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题名人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定
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作者
高云
王梁华
任娜
孙铭娟
郭爱云
焦炳华
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机构
第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室
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出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第3期259-263,共5页
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基金
上海市现代生物与新药产业发展基金(No.024319115)~~
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文摘
目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(147-312),对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500μg的重组蛋白,纯度为电泳纯。重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。
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关键词
内皮-单核活化多肽2
克隆表达
抗肿瘤
增殖抑制
凋亡
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Keywords
endothelail monocyte-activating polypeptide ⅱ
cloning and expression
antitumor effect
suppressionproliferation
apoptosis
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分类号
Q71
[生物学—分子生物学]
R730.5
[医药卫生—肿瘤]
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