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白术内酯Ⅰ调节cGAS-STING通路对乙型肝炎模型大鼠肝功能的影响
1
作者 韩成美 陈茂丽 任维鑫 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期615-619,共5页
目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)调节cGAS-STING通路对乙型肝炎病毒(HBV)感染大鼠肝功能的影响。方法:随机选择10只大鼠记为对照组(NC),其余大鼠尾静脉注射HBV抗原构建HBV模型。造模成功的大鼠随机分为HBV组、ATR-Ⅰ组(50μg/kg)、cGAS-ST... 目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)调节cGAS-STING通路对乙型肝炎病毒(HBV)感染大鼠肝功能的影响。方法:随机选择10只大鼠记为对照组(NC),其余大鼠尾静脉注射HBV抗原构建HBV模型。造模成功的大鼠随机分为HBV组、ATR-Ⅰ组(50μg/kg)、cGAS-STING通路抑制剂(RU.521)组(450μg/kg)、ATR-Ⅰ+RU.521组(50μg/kg ATR-Ⅰ+450μg/kg RU.521),每组10只,NC组、HBV组注射等量生理盐水,1次/d,持续1周。ELISA检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IFN-γ、IL-2、TNF-α、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)含量;HE染色检测肝脏组织病理学情况;Masson染色检测肝纤维化程度;Western blot检测肝组织cGASSTING通路蛋白表达。结果:HBV组较NC组胶原容积分数、ALT、AST、HBsAg、HBeAg含量、HA、LN和PCⅢ、IFN-γ、TNF-α和IL-2水平升高,cGAS、STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3及IFN-β水平下降(P<0.05);与HBV组比较,ATR-Ⅰ组肝脏损伤、肝纤维化程度改善,胶原容积分数、ALT、AST、HBsAg、HBeAg含量、HA、LN和PCⅢ、IFN-γ、TNF-α和IL-2水平下降(P<0.05),cGAS、STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3及IFN-β水平升高(P<0.05),RU.521组呈现相反趋势,RU.521消除了ATR-Ⅰ对HBV大鼠肝功能的改善作用。结论:ATR-Ⅰ可能通过激活cGAS-STING通路改善HBV大鼠肝功能。 展开更多
关键词 白术内酯ⅰ cGAS-STING通路 乙型肝炎病毒 肝纤维化 肝功能
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆与原核表达 被引量：9
2
作者 廖俊伟 张小飞 +4 位作者 黄显明 毛火云 尹秀凤 刘大伟 魏建忠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第7期49-52,共4页
根据GenBank上登录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列,设计一对特异性引物。通过RT-PCR的方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP3基因并将其5′端起始处稀有密码子同义突变。用限制性内切酶BamHⅠ/SalⅠ消化VP3基因片段和表达载体pGEX-6p-1后构建... 根据GenBank上登录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列,设计一对特异性引物。通过RT-PCR的方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP3基因并将其5′端起始处稀有密码子同义突变。用限制性内切酶BamHⅠ/SalⅠ消化VP3基因片段和表达载体pGEX-6p-1后构建重组表达质粒pGEX-VP3,转化E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析表明,VP3基因在大肠埃希菌中大量表达,表达产物的分子质量约为52 ku。Western blot检测表明,表达产物能与DHV-Ⅰ阳性血清发生反应,具有反应原性。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 VP3基因 克隆与表达
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3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析 被引量：10
3
作者 甘一迪 刘家森 +6 位作者 姜骞 郭东春 司昌德 孟庆文 韩凌霞 刘娣 曲连东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期952-957,共6页
通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1：161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似... 通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1：161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型。强毒DHV-1：161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1：YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关 DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列 变异株N-DHV：90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸（Q和D）,在第147和185位各缺失1个氨基酸（E和L）,而在变异株DHV：AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸（G、G） 不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒(DHV) VP1基因 序列分析
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎研究进展 被引量：7
4
作者 黄显明 张小飞 +2 位作者 魏建忠 李春芬 廖俊伟 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期78-81,共4页
鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭一种高度致死、高度传播性的病毒性传染病。该病以肝炎为主要特征,具有高发病率和高病死率。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细... 鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭一种高度致死、高度传播性的病毒性传染病。该病以肝炎为主要特征,具有高发病率和高病死率。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细菌混合感染,严重影响了养鸭业,造成了巨大的经济损失。文章对Ⅰ型DVH病原学、致病机理、分子生物学诊断技术和防控等方面进行了综述。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 致病机理 基因结构 分子生物学诊断 防控
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鸭Ⅰ型肝炎病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：10
5
作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期112-115,共4页
为建立一种快速检测鸭Ⅰ型肝炎病毒(DHV I)的方法,本研究根据基因库中DHV Ⅰ基因的保守序列,设计特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了DHV I的RT-LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg,高于常规PCR方法 100倍;全部反应可在1 h... 为建立一种快速检测鸭Ⅰ型肝炎病毒(DHV I)的方法,本研究根据基因库中DHV Ⅰ基因的保守序列,设计特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了DHV I的RT-LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg,高于常规PCR方法 100倍;全部反应可在1 h内完成;可以通过肉眼观察颜色直接判定结果;对其它鸭常见病原体的检测结果均为阴性。实验结果表明建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于DHV Ⅰ感染的快速检测。 展开更多
关键词 鸭ⅰ型肝炎病毒 环介导等温扩增 可视化检测
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鸭Ⅰ型肝炎病毒荧光定量RT-PCR方法建立及初步应用 被引量：9
6
作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 庞耀珊 谢志勤 刘加波 邓显文 范晴 《中国家禽》 北大核心 2012年第10期23-26,共4页
根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,... 根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,对番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鹅细小病毒等6种病原体的检测全为阴性。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,结果阳性率为1.69%。结果提示:在广西地区的鸭群中,存在鸭Ⅰ型肝炎病毒的感染,建立的荧光定量RT-PCR方法可用于鸭Ⅰ型肝炎病毒的临床快速检测。 展开更多
关键词 鸭ⅰ型肝炎病毒 荧光定量RT-PCR 应用
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建 被引量：5
7
作者 张婧 董嘉文 +1 位作者 罗永文 郭霄峰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期101-104,共4页
为了构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的... 为了构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞.原始病毒液在鸭胚成纤维细胞上盲传3代后仍能观察到绿色荧光;以Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清对pBlueSK-TK-EGFP-VP1转染的细胞样品作Westen-blot检测,出现特异条带,且相对分子质量约为54 000.结果表明该研究已成功构建携带Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体,其能够在真核细胞中正确表达. 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 鸭瘟病毒 VP1基因 载体构建
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：4
8
作者 邵泽香 韦强 +3 位作者 鲍国连 崔言顺 刘燕 季权安 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期434-438,共5页
参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小... 参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小为699 bp的目的片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果与GenBank中的DHV-Ⅰ的相应基因序列比对分析,同源性均达90%以上,表明为DHV-Ⅰ的基因序列,对NDV,IBDV,DPV和GPV等常见病毒扩增结果为阴性。该方法敏感性检测结果表明,最低RNA模板检出量为24 pg。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于I型鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-ⅰ) RT-PCR 检测
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Ⅰ型鸭肝炎病毒概述 被引量：15
9
作者 范卫国 杜佳慧 +1 位作者 曹瑞兵 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期110-114,共5页
鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭的一种高度致死性、高度传播性的传染病。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细菌混合感染,对养鸭业危害严重,造成了巨大的经济损... 鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭的一种高度致死性、高度传播性的传染病。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细菌混合感染,对养鸭业危害严重,造成了巨大的经济损失。论文从Ⅰ型鸭肝炎病毒的病原特点、分类地位、分离培养、基因组结构和功能以及病毒的诊断与防控等方面,介绍了DHV-Ⅰ的研究概况。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 病原特点 基因组 结构和功能 诊断 防控
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用RT-PCR诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒 被引量：4
10
作者 周珍辉 王弋嘉 +4 位作者 向双云 田锦 田璐 陈万荣 周育森 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期338-340,共3页
取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,接种12日龄鸭胚尿囊腔及2日龄健康雏鸭,应用RT-PCR方法对病鸭的肝脏悬液及鸭胚尿囊液进行检测并测序,确定所分离的病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒.
关键词 鸭病毒性肝炎 RT-PCR 诊断
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：22
11
作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 黄兵 廖明 辛朝安 《家禽科学》 2006年第11期11-13,共3页
根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结... 根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结果表明本试验建立的用于I型鸭病毒性肝炎病毒诊断的RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性,最低RNA模板检出量为100pg,只能特异的检测出I型DHV,不能检出NDV、IBDV、DPV和GPV。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒 ⅰ型 RT—PCR 检测
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鸭Ⅰ型肝炎病毒一步法RT-LAMP可视化快速检测方法的建立 被引量：10
12
作者 胡成 朱善元 +6 位作者 左伟勇 王安平 吴双 洪伟鸣 成大荣 马丽丽 王永娟 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期613-618,共6页
本研究根据GenBank中登录的鸭I型肝炎病毒（ DHV I） VP1基因的高度保守序列,设计了特异性的引物,建立了一种灵敏、特异、高效的可视化体外环介导等温扩增方法（ RT-LAMP）。结果表明,该方法的灵敏性可达到10 fg,是常规一步法RT-PCR方法... 本研究根据GenBank中登录的鸭I型肝炎病毒（ DHV I） VP1基因的高度保守序列,设计了特异性的引物,建立了一种灵敏、特异、高效的可视化体外环介导等温扩增方法（ RT-LAMP）。结果表明,该方法的灵敏性可达到10 fg,是常规一步法RT-PCR方法的100倍以上。全部反应可以在1.0～1.5 h内完成,并可以直接通过肉眼观察颜色进行结果判定,该方法对其他鸭常见的病原体检测结果全部为阴性,该方法的建立为下一步研制鸭I型肝炎病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒打下基础。 展开更多
关键词 鸭I型肝炎病毒 环介导等温扩增 可视化检测
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Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP0基因在杆状病毒表达系统中的表达 被引量：3
13
作者 王安平 顾玲玲 +4 位作者 王永娟 吴双 左伟勇 洪伟鸣 朱善元 《河南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期365-369,共5页
为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast Bac1,获得重组质粒p FB-VP0... 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast Bac1,获得重组质粒p FB-VP0,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP0,在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP0。Western-blot结果显示,表达的重组蛋白相对分子量约为29 k D,间接免疫荧光结果显示重组蛋白能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性反应。研究结果表明,DHAV-Ⅰ SH株的结构蛋白VP0在昆虫细胞中获得了成功表达,为VP0结构蛋白的功能研究和基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP0基因 昆虫细胞 表达
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR快速检测鸭瘟病毒的研究 被引量：11
14
作者 汤承 索化夷 +2 位作者 岳华 杨发龙 汤明 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第9期25-27,共3页
根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准... 根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准强毒、疫苗毒及野毒株均为阳性,检测其他受试的非鸭瘟病毒DNA均为阴性,对鸭瘟强毒和疫苗毒人工感染鸭胚尿囊液的检出率均为100%,对6个临床送检样本的检出率为6/6,与病毒分离鉴定结果一致;最小检出量为1.57×104拷贝/ul。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 UL6和UL7基因 SYBR Green ⅰ 荧光定量PCR
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抗Ⅰ型鸭肝炎病毒RdRp蛋白噬菌体单链抗体库构建及单链抗体的淘选 被引量：5
15
作者 王永娟 李碧春 +2 位作者 沈明君 洪伟鸣 左伟勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期334-338,共5页
为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RN... 为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RNA为模板,利用抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)简并引物,经RT-PCR扩增抗体的VL和VH编码序列,由Linker序列连接,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增完整的sc Fv基因(VL-Linker-VH)。将扩增的scFv基因克隆于pCANTAB5E载体中构建噬菌体scFv文库,利用纯化的重组RdRp蛋白开展4轮吸附-洗脱-富集以淘选抗RdRp的ScFv;最后对淘选到的阳性ScFv进行可溶性表达,以ELISA方法检测其免疫结合活性。结果显示,获得了7株具有良好抗原结合活性的ScFv。淘选到的DHV-1 RdRp特异的基因工程ScFv,为鸭病毒性肝炎防制新策略研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 RDRP 噬菌体抗体库 单链抗体
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鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析 被引量：4
16
作者 甘一迪 刘家森 +4 位作者 姜骞 孟庆文 韩凌霞 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期618-621,共4页
通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱... 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 VP1基因 原核表达
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎RT-PCR检测方法研究 被引量：4
17
作者 华炯钢 王非 +5 位作者 刘光清 倪征 云涛 余斌 梁华丽 李双茂 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第6期409-412,共4页
根据Ⅰ型鸭病毒性肝炎ZJ/06强毒株的测序结果,在其基因组3D基因区设计合成一对可扩增238 bp的特异性引物,成功的建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,并确定了其特异性与敏感性,对DHV-Ⅰ分离毒株和临床病料进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果,... 根据Ⅰ型鸭病毒性肝炎ZJ/06强毒株的测序结果,在其基因组3D基因区设计合成一对可扩增238 bp的特异性引物,成功的建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,并确定了其特异性与敏感性,对DHV-Ⅰ分离毒株和临床病料进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果,而作为阴性对照的常见4种鸭病病原:鸭瘟病毒、鸭产蛋综合症病毒、鸭副粘病毒、鸭里默氏杆菌均未扩增到任何片断。利用BHK-21细胞、SPF鸡胚对DHV-Ⅰ临床病料进行病毒分离鉴定,结果表明建立的DHV-Ⅰ的RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感的特点。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒 RT-PCR 检测方法
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Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定 被引量：2
18
作者 顾玲玲 吴萌 +1 位作者 朱善元 王安平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期114-117,共4页
为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-ⅠSH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体p FB-VP1,将... 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-ⅠSH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体p FB-VP1,将其转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1。在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-ⅠVP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1。Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光。以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP1基因 昆虫细胞 表达 鉴定
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1的原核表达与免疫学检测 被引量：3
19
作者 宋翠萍 韩先干 +3 位作者 仇旭升 于圣青 陈鸿军 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第6期33-37,共5页
本研究采用原核表达载体pCold-HF在大肠杆菌中表达I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type Ⅰ,DHV-Ⅰ)弱毒株FC64株的VP1蛋白,经超声波裂解结果显示:VP1融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bindResin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小... 本研究采用原核表达载体pCold-HF在大肠杆菌中表达I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type Ⅰ,DHV-Ⅰ)弱毒株FC64株的VP1蛋白,经超声波裂解结果显示:VP1融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bindResin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小鼠,制备特异性抗体,进行免疫学检测。结果表明:该抗体与原核表达产物、DHV感染的SPF尿囊液总蛋白呈现特异性反应,这为DHV-Ⅰ快速诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 ⅰ型 VP1 原核表达
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Ⅰ型鸭肝炎病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：6
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作者 孙涛 肖西志 +4 位作者 徐彪 梁成珠 凌宗帅 张太翔 岳志芹 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期13-18,共6页
用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭... 用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭胚尿囊液、正常鸭肝组织、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、鸭源新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒作对照进行特异性检测;将强毒株核酸稀释成不同梯度,做灵敏度检测;同时将该方法与病毒分离和荧光定量RT-PCR方法做人工感染样品的平行检测。结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到4 pg的DHV I核酸模板,与荧光定量PCR检测结果一致。PCR-DHPLC对DHVⅠ强毒株人工感染鸭组织脏器的检测结果与荧光定量PCR检测结果的阳性检出率均为100%,对脑、脾、肺病料的检出率显著(P≤0.01)高于病毒分离,PCR-DHPLC与荧光RT-PCR检测方法相比较,两种方法检测DHVⅠ的符合率为100%。研究表明该方法可用于诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒,是一种有效的新方法。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 RT-PCR 变性高效液相色谱
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