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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立
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作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页
为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接ELISA 抗体检测
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1株表达新城疫病毒F蛋白重组乳酸菌的安全性评价
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作者 张甜甜 翟延庆 《现代畜牧兽医》 2025年第7期22-27,共6页
研究旨在对1株表达新城疫病毒(NDV) F蛋白的重组乳酸菌LP3-2进行安全性评价。将菌株LP3-2接种于MRS平板培养后进行革兰氏染色、镜检,观察其菌落、菌体形态;之后通过血平板培养检测其溶血性,采用最低抑菌浓度测定法(MIC)评估菌株LP3-2对... 研究旨在对1株表达新城疫病毒(NDV) F蛋白的重组乳酸菌LP3-2进行安全性评价。将菌株LP3-2接种于MRS平板培养后进行革兰氏染色、镜检,观察其菌落、菌体形态;之后通过血平板培养检测其溶血性,采用最低抑菌浓度测定法(MIC)评估菌株LP3-2对7种常用抗生素的敏感性;通过经口灌胃(每日每只小鼠5.0×10^(7)~5.0×10^(9) CFU/0.2 mL,持续28 d)的方式感染小鼠,分析菌株LP3-2的动物致病性。结果显示,LP3-2在血平板上无溶血现象,对测试抗生素均表示敏感。经口灌胃悬菌液的小鼠均未出现明显的临床症状,小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均无肉眼可见病变,各试验组小鼠血清肌酐(CREA)含量均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,该株表达NDV F蛋白的重组乳酸菌具有较好的安全性,试验结果为其在新型疫苗研发等领域的进一步应用提供了安全基础,但仍需进一步深入研究其长期安全性及潜在风险。 展开更多
关键词 重组乳酸菌 新城疫病毒 致病性 溶血性 药物敏感性
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稳定表达鸡Nectin4、SLAM的BHK21细胞系的建立和初步应用
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作者 程沛茹 方文秀 +5 位作者 谭磊 宋翠萍 孙英杰 廖瑛 丁铲 仇旭升 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期62-68,共7页
前期研究发现,信号淋巴细胞活化分子(signaling lymphocyte activation molecule,SLAM or CD150)和脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4(poliovirus receptor-related protein 4,PVRL4 or Nectin4)是麻疹病毒属副黏病毒的主要细胞受体,也参与... 前期研究发现,信号淋巴细胞活化分子(signaling lymphocyte activation molecule,SLAM or CD150)和脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4(poliovirus receptor-related protein 4,PVRL4 or Nectin4)是麻疹病毒属副黏病毒的主要细胞受体,也参与禽副黏病毒NDV感染的感染过程[1]。为了验证鸡源Nectin4(chNectin4)和鸡源SLAM(chSLAM)在NDV感染中的作用,本研究构建了分别稳定表达chNectin4和chSLAM的BHK21细胞系。感染实验结果显示,稳定表达chNectin4和chSLAM细胞系在接种NDV La Sota株后12 h和24 h NP mRNA水平显著高于亲本细胞,表明chNectin4和chSLAM有助于促进NDV在BHK21细胞系中的增殖,其中chNectin4的促NDV增殖作用更加明显。本研究为进一步研究鸡Nectin4和SLAM在NDV感染中的作用以及NDV疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Nectin4 SLAM BHK21细胞系 新城疫病毒
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神经酰胺代谢酶SGMS2对NDV复制和增殖的影响
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作者 冯亦亦 代军 +6 位作者 谭磊 孙英杰 宋翠萍 廖瑛 丁铲 仇旭升 刘秀梵 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期146-155,共10页
鞘磷脂(SM)和神经酰胺(Cer)是新城疫病毒(NDV)囊膜的主要磷脂成分。鞘磷脂合成酶2(SGMS2)是SM合成调控酶。前期研究发现NDV感染的DF-1中鸡SGMS2基因显著上调,表明该变化与NDV感染有关。本研究通过克隆获得了鸡SGMS2基因,进行生物信息学... 鞘磷脂(SM)和神经酰胺(Cer)是新城疫病毒(NDV)囊膜的主要磷脂成分。鞘磷脂合成酶2(SGMS2)是SM合成调控酶。前期研究发现NDV感染的DF-1中鸡SGMS2基因显著上调,表明该变化与NDV感染有关。本研究通过克隆获得了鸡SGMS2基因,进行生物信息学分析发现:与人和鼠同源性分别为93.0%和92.4%;跨膜区在不同物种间高度保守,高达96.8%。通过qPCR检测细胞和组织中鸡SGMS2 mRNA表达情况,发现均处于恒定状态。NDV感染后,鸡SGMS2表达水平发生剧烈变动,病毒含量高的组织中,其表达量大幅下调。通过qPCR和Western blot检测转染pCMV6-FLAG-ch-SGMS2质粒的DF-1细胞,发现病毒NP的mRNA和蛋白水平显著下降,说明过量表达SGMS2抑制NDV的增殖作用。本研究为揭示鸡SGMS2蛋白功能奠定理论基础,也为阐明鸡SGMS2对NDV增殖的作用提供理论依据。 展开更多
关键词 鸡鞘磷脂合成酶2 基因克隆与表达 氨基酸序列分析 新城疫病毒
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耐热选育对新城疫LaSota疫苗株热稳定性的影响
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作者 赵庆庆 曾哲 +6 位作者 肖倩妮 李丽 冯贺龙 姚伦 罗青平 温国元 商雨 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期35-41,共7页
为了探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota疫苗株热稳定性相关的潜在氨基酸位点,将其在SPF鸡胚中自然传代、间隔耐热选育和连续耐热选育至20代,监测血凝活性和细胞感染力的热稳定性;对不同代次的病毒进行全基因组测序,筛... 为了探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota疫苗株热稳定性相关的潜在氨基酸位点,将其在SPF鸡胚中自然传代、间隔耐热选育和连续耐热选育至20代,监测血凝活性和细胞感染力的热稳定性;对不同代次的病毒进行全基因组测序,筛选传代过程中的突变位点,并利用蛋白结构生物学方法分析突变位点在病毒蛋白结构热稳定性中的作用。结果显示,经过间隔耐热选育和连续耐热选育的病毒血凝活性和细胞感染力热稳定性均有所提升。测序结果分析表明,与自然传代毒株相比,间隔耐热选育和连续耐热选育病毒分别共计有11和12个碱基突变,其中5个为错义突变(间隔耐热选育病毒为4个),NP蛋白Q169K(仅发生在连续耐热选育病毒)、HN蛋白G171S和V191I、M蛋白E170D以及L蛋白E1612K。蛋白结构分析结果显示,L蛋白E1612K的突变导蛋白二级结构改变;HN蛋白G171S的突变导致蛋白三级结构改变。通过耐热选育筛选出了5个可能与NDV LaSota疫苗株热稳定性相关的关键氨基酸位点,为NDV的耐热机理研究及ND耐热疫苗的研发提供理论支撑。 展开更多
关键词 新城疫病毒 LaSota疫苗株 耐热选育 鸡胚传代 热稳定性
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表达新城疫基因Ⅶ型F蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建及免疫保护评价
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作者 沈沁儒 申可 +2 位作者 邵红霞 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期45-57,共13页
为构建以火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)为载体的表达基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组疫苗,研究将密码子优化的基因Ⅶ型NDV F基因插入转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt后,通过CRISPR/Cas9技术,将F基因插入HVT Fc126疫... 为构建以火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)为载体的表达基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组疫苗,研究将密码子优化的基因Ⅶ型NDV F基因插入转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt后,通过CRISPR/Cas9技术,将F基因插入HVT Fc126疫苗株的US2区,获得重组疫苗rHVT-Fopt。将重组疫苗接种1日龄SPF鸡,28 d后攻毒以评价该重组疫苗的免疫保护效果。结果显示:构建的转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt在CEF细胞中表达良好;该重组疫苗具有良好的遗传稳定性且与HVT Fc126株的复制能力无显著差异;F基因在各主要脏器中均有表达且能诱导较高水平的体液免疫,对NDV F48E8强毒株的攻击能产生100%的免疫保护效力。研究表明,重组疫苗rHVT-Fopt可以作为针对鸡新城疫的候选新型疫苗株。 展开更多
关键词 重组火鸡疱疹病毒 新城疫病毒 基因编辑 F蛋白 免疫保护
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与新城疫病毒NP蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选和鉴定
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作者 韩银 谢紫葳 +2 位作者 严舒可 徐飞 陈瑞爱 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3942-3957,共16页
新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种急性接触性传染病,临床上常导致呼吸系统和消化系统的临床症状,NDV的广泛流行给家禽养殖业造成了巨大经济损失。NP(nucleocapsid)是NDV的一种核衣壳蛋白,在病毒复制... 新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种急性接触性传染病,临床上常导致呼吸系统和消化系统的临床症状,NDV的广泛流行给家禽养殖业造成了巨大经济损失。NP(nucleocapsid)是NDV的一种核衣壳蛋白,在病毒复制、介导免疫应答和引发细胞自噬方面具有重要作用,其是否存在其他相互作用的宿主蛋白尚不清楚。为了筛选与NDV NP互作的宿主蛋白,初步探索互作宿主蛋白对NDV复制的影响,为NDV抗病药物新靶点的筛选提供理论基础。利用真核表达载体pXJ40成功构建了NDV NP的真核表达质粒,通过免疫共沉淀、质谱分析、GST-pull down以及激光共聚焦等技术筛选出能与NP相互作用的宿主蛋白,进一步在DF-1细胞中通过敲低、过表达等方法探究互作宿主蛋白对NDV复制的影响。质谱结果筛选到与NP发生相互作用的潜在蛋白211个,对差异蛋白进行富集分析揭示了其可能发挥的生物学功能和参与的生物学过程,进一步验证了热休克蛋白家族成员70(HSP70)与NP相互作用,并且这种互作是由HSP70的SBD结构域介导的;NDV感染能下调宿主细胞内HSP70的表达;过表达HSP70能在蛋白和转录水平显著抑制病毒复制;敲低内源性HSP70和HSP70抑制剂均能显著促进NDV复制。本研究筛选出NDV NP的互作宿主蛋白HSP70,并且验证了过表达HSP70能显著抑制NDV复制,作为NDV感染的负调控因子,为设计以HSP70为靶点的抗病毒药物提供了新思路。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NP HSP70蛋白 免疫共沉淀技术
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绿原酸对新城疫病毒体外活性的影响
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作者 杨倩 杨澍垚 +3 位作者 王琪冉 张路青 孟佳 杨淑慧 《现代畜牧兽医》 2025年第5期8-11,共4页
为了探究绿原酸(CGA)对新城疫病毒(NDV)体外活性的影响,试验通过CCK8法、RT-qPCR法、间接免疫荧光法,探究了CGA对NDV处理DF-1细胞的毒性作用以及对病毒基因合成、在宿主细胞内复制情况的影响。结果显示,培养基中CGA含量为125 mg/L时,DF-... 为了探究绿原酸(CGA)对新城疫病毒(NDV)体外活性的影响,试验通过CCK8法、RT-qPCR法、间接免疫荧光法,探究了CGA对NDV处理DF-1细胞的毒性作用以及对病毒基因合成、在宿主细胞内复制情况的影响。结果显示,培养基中CGA含量为125 mg/L时,DF-1细胞存活率大于90%。培养2、6、12、24、48 h时,CGA治疗组细胞NDV-F基因拷贝数明显低于NDV处理组。培养至48 h时,NDV处理组细胞出现明显的细胞病变,表现为细胞融合,大量细胞空泡化;而CGA治疗组细胞病变不明显。间接免疫荧光检测结果显示,CGA治疗组细胞感染率明显低于NDV处理组。研究表明,CGA对NDV基因合成、病毒增殖具有明显的抑制作用,在防治新城疫的工作中具有巨大的潜力。 展开更多
关键词 新城疫病毒 绿原酸 抗病毒
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禽流感病毒与新城疫病毒多靶标核酸质谱检测方法研究及应用
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作者 高志强 赖平安 +9 位作者 宋悦谦 种焱 郭悠然 白子龙 郭惠民 汪琳 蒲静 史喜菊 任彤 赵相鹏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1386-1395,共10页
禽流感和新城疫是全球养禽业最具威胁的两种病毒性传染病,快速准确地病原检测和分型对于这两种动物疫病的早期防控和阻断传播具有至关重要的作用。本研究通过将微量多重RT-PCR、单碱基延伸和基于MALDI-TOF的质谱技术联合使用,针对禽流... 禽流感和新城疫是全球养禽业最具威胁的两种病毒性传染病,快速准确地病原检测和分型对于这两种动物疫病的早期防控和阻断传播具有至关重要的作用。本研究通过将微量多重RT-PCR、单碱基延伸和基于MALDI-TOF的质谱技术联合使用,针对禽流感和新城疫病毒建立了一种高通量核酸质谱检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行了评价。结果表明,建立的方法可即时同步检测禽流感病毒(A型通用)、H5、H7、H9亚型,新城疫病毒及其中强毒株,各个靶标的检测灵敏度为8.82~15.40 copies·μL^(-1),与其他禽病病原核酸无交叉反应,对12 copies·μL^(-1)的6种混合靶标的检测重复性均在75%以上。对179份实验室收集的送检样品(包括拭子样品和组织脏器)检测结果表明,与荧光RT-PCR检测方法相比,禽流感病毒通用检测靶标符合率为98.9%;其他靶标的符合率均为100.0%。本研究为禽流感、新城疫病毒的快速鉴别检测及重要亚型/株型的同步快速分型鉴定提供了一种新的高通量替代方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 多靶标 核酸质谱
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BHK-21细胞悬浮培养新城疫病毒工艺初步研究及免疫效果评价
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作者 任培森 吕文静 +4 位作者 刘学 尹喆 黄金海 刘海霞 李伊铭 《现代畜牧兽医》 2025年第4期14-18,共5页
试验旨在构建BHK-21细胞悬浮培养新城疫病毒A-Ⅶ株的高效培养工艺并评估其免疫原性。试验测试新城疫病毒A-Ⅶ株接种悬浮BHK-21细胞的最佳细胞初始密度、收获时间、接毒比例以及培养温度,以优化新城疫病毒A-Ⅶ株在BHK-21悬浮细胞中的培... 试验旨在构建BHK-21细胞悬浮培养新城疫病毒A-Ⅶ株的高效培养工艺并评估其免疫原性。试验测试新城疫病毒A-Ⅶ株接种悬浮BHK-21细胞的最佳细胞初始密度、收获时间、接毒比例以及培养温度,以优化新城疫病毒A-Ⅶ株在BHK-21悬浮细胞中的培养工艺,随后评估优化后的培养工艺所生产的疫苗的免疫原性。结果显示:在最佳培养工艺条件下,即BHK-21细胞初始密度为4.12×10^(6)cells/mL、病毒与细胞体积比为0.02%、35℃培养72h后收获,可以获得高效的新城疫病毒A-Ⅶ株悬浮培养物。使用血凝(HA)效价达到1∶512的悬浮培养病毒与鸡胚培养病毒分别免疫SPF鸡进行免疫原性比较,结果显示,悬浮培养病毒诱导的血凝抑制(HI)抗体效价显著低于鸡胚培养病毒(P<0.05)。研究表明,悬浮培养工艺在新城疫病毒A-Ⅶ株的生产中具有巨大潜力,但在免疫原性方面仍需进一步优化,以提升其诱导的抗体反应水平。 展开更多
关键词 BHK-21细胞 悬浮培养 新城疫病毒 免疫效果
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玉溪市鸡新城疫抗原、抗体调查研究
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作者 何帅 《现代畜牧兽医》 2025年第7期69-72,共4页
研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,... 研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,玉溪市鸡NDV抗体检测阳性率87.81%(1 405/1 600),其中规模场阳性率91.92%(1 103/1 200),散养场阳性率75.50%(302/400);NDV秋季抗体阳性率(89.75%,359/400)最高,春季抗体阳性率(86.25%,345/400)最低。玉溪市鸡NDV抗原检测阳性率0.38%(3/800),其中规模场阳性率0.25%(1/400),散养场阳性率0.50%(2/400);NDV冬季抗原检测阳性率(1.00%,2/200)最高,春、夏季抗原检测阳性率(0,0/200)最低。研究表明,玉溪市鸡NDV抗体合格率超过国家规定的群体免疫合格率大于70%的标准,玉溪市NDV群体免疫合格。调查结果明确了玉溪市鸡NDV免疫抗体水平及感染情况,可为玉溪市鸡新城疫的防控提供一定参考。 展开更多
关键词 新城疫 新城疫病毒 血凝-血凝抑制试验(HA-HI) 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
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免疫鸡血清新城疫病毒抗体水平与攻毒保护效果的相关性研究
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作者 沈欣悦 刘梅 +3 位作者 李建梅 俞燕 范建华 戴亚斌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期96-103,共8页
为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对... 为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示:抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原(P<0.01),约高1.5log2,而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原,但无显著差异(P>0.05),表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下,所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状,但存在不同程度的排毒现象,排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_(2)和≥14log_(2)时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性,为新城疫免疫控制提供了依据。 展开更多
关键词 新城疫 重组新城疫病毒灭活疫苗(A-Ⅶ株) 抗体效价 保护效果 排毒 相关性
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双靶向融合蛋白用于新城疫病毒La Sota株对鸭的免疫效率的提高作用
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作者 李玲 祝博森 +4 位作者 朱婷 商璐 邓碧华 卢宇 徐海 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2317-2323,共7页
本研究旨在探究双靶向融合蛋白用于新城疫病毒(NDV)La Sota毒株对鸭的免疫效率的提高作用,为提升鸭新城疫免疫防控能力做有益探索。将特异性结合囊膜病毒表面糖蛋白的红藻凝集素(GRFT)与靶向结合禽树突状细胞的纳米抗体分子(VHH)的编码... 本研究旨在探究双靶向融合蛋白用于新城疫病毒(NDV)La Sota毒株对鸭的免疫效率的提高作用,为提升鸭新城疫免疫防控能力做有益探索。将特异性结合囊膜病毒表面糖蛋白的红藻凝集素(GRFT)与靶向结合禽树突状细胞的纳米抗体分子(VHH)的编码基因进行串联表达,经大肠杆菌表达系统制备双靶向融合蛋白。利用组氨酸(His)标签纯化GRFT-VHH融合蛋白,采用有限稀释法定量评价融合蛋白与La Sota病毒的结合能力。用饱和结合融合蛋白的La Sota病毒制备疫苗,分组免疫无特定病原体(SPF)雏鸭,监测免疫后血凝抑制(HI)抗体效价以及IL-4、IFN-γ细胞因子水平。结果显示,构建的重组大肠杆菌能够高效表达融合蛋白,经Ni柱纯化回收的GRFT-VHH54、GRFT-VHH74蛋白质量浓度分别为230μg/mL、1350μg/mL,仅需100 ng融合蛋白即可完全结合1×10^(8)半数感染量(EID 50)病毒;NDV+GRFT-VHH54组免疫后21 d HI抗体效价达到7 log 22以上,血清中IL-4和IFN-γ含量分别为80.0 pg/mL、8.8 pg/mL,显著高于NDV单独免疫组(P<0.05)。双靶向融合蛋白GRFT-VHH54能够提高新城疫病毒La Sota株对鸭的免疫效率,可作为免疫增强剂做进一步的开发与应用。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白 靶向 免疫效率
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生物矿化对新城疫病毒LaSota株生物学特性及免疫原性的影响 被引量:1
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作者 张高峰 魏家阳 +8 位作者 冯贺龙 李丽 曾哲 田光明 聂仁锋 罗青平 温国元 魏红波 商雨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5663-5671,共9页
旨在研究生物矿化对新城疫病毒(NDV)LaSota株生物学特性及免疫原性的影响,为耐热活疫苗研发提供新思路。通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记,确定NDV的最佳生物矿化条件;将矿化后病毒接种BHK-21细胞,检测矿化对病毒增... 旨在研究生物矿化对新城疫病毒(NDV)LaSota株生物学特性及免疫原性的影响,为耐热活疫苗研发提供新思路。通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记,确定NDV的最佳生物矿化条件;将矿化后病毒接种BHK-21细胞,检测矿化对病毒增殖的影响,同时比较热处理后的矿化病毒在BHK-21细胞中的滴度变化情况;利用抗体中和试验检测矿化病毒的免疫原性;最后通过饮水免疫的方式评估矿化病毒在SPF雏鸡上的免疫效果。结果显示:生物矿化条件经优化后,LaSota株在4 mmol·L^(-1)Na_(2)HPO_(4)和3 mmol·L^(-1)CaCl_(2)条件下矿化效果最好,此时矿化病毒粒径最大,血凝效价最低,矿化率高达98.25%。矿化的LaSota株在BHK-21细胞上增殖起始时间迟于未矿化病毒,但两者的最终增殖滴度没有显著差异。经NDV抗体中和后,矿化病毒滴度的下降值为103.0 TCID_(50)·mL^(-1),显著低于未矿化组。在56℃水浴中孵育15 min后,矿化的LaSota株病毒滴度仅下降103.5 TCID_(50)·mL^(-1),与TS09-C耐热株的耐热特性相当。矿化的LaSota株免疫SPF雏鸡14 d后,抗体水平均高于未矿化LaSota株免疫鸡群。免疫后42和78 d进行攻毒试验,矿化LaSota株免疫鸡群的存活率分别为100%和60%。综上所述,本研究优化了NDV LaSota株的最佳矿化条件,矿化会延缓病毒的增殖速度,但不影响病毒的增殖滴度。经矿化后,能降低病毒与抗体的中和反应并提升其热稳定性,并可通过饮水免疫的方式对SPF雏鸡提供较好的保护效果。本研究证实通过生物矿化开发新城疫耐热活疫苗是一条切实可行的思路,也为开发其他病毒耐热活疫苗提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 新城疫病毒LaSota株 生物矿化 生物学特性 热稳定性 免疫原性
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表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建 被引量:1
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作者 田静格 徐鸣荷 +16 位作者 王向东 张意航 李岩 刘俊杰 李星雨 韩城昊 张伯顺 卜德新 于春梅 丛雁方 杨盼盼 乔麒龙 王增 李建丽 李永涛 王白玉 赵军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期659-665,共7页
为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa S... 为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 重组嵌合型新城疫病毒 gD蛋白 二联活疫苗
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高致病性新城疫病毒的分离和生物学特性分析 被引量:3
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作者 吴晓艳 张旭 +2 位作者 于天浩 康华裕 张彦龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期967-971,共5页
为鉴定导致黑龙江省肇源县2022年某养殖场鸭大量死亡的病原,并分析其生物学特性,本研究将病死鸭组织病料样品处理后接种9日龄SPF鸡胚连续传代分离出病毒后,利用PCR检测临床症状相似的各类禽源病毒,结果显示,除新型新城疫病毒(NDV)外未... 为鉴定导致黑龙江省肇源县2022年某养殖场鸭大量死亡的病原,并分析其生物学特性,本研究将病死鸭组织病料样品处理后接种9日龄SPF鸡胚连续传代分离出病毒后,利用PCR检测临床症状相似的各类禽源病毒,结果显示,除新型新城疫病毒(NDV)外未检测到其他病原。通过测定鸡胚半数致死量(ELD_(50))、平均致死时间(MDT)、1日龄雏鸡脑部致死指数(ICPI)及7日龄雏鸭的感染试验,评估分离株的毒力及致病性;对分离株F基因测序并进行遗传进化分析。结果显示,该病毒株的ELD_(50)为1×10^(-2)ELD_(50)/m L,MDT为58.6 h,ICPI为1.625,致病性试验结果显示,雏鸭全部死亡且解剖发现内脏组织等出现剖检病变;测序结果显示该分离株F基因全长1662 bp,其编码氨基酸裂解位点区序列为^(112)RRQRRF^(117),具有典型强毒力特性;F基因遗传进化树结果显示,该分离病毒属于Class II基因III型,与2000年~2017年在中国家禽中持续流行的病毒株聚为一大分支,且它们F基因序列的一致性为99.8%~99.9%,分离病毒与疫苗株Mukteswar、B1、La Sota、clone30、VG/VA、V4和中国标准嗜内脏速发型强毒株F48E8 F基因的一致性分别为99.6%、88.6%、88.4%、88.6%、88.4%、91.3%、92.1%。本研究为鸭新城疫的防控和疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 分离鉴定 Class II基因III型 遗传进化 生物学特性
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鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析 被引量:1
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作者 蒋立人 冯贺龙 +9 位作者 姜鑫瑞 王梓晨 张高峰 商雨 曾哲 姚伦 汪宏才 罗青平 田光明 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1632-1641,共10页
【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组... 【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为103.0 EID 50/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基因有较多互作关系,且在B细胞活化、分化、免疫系统发育等功能注释中均有参与。【结论】本研究结果揭示了鸡胚免疫NDV TS09-C株后法氏囊内调控B细胞活化、分化的潜在靶向基因及通路,为进一步研究该毒株鸡胚免疫后B淋巴细胞调控的分子机制提供新的信息。 展开更多
关键词 新城疫病毒(NDV) TS09-C株 鸡胚免疫 法氏囊 转录组分析
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鹅源class I类NDV生物学特性的研究及荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 李长宇 孙军峰 +3 位作者 赵冉 王芳芳 韩宗玺 刘胜旺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期923-930,共8页
为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;... 为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;利用制备的单因子血清进行交叉血凝抑制试验,分析其抗原性;将AH713/22株56℃水浴不同时间后检测HA效价,分析其耐热特性。结果显示,AH713/22株基因组长15198 bp,具有典型的class I类NDV的基因组结构和分子特征,属于基因1.1.2亚型。F蛋白裂解位点为ERQERL,HN蛋白长度不同于已往报道的病毒株,含有618个氨基酸;鸡胚平均死亡时间(MDT)为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为0.32,表明AH713/22属于弱毒株;抗原性检测结果显示AH713/22株与class II类基因II型NDV以及class I类代表性NDV之间存在不同程度的抗原性差异;耐热性试验显示AH713/22株在56℃热处理60 min后HA效价仍无显著变化,表明AH713/22株具有优良的热稳定性。进一步基于class I类基因1.1.2亚型NDV F基因的序列比对分析,针对其保守区域设计引物和探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法,结果显示该方法对质粒标准品的检测限为10^(2)拷贝数/μL,且能够特异性的检测class I类1.1.2亚型NDV,与其他常见的禽呼吸道病原核酸均无交叉反应。该方法用于临床样品检测结果与常规PCR检测结果一致。本研究系统鉴定了一株鹅源class I类NDV的遗传和分子生物学特性,加深了对我国class I类NDV遗传演化的认知,并建立了适用于我国优势基因型(1.1.2亚型)NDV的检测方法,为class I类NDV的监测和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 新城疫病毒 分子特征 抗原性 热稳定性 荧光定量RT-PCR方法
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六株鹅源新城疫病毒全基因序列分析及对雏鹅的致病性 被引量:1
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作者 张丹琳 王超 +2 位作者 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期61-69,共9页
为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6... 为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6株毒株间核苷酸和氨基酸相似性最高,但与基因Ⅶ型、La Sota等常用疫苗株相似性较低。F蛋白和HN蛋白部分功能位点氨基酸残基出现不同程度的变异。致病性试验结果表明基因Ⅻb亚型Goose/GD/F424/2019毒株对雏鹅有较强的致病性,死亡率高达87.5%,并出现脾脏肿大,呈“树枝状”样充血、腺胃乳头出血、十二指肠黏膜出血、胰脏变性出血、脑组织充血及水肿等典型病理变化症状。研究表明:从广东地区分离的6株鹅源NDV均是Ⅻb亚型且对雏鹅有较强的致病性,为进一步研究广东地区鹅源NDV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 基因Ⅻb亚型 遗传进化分析 致病性试验
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重组新城疫病毒rL-RVG抑制Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡 被引量:1
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作者 贡克文 田仪督 +2 位作者 何瑛珏 李洋 步雪峰 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期1485-1493,共9页
目的探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡。方法培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS溶液(对照组)处理HGC-2... 目的探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡。方法培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS溶液(对照组)处理HGC-27细胞后,用CCK-8、Transwell侵袭、细胞划痕实验检测胃癌HGC-27细胞的增殖、侵袭、迁移能力。加入铁死亡促进剂(erastin)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)促进剂(TBHQ)及抑制剂(ML385)作为干预组,脂质氧化试剂盒检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DCFH-DA荧光探针及流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Western blot、免疫荧光法检测Nrf2-GCLC-GPX4通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,rL-RVG和NDV处理后,细胞的存活率均下降,呈剂量、时间依赖性,且rL-RVG处理组较为显著(P<0.05);NDV和rL-RVG处理组胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭能力均受到抑制,后者较前者抑制更明显(P<0.05);与对照组比较,病毒组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量上升(P<0.05),rL-RVG组上升或下降的趋势较NDV组明显,且erastin组SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05);与对照组比较,TBHQ组、ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05);与rL-RVG组比较,rL-RVG+TBHQ组、rL-RVG+ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05)。结论重组新城疫病毒(rL-RVG)可通过Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡的发生,抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 重组新城疫病毒 胃癌细胞 铁死亡 核因子E2相关因子2 谷胱甘肽过氧化物酶4
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