苹果、小果野蕉、桃子、白梨、葡萄、中华猕猴桃、无油樟基因组数据中获得了FPPS基因,共19条FPPS基因序列,对其进行了系统进化分析和生物信息学分析。系统进化结果显示:双子叶植物纲果树与单子叶植物纲果树关系较远,同是双子叶植物纲的果树关系较近,同科果树亲缘关系更近。生物信息学分析结果显示:氨基酸序列中,酸性蛋白占94.7%,稳定性蛋白占84.2%,有信号肽的蛋白占5.3%,有导肽的蛋白占10.5%,所有蛋白均为有明显跨膜现象的亲水性蛋白;所有FPPS基因亚细胞定位于线粒体中,均有蛋白活性位点。 展开更多

关键词 杧果 萜类 法尼基焦磷酸合成酶 系统进化 生物信息学

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油茶种子法尼基焦磷酸酶基因的克隆与表达模式分析

9

作者 代忠迪 李思颖 丁健 《经济林研究》 北大核心 2024年第4期34-40,共7页

【目的】解析油茶CoFPPS基因的生物学特征和功能,及其在油茶种子角鲨烯合成过程中的作用机制。【方法】以高角鲨烯油茶品系‘WBL’为材料,利用转录组测序、qRT-PCR和气相色谱串联质谱等分析方法,挖掘油茶CoFPPS基因,通过基因克隆、生物... 【目的】解析油茶CoFPPS基因的生物学特征和功能,及其在油茶种子角鲨烯合成过程中的作用机制。【方法】以高角鲨烯油茶品系‘WBL’为材料,利用转录组测序、qRT-PCR和气相色谱串联质谱等分析方法,挖掘油茶CoFPPS基因,通过基因克隆、生物信息学分析、基因表达量分析和角鲨烯含量测定,解析CoFPPS基因的理化性质及其表达对种子角鲨烯含量的影响。【结果】油茶CoFPPS基因与NCBI数据库中茶FPPS1基因(XM_028249399.1)同源相似性达99.13%,CoFPPS开放阅读框为1029 bp,编码342个氨基酸,其蛋白相对分子质量为39332.14 Da,为酸性稳定蛋白质,肽链中无明显跨膜区;定位于细胞质,无信号肽;蛋白质高级结构以α-螺旋为主(222个,占64.91%),其三级结构的序列相似值为82.94%,QMEANDisCo Global值为0.81±0.05。油茶CoFPPS蛋白与中华猕猴桃、喜马拉雅凤仙花、香叶天竺葵、胡桃、花生和大豆的同源蛋白具有较高的相似性,且均属于Isoprenoid-Biosyn-C1超家族;油茶CoFPPS蛋白与狭叶油茶、朱红大杜鹃、羊踯躅、杜鹃、越橘、三七和竹节参的FPPS蛋白处于同一分支。qRT-PCR分析结果表明,高角鲨烯油茶品系发育期间种仁CoFPPS基因表达量呈现上升趋势,且与角鲨烯含量变化规律相似。【结论】油茶CoFPPS为类异戊二烯生物合成酶,与其他物种的FPPS蛋白可能具有相似的生物学功能,而且CoFPPS基因表达与油茶种子角鲨烯合成密切相关。 展开更多

关键词 法尼基焦磷酸酶 角鲨烯 油茶 基因克隆 基因表达分析

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青钱柳法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆及功能研究 被引量：3

10

作者 缪倩 曹小迎 +3 位作者 李长根 尹婷 李晓储 蒋继宏 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期323-329,共7页

青钱柳是集药用、材用和观赏等多种价值于一身的珍贵树种。法呢基焦磷酸合成酶(FPS)催化=牛儿基焦磷酸(GPP)与异戊烯基焦磷酸(IPP)缩合成法呢基焦磷酸(FPP),FPP是植物次生代谢产物倍半萜,三萜,甾醇等的前体。本研究通过RACE方法首次从... 青钱柳是集药用、材用和观赏等多种价值于一身的珍贵树种。法呢基焦磷酸合成酶(FPS)催化=牛儿基焦磷酸(GPP)与异戊烯基焦磷酸(IPP)缩合成法呢基焦磷酸(FPP),FPP是植物次生代谢产物倍半萜,三萜,甾醇等的前体。本研究通过RACE方法首次从青钱柳中扩增了法呢基焦磷酸合成酶的全长cDNA序列,序列命名为CpF-PS(Genbank登录号为GU121224),序列长度为1 420 bp,包含1 029 bp的开放阅读框,编码342个氨基酸残基,预测蛋白分子量为39.60 kDa。通过BlASTP分析,推断的青钱柳FPS蛋白序列与木本棉(Gossypium arboreum)(CAA72793.1)、橡胶树(Hevea brasiliensis)(BAF98301)等的FPS蛋白相似度较高。蛋白质保守区、特征区以及进化树分析初步证实扩增到的全长cDNA序列为青钱柳的FPS基因。将该基因连入酵母表达载体并转入麦角甾醇缺陷型酵母菌株CC25(MATa/MATalpha,deltaERG20/+),发现该基因可弥补营养缺陷使得CC25菌株在高温中正常生长,证明所得到的青钱柳CpFPS基因编码的蛋白是有功能的蛋白。 展开更多

关键词 青钱柳 法呢基焦磷酸合成酶 RACE 功能研究

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巴西橡胶树一个新的法尼基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析 被引量：4

11

作者 郭冬 李辉亮 +1 位作者 杨子平 彭世清 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期441-447,共7页

利用同源克隆的方法在橡胶树中获得一个新的法尼基焦磷酸合酶基因,命名为Hb FPS2。序列分析显示,Hb FPS2基因组序列长4 171 bp,由12个外显子和11个内含子组成,c DNA全长1 288 bp,包含1 029 bp的开放阅读框、105 bp的5′-UTR和154 bp的3... 利用同源克隆的方法在橡胶树中获得一个新的法尼基焦磷酸合酶基因,命名为Hb FPS2。序列分析显示,Hb FPS2基因组序列长4 171 bp,由12个外显子和11个内含子组成,c DNA全长1 288 bp,包含1 029 bp的开放阅读框、105 bp的5′-UTR和154 bp的3′-UTR,编码342个氨基酸,推测分子量为39.6 ku,等电点为5.27。氨基酸序列比对显示,Hb FPS2具有FPS家族保守的5个结构域。进化分析结果表明,Hb FPS2和Hb FPS1亲缘关系最近,与大戟科的蓖麻、大戟、麻风树法尼基焦磷酸合酶聚为一个亚类。定量PCR结果表明,Hb FPS2在橡胶树根、树皮、叶、花和胶乳等组织中均有表达,在花和胶乳中表达量较高,在根中表达量最低;茉莉酸和乙烯处理均能提高Hb FPS2基因的表达量,处理9 h时基因表达量分别提高了36倍和8倍。结果为分析法尼基焦磷酸合酶基因表达特性及其在天然橡胶生物合成途径中的作用机制奠定基础。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 法尼基焦磷酸合酶 特异表达 茉莉酸 乙烯

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三七法呢基焦磷酸合酶原核表达载体的构建及其表达 被引量：3

12

作者 周娟 赵瑞强 +1 位作者 陈莉 吴耀生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期130-133,共4页

在克隆得到三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)cDNA的基础上,构建原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,在37℃,1 mmol/L IPTG浓度条件下,诱导表达FPS融合蛋白,对诱导表达条件进行了优化。结果表明:成功构建了原核表达载体... 在克隆得到三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)cDNA的基础上,构建原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,在37℃,1 mmol/L IPTG浓度条件下,诱导表达FPS融合蛋白,对诱导表达条件进行了优化。结果表明:成功构建了原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并在大肠杆菌中成功表达FPS蛋白,分子量约为40 kD,为进一步开展FPS的蛋白纯化和功能分析奠定了基础。 展开更多

关键词 三七 法呢基焦磷酸合酶 原核表达 pET32a(+) 融合蛋白

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橡胶树胶乳高表达的法尼基焦磷酸合成酶的功能 被引量：3

13

作者 邓小敏 杨署光 田维敏 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第1期43-51,共9页

【目的】天然橡胶生物合成途径是典型的植物类异戊二烯代谢途径,MVA代谢途径是天然橡胶与萜类化合物所需的五碳构成单元IPP和DMAPP生物合成的主要途径之一。由2分子IPP和1分子DMAPP聚合形成的法尼基焦磷酸是乳管细胞天然橡胶生物合成的... 【目的】天然橡胶生物合成途径是典型的植物类异戊二烯代谢途径,MVA代谢途径是天然橡胶与萜类化合物所需的五碳构成单元IPP和DMAPP生物合成的主要途径之一。由2分子IPP和1分子DMAPP聚合形成的法尼基焦磷酸是乳管细胞天然橡胶生物合成的起始前体,厘清该起始物的合成酶酶学性质不仅有助于阐明天然橡胶生物合成机制,同时也为天然橡胶遗传改良提供酶学理论基础。【方法】对橡胶树热研7-33-97基因组中同源的3个预测的法尼基焦磷酸合成酶(HbFPS1、HbFPS2、HbFPS3)进行序列特征分析,优选胶乳中高表达的2个法尼基焦磷酸合成酶基因构建原核表达载体,经蛋白纯化与MALDI TOF质谱确证,并同时进行体外酶活性检测,最终评价其对体外橡胶合成效率的影响。【结果】橡胶树基因组含有的3个预测的法尼基焦磷酸合成酶都含有特征性的2个保守结构域“DDIMD”和“DDYXD”及相似的三维空间结构,其中胶乳高表达的HbFPS1和HbFPS2基因编码的蛋白氨基酸序列相似性达到95%,说明HbFPS1和HbFPS22个冗余基因可能经历了基因组中同源基因的后期拷贝事件。同时HbFPS1和HbFPS2基因能够正确地在大肠杆菌中表达,HbFPS3却难以正确折叠而形成包涵体,体现了这2类蛋白质N末端氨基酸明显的亲疏水性差异对蛋白可溶表达的影响。HbFPS1和HbFPS2蛋白在体外除了能够利用GPP为底物合成FPP外,还能够直接转化IPP和DMAPP生成FPP。同时,分别添加HbFPS1和HbFPS2蛋白能够提高体外橡胶合成效率并且存在蛋白剂量相关性特征。与对照相比,在特定的反应体系中,当HbFPS1和HbFPS2蛋白添加量增加时体外橡胶合成效率随之不同程度地提高,且在100μg时促进作用最明显。【结论】橡胶树胶乳中高表达的2个冗余基因HbFPS1和HbFPS2与HbFPS3基因编码蛋白的序列差异可能影响酶的活性。HbFPS1和HbFPS2蛋白确证是胶乳中能够促进天然橡胶合成的功能酶,而且能够直接聚合IPP和DMAPP生成天然橡胶合成起始物FPP。本研究建立了基于天然橡胶粒子的体外蛋白功能研究平台,并证明HbFPS1和HbFPS2酶在一定的含量下能够显著地提升橡胶合成效率。通过调控HbFPS1和HbFPS2酶活性将有助于橡胶树优质高产品种的改良与选育。 展开更多

关键词 橡胶树 法尼基焦磷酸合成酶 天然橡胶生物合成 胶乳

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青蒿高产株系001法呢基焦磷酸合酶基因的克隆、原核表达及酶活性测定 被引量：2

14

作者 韩军丽 李振秋 +1 位作者 叶和春 李国凤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期71-75,共5页

法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明... 法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明:克隆的FPS基因和文献已报道的2个青蒿FPS基因编码的氨基酸序列的同源性分别为98.83%和99.42%;原核诱导表达的His标签融合蛋白FPS的表达量高、可溶性好,具有FPS酶活性。 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶(fps) 青蒿(Artemisia annua L.) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化

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独行菜法尼基焦磷酸合酶基因的克隆与原核表达 被引量：1

15

作者 马利刚 赵乐 +3 位作者 付小蝶 冯卫生 匡海学 郑晓珂 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第9期92-97,共6页

从独行菜(Lepidium apetalum)中克隆强心苷合成途径的法尼基焦磷酸合酶(FPS)基因,并在大肠杆菌中表达,为进一步研究独行菜强心苷的合成途径提供参考。分析前期获得的独行菜幼苗转录组数据,选择其中注释为FPS且具有完整开放阅读框的序列... 从独行菜(Lepidium apetalum)中克隆强心苷合成途径的法尼基焦磷酸合酶(FPS)基因,并在大肠杆菌中表达,为进一步研究独行菜强心苷的合成途径提供参考。分析前期获得的独行菜幼苗转录组数据,选择其中注释为FPS且具有完整开放阅读框的序列,从独行菜叶片c DNA中通过PCR克隆该序列,并进行序列分析。结果表明,克隆得到独行菜FPS基因的cDNA序列,Gen Bank登录号KY366218,命名为La FPS。序列长度为1 332 bp,含有1 161 bp的开放阅读框,推测编码386个氨基酸。La FPS蛋白可能不含跨膜结构,定位于线粒体中,含有聚异戊二烯合成酶结构域。La FPS蛋白氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)FPS1蛋白相似性高达92%,进化树分析结果表明,La FPS与同为十字花科的拟南芥FPS1、遏蓝菜(Noccaea caerulescens)FPS1、高山南芥(Arabis alpina)FPS亲缘关系最近。构建的载体p ET-32a-La FPS可在大肠杆菌中成功诱导表达。表明成功克隆了独行菜FPS基因,并建立了其原核表达体系。 展开更多

关键词 独行菜 法尼基焦磷酸合酶 基因克隆 序列分析 原核表达

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调控橡胶树法尼基焦磷酸合酶基因转录因子的初步筛选 被引量：1

16

作者 郭冬 李辉亮 +1 位作者 杨子平 彭世清 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期2362-2367,共6页

为研究橡胶树中法尼基焦磷酸合酶基因(Hb FPS)的表达调控机制,采用酵母单杂交技术筛选了胶乳中与Hb FPS启动子结合的蛋白因子。将Hb FPS启动子与报告质粒p HIS2.1连接构建诱饵质粒p His-FPS,经筛选确定抑制背景表达的3-氨基三唑(3-amino... 为研究橡胶树中法尼基焦磷酸合酶基因(Hb FPS)的表达调控机制,采用酵母单杂交技术筛选了胶乳中与Hb FPS启动子结合的蛋白因子。将Hb FPS启动子与报告质粒p HIS2.1连接构建诱饵质粒p His-FPS,经筛选确定抑制背景表达的3-氨基三唑(3-aminotriazole,3-AT)浓度为10 mmol/L。同时以橡胶树胶乳m RNA为模板合成双链c DNA,并将双链c DNA、线性化的p GADT7Rec2载体和诱饵质粒p His-FPS共同转化酵母菌株Y187,两载体共转化效率为1.7×106 cfu/μg。筛选共得到阳性克隆36个,获得31条序列。对获得的c DNA序列进行生物信息学分析,得到2个转录因子序列,分别为类乙烯响应转录因子ERF003和Hb LMYC2。结果为进一步研究Hb FPS表达调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 橡胶树 法尼基焦磷酸合酶 转录因子

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黄花蒿法呢基焦磷酸合酶、紫穗槐二烯合酶双功能酶基因的构建、原核表达与功能鉴定 被引量：1

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作者 李振秋 王波 高瑞平 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期47-51,共5页

试验将青蒿素生物合成途径中催化两步连续反应的酶(法呢基焦磷酸合酶和紫穗槐二烯合酶)的基因进行融合,经大肠杆菌表达后鉴定其融合蛋白的功能。结果表明:融合蛋白具有了双功能酶活性。双功能酶基因的构建,为进一步将双功能酶基因转入... 试验将青蒿素生物合成途径中催化两步连续反应的酶(法呢基焦磷酸合酶和紫穗槐二烯合酶)的基因进行融合,经大肠杆菌表达后鉴定其融合蛋白的功能。结果表明:融合蛋白具有了双功能酶活性。双功能酶基因的构建,为进一步将双功能酶基因转入黄花蒿,提高青蒿素含量奠定了基础。 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶 紫穗槐二烯合酶 双功能酶 功能鉴定 黄花蒿

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龙脑樟法呢基焦磷酸合酶基因克隆及表达模式分析 被引量：1

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作者 杨琳 张杭颖 +3 位作者 杨帆 朱泽榕 李秋妹 张君诚 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第10期1998-2005,共8页

法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthetase,FPS)是萜类及其衍生物合成的关键限速酶。本研究以龙脑樟为材料,基于转录组测序,克隆CcFPS基因,利用生物信息学软件分析该基因编码的氨基酸序列特征,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检... 法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthetase,FPS)是萜类及其衍生物合成的关键限速酶。本研究以龙脑樟为材料,基于转录组测序,克隆CcFPS基因,利用生物信息学软件分析该基因编码的氨基酸序列特征,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测CcFPS基因的表达,分析龙脑樟根、茎、叶中该基因的表达与总萜含量的关系。结果表明:CcFPS基因的开放阅读框为1053bp,编码350个氨基酸,分子量为40.4kDa,等电点pI为5.25,亲水性平均值(GRAVY)为-0.299。氨基酸同源性与沉水樟最高(98.86%),含有7个相同的保守结构域和2个富含天冬氨酸的基序[DDXX(XX)D]。二级结构α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲的比例分别为61.14%、6.57%、2.86%和29.43%,三级结构预测与沉水樟极其相似。系统发育树(NJ树)结果显示,CcFPS蛋白与同为樟科的沉水樟、山苍子的FPS处于同一个分支上。CcFPS基因在龙脑樟的根、茎、叶中均有表达,且表达具有组织特异性,在叶中的相对表达量最高,根中次之,茎中最低。在CcFPS蛋白调控的萜类物质代谢通路中,茎中的总萜含量最高,根中次之,叶中最低。龙脑樟FPS基因表达与总萜含量具有相关性,为进一步解析FPS基因在龙脑樟萜类化合物合成过程中的作用提供参考。 展开更多

关键词 龙脑樟 法呢基焦磷酸合酶(fps) 基因表达 总萜

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所有的双膦酸盐都一样吗? 被引量：1

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作者 程群 朱汉民 刘忠厚 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第5期369-376,共8页

双膦酸盐是一类广泛应用于治疗骨代谢性疾病的化合物,这类化合物均含有共同的P-C-P的骨架结构,R侧链基团影响双膦酸盐的羟磷灰石结合活性及对破骨细胞的作用,所以各种双膦酸盐的不同特殊结构决定其抗骨吸收的效力。R侧链基团中的氮原子... 双膦酸盐是一类广泛应用于治疗骨代谢性疾病的化合物,这类化合物均含有共同的P-C-P的骨架结构,R侧链基团影响双膦酸盐的羟磷灰石结合活性及对破骨细胞的作用,所以各种双膦酸盐的不同特殊结构决定其抗骨吸收的效力。R侧链基团中的氮原子增强双膦酸盐抑制焦膦酸法尼酯合成的活性,促进破骨细胞凋亡。双膦酸盐结构的差异揭示了临床使用过程中它们的抗骨吸收活性和作用持续时间的差异,这种结构-功能的关系反映在临床观察结果中。许多大型临床试验发现各种双膦酸盐疗效的区别,如骨折干预试验(FIT)、利塞膦酸预防椎体骨折研究(VERT)和伊班膦酸预防椎体骨折研究(BONE)等,临床研究的数据显示利塞膦酸和阿仑膦酸具有降低椎体和非椎体骨折风险的能力,而伊班膦酸仅降低椎体骨折风险,对髋部和非椎体骨折的作用无足够的数据支持。不同双膦酸盐抗骨折作用的效力应该通过以骨折为研究终点的头对头试验证实。 展开更多

关键词 双膦酸盐 差异 焦膦酸法尼酯合成酶 抗骨折 临床研究

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菊叶香藜转录组数据库中FPPS基因的挖掘与生物信息学分析

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作者 付苏宏 雷鸣 +2 位作者 张勇群 施静 郝豆豆 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期831-842,共12页

为深入了解菊叶香藜法尼基焦磷酸合酶基因,该研究对菊叶香藜转录组数据库进行挖掘,获取了两条FPPS基因序列(DsFPPS1和DsFPPS2),并对DsFPPS1和DsFPPS2编码蛋白的理化性质、结构、功能、系统进化进行了分析。结果表明:DsFPPS1和DsFPPS2基... 为深入了解菊叶香藜法尼基焦磷酸合酶基因,该研究对菊叶香藜转录组数据库进行挖掘,获取了两条FPPS基因序列(DsFPPS1和DsFPPS2),并对DsFPPS1和DsFPPS2编码蛋白的理化性质、结构、功能、系统进化进行了分析。结果表明:DsFPPS1和DsFPPS2基因分别包含1029bp和969bp的开放阅读框,分别编码342个(DsFPPS1)和322个(DsFPPS2)氨基酸。DsFPPS1和DsFPPS2位于线粒体内,未发现信号肽和跨膜结构,DsFPPS1为稳定蛋白,DsFPPS2为不稳定蛋白。氨基酸序列比对发现DsFPPS1和DsFPPS2序列相似性为60.53%,均含有5个保守结构域和2个天冬氨酸富集区域。DsFPPS1和DsFPPS2二级结构主要由α-螺旋构成,三级结构为由8个α-螺旋形成的α-螺旋束,但DsFPPS2的三级结构中缺少一个α-螺旋A。系统进化树中DsFPPS1与藜科植物聚为一枝,与藜科植物遗传距离较近,而DsFPPS2单独聚为一枝。通过对菊叶香藜转录组数据库中FPPS基因的挖掘与生物信息学分析,为菊叶香藜FPPS的功能研究及其倍半萜类化合物的生物合成研究奠定了一定的理论基础。 展开更多

关键词 法尼基焦磷酸合酶 转录组 菊叶香藜 基因挖掘 生物信息学

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