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犬巴贝斯虫和犬埃立克体双重纳米PCR方法的建立及初步应用
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作者 梁谦学 朱正 +4 位作者 王博永 李连燕 吴文德 李恭贺 郑喜邦 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期90-95,共6页
旨在建立一种同时检测犬巴贝斯虫(Babesia canis)和犬埃立克体(Ehrlichia canis)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法。以疑似犬巴贝斯虫病和埃立克体病血样DNA为模板,用常规双重PCR和双重纳米PCR检测犬巴贝斯虫18S rRNA和犬埃立克体16S rRNA... 旨在建立一种同时检测犬巴贝斯虫(Babesia canis)和犬埃立克体(Ehrlichia canis)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法。以疑似犬巴贝斯虫病和埃立克体病血样DNA为模板,用常规双重PCR和双重纳米PCR检测犬巴贝斯虫18S rRNA和犬埃立克体16S rRNA,并对PCR的退火温度和引物浓度等参数进行了优化。结果显示,双重纳米PCR方法具有良好特异性和灵敏性,与其他4种犬常见病原体无交叉反应,对犬巴贝斯虫和犬埃立克体的最低核酸检测量分别为2.07×10^(3)和1.92×10^(3)copies/μL,其灵敏性比常规PCR高100倍。为了解南宁地区犬巴贝斯虫和犬埃立克体的流行情况,采用该方法对来自南宁市5家宠物医院的152份血清样品进行了检测。结果显示,犬巴贝斯虫和犬埃立克体感染率分别为2.63%和9.87%,混合感染率为1.32%。该双重纳米PCR方法为犬巴贝斯虫和埃立克体病早期快速诊断提供了新方法。 展开更多
关键词 双重纳米pcr 犬巴贝斯虫 犬埃立克体 病原检测
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禽流感病毒H7和N2亚型nano-dPCR检测方法的建立和应用 被引量:2
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作者 李丹 谢芝勋 +7 位作者 李孟 罗思思 张民秀 谢丽基 华俊 粟永春 翟国胜 黄娇玲 《山西农业科学》 2023年第6期709-715,共7页
为建立一种同时检测H7亚型和N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,从GenBank中分别下载H7亚型AIV的HA基因序列和N2亚型AIV的NA基因序列,采用Primer 7.0和Oligo 6.0软件设计了2对特异性引物,通过对nano-dPCR反应条件进行... 为建立一种同时检测H7亚型和N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,从GenBank中分别下载H7亚型AIV的HA基因序列和N2亚型AIV的NA基因序列,采用Primer 7.0和Oligo 6.0软件设计了2对特异性引物,通过对nano-dPCR反应条件进行优化确定最佳反应体系;利用优化好的反应体系开展nano-dPCR方法的特异性和敏感性试验;采集活禽市场家禽咽喉及泄殖腔拭子样品进行临床样品检测并进行验证。结果表明,成功建立了一种同时检测H7亚型(723 bp)和N2亚型(314 bp)AIV的nano-dPCR方法,该方法特异性良好,其他亚型禽流感病毒及常见禽类呼吸道病毒均未出现特异性的条带,H7亚型AIV和N2亚型AIV的最低核酸检测量分别达到了5×103、5×103拷贝/μL,其敏感性是普通双重PCR检测方法的10倍,其对临床样品检测结果准确率达到100%,可以用于禽流感临床样品鉴别诊断和日常防控监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 双重纳米pcr H7亚型 N2亚型
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PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用 被引量:6
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作者 梁琳 逄春华 +5 位作者 罗亚坤 周灵 王静 刘畅 刘琪 崔尚金 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3440-3445,共6页
本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重纳米PCR(nanodPCR)方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化... 本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重纳米PCR(nanodPCR)方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。 展开更多
关键词 双重纳米pcr 猪圆环病毒2型(PCV2) 猪圆环病毒3型(PCV3) 病原检测
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同时检测H5和N8亚型AIV双重纳米PCR方法的建立和应用 被引量:1
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作者 李丹 李孟 +7 位作者 谢芝勋 罗思思 张民秀 谢丽基 黄娇玲 华俊 粟永春 阮志华 《江西农业学报》 CAS 2022年第9期102-107,共6页
建立了一种同时检测H5亚型和N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,运用该方法可以同时检测出H5亚型和N8亚型AIV。登录GenBank下载H5亚型AIV HA和N8亚型AIV NA基因的序列进行比对分析,依据分析结果进行特异性引物的设计... 建立了一种同时检测H5亚型和N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,运用该方法可以同时检测出H5亚型和N8亚型AIV。登录GenBank下载H5亚型AIV HA和N8亚型AIV NA基因的序列进行比对分析,依据分析结果进行特异性引物的设计。经过多次验证实验,筛选出最佳的两对引物组合进行nano-dPCR反应体系的建立并优化反应条件,同时进行特异性实验、敏感性实验和临床样品检测验证。实验结果表明:该方法特异性良好,其他不同禽流感亚型及禽病病原体均未扩增出任何特异性条带,H5亚型AIV和N8亚型AIV的最低核酸检测量均达到了5×102拷贝/μL,其敏感性是普通PCR检测方法的100倍,可以用于临床样品检测。所建立的nano-dPCR检测方法可以同时对H5亚型和N8亚型AIV进行检测,具有很好的特异性和敏感性,为H5亚型和N8亚型AIV防控提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 N8亚型 双重纳米pcr
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