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内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析
1
作者 杨玉莹 梁雄燕 +3 位作者 秦爱建 顾玉芳 张莹 钟蓓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期3-7,共5页
用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型e... 用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。 展开更多
关键词 内源性禽白血病病毒ev/j 基因克隆 序列分析
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我国鸡群J亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控——对我国动物疫病防控的启示 被引量：12
2
作者 崔治中 《现代畜牧兽医》 2015年第1期30-32,共3页
禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)是一种能引起禽类多种类型肿瘤的反转录病毒,包括A-J等10个亚群。其中J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of avian leukosis virus,ALV-J)是20世纪80年代末Payne等首先从肉鸡中分离鉴定出来的亚群。... 禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)是一种能引起禽类多种类型肿瘤的反转录病毒,包括A-J等10个亚群。其中J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of avian leukosis virus,ALV-J)是20世纪80年代末Payne等首先从肉鸡中分离鉴定出来的亚群。自1999年我国首次分离ALV-J以来,ALV-J已从肉用鸡群向蛋用型鸡群和地方品系鸡群传播。本文对我国鸡群J亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控作以简要介绍,以期对我国动物疫病防控产生新的启示。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 j亚群 疫病防控
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2株J亚群禽白血病病毒毒株的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：2
3
作者 郭雨欣 游广炬 +3 位作者 李晓齐 高丽 郑世军 王永强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期7-12,18,共7页
为了解我国J亚群禽白血病病毒(ALV)的流行特点和进化趋势,本试验从河北某鸡场疑似禽白血病的临床发病鸡的病料组织中,分离得到2株ALV-J毒株,分别命名为CAU2019和CAU2020。通过聚合酶链式反应(PCR)技术分段扩增分离株的全病毒基因组,连接... 为了解我国J亚群禽白血病病毒(ALV)的流行特点和进化趋势,本试验从河北某鸡场疑似禽白血病的临床发病鸡的病料组织中,分离得到2株ALV-J毒株,分别命名为CAU2019和CAU2020。通过聚合酶链式反应(PCR)技术分段扩增分离株的全病毒基因组,连接pEASY-Blunt Zero载体后进行序列测定,并对获得的基因组序列与ALV各亚群毒株序列进行序列比对及遗传进化分析。结果表明,2个分离株与ALV各亚群毒株的gag和pol段基因相对保守,而LTR、gp85及gp37段基因变异较大。此外,CAU2019在3′UTR处有2段长度为30 bp和11 bp的不连续的碱基缺失,CAU2020在3′UTR处有1段长度为29 bp的碱基缺失。由gp85和LTR基因构建的遗传进化树可知,2个分离株在遗传关系上与J亚群毒株JS16JH9亲缘关系最近。结果表明本试验分离的2株病毒均为J亚群禽白血病病毒毒株,并且为国内ALV-J流行株的突变株。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 j亚群 分离鉴定 全基因组序列分析
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鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响
4
作者 朱丽霖 王后坤 +4 位作者 陈雪阳 刘晶 梁雄燕 方春 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期310-316,共7页
【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(IFIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进... 【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(IFIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进行PCR扩增,利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接,构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序。将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,通过Western blotting鉴定抗体的特异性,利用间接ELISA测定抗体的效价。将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5转染DF-1细胞,24 h后接种ALV-J,通过Western blotting检测DF-1细胞中过表达IFIT5对ALV-J复制的影响。【结果】试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因,并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5。pET-28a-IFIT5可以表达约56 ku的可溶性蛋白His-IFIT5,Western blotting结果显示,制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的IFIT5蛋白,效价为1∶32 000。pcDNA5-flag-IFIT5能在DF-1细胞中高效表达,且在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。【结论】本研究制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体具有较高的反应性和特异性;在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。本试验结果为深入研究IFIT5蛋白的生物学功能提供参考。 展开更多
关键词 IFIT5基因 j型禽白血病病毒(ALV-j) 原核表达 多克隆抗体
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1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析 被引量：3
5
作者 陈玫婷 郑从森 +6 位作者 梁泽贤 林巧儿 常传哲 周俊 冯军 李林林 覃丽梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1785-1795,共11页
【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行... 【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%~94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个的B细胞线性表位。该env蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大,为38.29%。【结论】env基因是导致ALV遗传变异的关键基因,其编码的囊膜蛋白env具有不稳定性,存在多个蛋白修饰位点和抗原表位。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) j亚群 ENV基因 生物信息学
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ALVE的筛查整合及其对坝上长尾鸡生产性能的影响
6
作者 高启萌 董娇娇 +4 位作者 王涛 郭艳丽 冯凯迪 王茂森 李兰会 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第12期71-76,共6页
试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝... 试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝上长尾鸡中ALVE的整合,对ALVE-6和ALVE-B5整合与坝上长尾鸡产蛋、体重的关系进行双因素方差分析。配对卡方检验分析ALVE-6整合与ALV-p27抗原阳性的关联。结果发现:24条白血病病毒基因组分化为ALVE、禽外源性白血病病毒K亚群(ALVK)和ALVE与ALVK重组(ALVK+E/K)、禽外源性白血病病毒A亚群(ALVA)和ALVE与ALVA重组(ALVA+E/A)三大分支。病毒基因组的env区分化系数最高为0.641,3′UTR区分化系数最低为0.050,相对保守。4种ALVE在坝上长尾鸡基因组中有整合,ALVE-6的整合率最高,为87.63%。与ALVE-6阴性相比,ALVE-6阳性坝上长尾鸡的体重显著提高(P<0.05)。ALVE-6整合的PCR检测结果与ALV-p27抗原ELISA检测结果相互独立。研究表明,坝上长尾鸡具有较高的ALVE-6整合率,ALVE-6整合对坝上长尾鸡的生产性能有提升作用,且ALVE-6的整合不影响ALV-p27抗原检测结果,该研究结果为ALVE在选育生产性能优良的坝上长尾鸡中的应用提供了支持。 展开更多
关键词 禽内源性白血病病毒 坝上长尾鸡 ALVE-6 生产性能
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七彩山鸡内源性禽白血病病毒的鉴定及其env基因序列分析 被引量：4
7
作者 刘健 李凯航 +7 位作者 鞠厚斌 李鑫 葛菲菲 杨德全 杨显超 葛杰 邓波 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期71-75,共5页
为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p2... 为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p27抗原均未被检测到。对ALV p27抗原阳性细胞培养物进行env基因的扩增,最终得到了1株内源性ALV前病毒序列,其基因序列与已知的禽白血病病毒同源性为39.1%~66.7%。以上结果表明,该七彩山鸡品系中存在内源性禽白血病病毒感染。 展开更多
关键词 七彩山鸡 内源性禽白血病病毒 检测 分析
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洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡禽内源性反转录病毒基因检测与分析
8
作者 李拓凡 梁雄燕 +2 位作者 叶丽珣 万亮 杨玉莹 《湖北农业科学》 2016年第7期1762-1765,共4页
为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和e... 为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和ev/J三种禽内源性反转录病毒基因序列;核酸序列同源性分析显示,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的EAV、ev loci和ev/J之间的同源性分别为98.8%,99.6%和99.6%;进化树分析显示,两种鸡内的三种禽内源性反转录病毒均分别位于进化树的同一分支,表明洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡内源性反转录病毒具有共同的祖先并且进化路径相似。洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡的ev/J与ALV-J原型株HPRS-103同源性高于98%,且进化树处于同一分支。而与ALV-J国内分离株SD9901、YZ9901毒株的同源性较低,并且进化树位于不同分支,表明这两种鸡的ev/J可能与ALVJ原型株HPRS-103亲缘关系更近,而与国内的外源性ALV-J分离毒株SD9901、YZ9901亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禽内源性反转录病毒 ev LOCI ev/j
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