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青海湖盐单胞菌Ectoine合成基因簇ectABC的重组共表达 被引量:6
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作者 朱德锐 韩睿 +4 位作者 沈国平 龙启福 李丹丹 刘建 刘德立 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期358-367,共10页
盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(H... 盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(HPLC)分析不同盐梯度下QHL1胞内Ectoine的积聚量,并借助于染色体步移技术(Genome walking)捕获QHL1菌株的Ectoine生物合成基因簇ect ABC,利用分子克隆技术分析ect ABC基因簇的异源重组表达(E.coli BL21)。研究结果表明:胞内Ectoine的积聚量随着培养基中Na+浓度的增加而增加,最大积聚量为167.1 mg/g细胞干重(1.0 mol/L Na+),但菌体生长却受到高浓度Na+的强烈抑制作用。QHL1的ect ABC操纵子全长序列为3580 bp,结构基因ect A(579 bp)、ect B(1269 bp)与ect C(390 bp)串联排列。基于生物信息学预测分析,两个启动子(δ70与δ38因子控制)和若干未知功能的保守模序(Motifs)存在于QHL1的ect操纵子上游。构建重组表达载体p ET-28-ect ABC,并在E.coli BL21中异源表达ect ABC基因簇(2438 bp)。SDS-PAGE结果显示Ect A、Ect B和Ect C分别为27.2、52.5和20.8 k D,与预测结果一致,表明ect A、ect B和ect C基因能在E.coli BL21中实现异源共表达,为构建Ectoine合成代谢基因整合的系统代谢工程,并实现低盐发酵控制和过量化生产提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 ectoine ECT ABC基因簇 结构基因 共表达
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天然产物Ectoine与Hydroxyectoine的生物工程及医学应用研究进展 被引量:12
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作者 张欣 刘静 朱德锐 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期882-887,共6页
四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等... 四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等极端环境条件下,Ects不仅能够平衡细胞的渗透压,而且对蛋白质、DNA、细胞膜以及整个细胞提供抗逆协助作用。本文综述了Ects对生物大分子和细胞的保护与稳定作用,以及在临床疾病治疗应用方面的辅助作用,并讨论与展望了Ects在生物医药制剂和生物保健开发等方面的应用前景。 展开更多
关键词 ectoine 羟基化四氢嘧啶 有机相容溶质 生物工程 医学应用
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南极深海底泥中产Ectoine中度嗜盐菌NJS-2的分离筛选及其性质研究 被引量:3
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作者 傅英楠 陈志亮 +1 位作者 姜蔚宇 陈荣忠 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期402-407,共6页
从南极深海底泥中分离到一株中度嗜盐菌NJS-2,经过16S rDNA(已提交GenBank,其登录号为DQ789389)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为色盐杆菌属(Chromohalobacter).以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括8种相关种... 从南极深海底泥中分离到一株中度嗜盐菌NJS-2,经过16S rDNA(已提交GenBank,其登录号为DQ789389)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为色盐杆菌属(Chromohalobacter).以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括8种相关种属在内的系统发育树.同源性分析表明,NJS-2与Chromohalobacter salexigens的16S rDNA相似性达到99%以上,应归属于色盐杆菌属,命名该菌株为Chromohalobactersp.NJS-2.研究了菌株NJS-2的相容性溶质四氢嘧啶(Ectoine)的累积及累积条件.研究发现,30℃条件下,在含2 mol/L NaCl的培养基中培养48 h,可最大诱导生成Ectoine 300 mg/L.反复渗透性休克试验表明:NJS-2在低渗条件下能够快速将细胞内的Ectoine分泌到细胞外,而在高渗环境中能够较快地重新合成. 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 相容性溶质 ectoine 16S RDNA “细菌挤奶”工艺
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ECTOINE对糖化酶在逆环境下的保护作用 被引量:3
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作者 张春宇 张苓花 +2 位作者 王克菲 永田進一 王运吉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2006年第6期17-19,共3页
研究了ectoine对糖化酶在某些逆环境下的保护作用。结果表明e:ctoine对经高温、干燥、低温、高浓度盐条件处理的糖化酶均有明显的保护作用,4.0mmol/L的ectoine可使经90℃处理的糖化酶的残余酶活力提高49.2%;4.5 mmol/L的ectoine可使经... 研究了ectoine对糖化酶在某些逆环境下的保护作用。结果表明e:ctoine对经高温、干燥、低温、高浓度盐条件处理的糖化酶均有明显的保护作用,4.0mmol/L的ectoine可使经90℃处理的糖化酶的残余酶活力提高49.2%;4.5 mmol/L的ectoine可使经干燥处理的糖化酶的残余酶活力提高49.8%;使经-20℃处理的糖化酶的残余酶活力提高21.7%;3.0mmol/L的ectoine可使经4mol/LNaCl处理的糖化酶的残余酶活力提高19.1%。 展开更多
关键词 ectoine 糖化酶 残余酶活力 酶保护剂
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Halobacillus trueperi SL39 Ectoine诱导生成条件研究 被引量:1
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作者 赵轶男 张苓花 +2 位作者 张冠群 永田进一 王运吉 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期59-62,共4页
研究了耐盐菌Halobacillus trueperiSL39在NaCl的诱导下,体内合成渗透压补偿溶质Ectoine,并优化Ectoine合成的诱导条件。采用高效液相色谱检测Ectoine合成量,结果表明,耐盐菌Halobacillus trueperiSL39合成Ectoine的最适诱导条件为30℃... 研究了耐盐菌Halobacillus trueperiSL39在NaCl的诱导下,体内合成渗透压补偿溶质Ectoine,并优化Ectoine合成的诱导条件。采用高效液相色谱检测Ectoine合成量,结果表明,耐盐菌Halobacillus trueperiSL39合成Ectoine的最适诱导条件为30℃,初始pH 7.0,NaCl浓度2.0 mol/L,诱导48 h,合成量高达304.8 mg/L,胞外释放量为90.11%。 展开更多
关键词 Halobacillus trueperi SL39 ectoine诱导合成 高效液相色谱
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Ectoine高产菌株Halomonas sp.XH26的鉴定及紫外诱变选育 被引量:18
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作者 田磊 张芳 +3 位作者 沈国平 高翔 龙启福 朱德锐 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期31-35,共5页
通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原... 通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原始菌株2倍以上的正向突变菌株,HPLC测定胞内Ectoine产量,并对突变株进行连续培养,研究Ectoine的产量稳定性。实验结果显示:原始菌株XH26(Ectoine优化产量456.82 mg/L±15.72 mg/L,CDW 0.71 g/g±0.04 g/g),经9轮紫外循环诱变处理后(50 s为最佳诱变时间),获得7株高产Ectoine突变菌,Ectoine产量均大幅提高(约200%)。其中,积聚量最大的菌株HU09-32,产量可达1351.09 mg/L±17.69 mg/L(增幅290%),将7株突变菌连续培养40 d(接种2 d/次),胞内Ectoine产量稳定,生长特性、增殖速度与积聚量明显优于原始菌株XH26,具有很好的发酵生产和工业应用潜力。 展开更多
关键词 盐单胞菌 ectoine 紫外诱变 积聚量 突变育种
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高效液相色谱检测青海湖嗜盐菌胞内积聚的相溶物质四氢嘧啶 被引量:15
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作者 李耀东 龙启福 +4 位作者 李文军 芮豪辰 刘建 杨芳 朱德锐 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1687-1692,共6页
从20份青海湖水样中,分离获得了35株中度嗜盐菌株.耐盐梯度实验表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.采用80%乙醇法抽提中度嗜盐菌胞内的Ectoine,利用TLC和HPLC分析,结果... 从20份青海湖水样中,分离获得了35株中度嗜盐菌株.耐盐梯度实验表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.采用80%乙醇法抽提中度嗜盐菌胞内的Ectoine,利用TLC和HPLC分析,结果表明:青海湖中度嗜盐菌中,大多数胞内积聚相溶物质Ectoine;在最适生长盐度下,中度嗜盐菌QHL1、QHL5、QHL10、QHL26和QHL28的胞内Ectoine含量分别为258.6μg·mL-1、325.47μg·mL-1、208.8μg·mL-1、292.31μg·mL-1和295.13μg·mL-1,以此初步获得5株具有Ectoine高产潜力的野生菌株. 展开更多
关键词 青海湖 中度嗜盐菌 相溶物质 ectoine HPLC法
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