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猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测
1
作者
张二芹
滕蔓
+5 位作者
罗俊
赵孟孟
许倩茹
赵东
邓瑞广
张改平
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017年第9期28-30,共3页
在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-...
在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-PAGE和Western-Blot检测表达蛋白。结果成功构建原核表达载体p ET-28a-EDⅢ;EDⅢ蛋白在BL21(DE3)菌已表达,经Ni-NTA获得纯化蛋白,并经Western-Blot检测具有反应活性。
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关键词
乙脑病毒
ED
ⅲ
蛋白
表达蛋白
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职称材料
不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达
2
作者
张志珊
严延生
+1 位作者
翁育伟
何似
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第9期836-840,共5页
目的构建登革病毒1型和2型外膜蛋白(E蛋白)DⅢ区融合基因的重组腺病毒,在BHK-21细胞中表达。方法用PCR法扩增登革病毒1型和2型EDⅢ基因,依次克隆入pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-D1/D2EDⅢ。以此为模板,扩增包含CMV启动子-D1/D2EDⅢ-BG...
目的构建登革病毒1型和2型外膜蛋白(E蛋白)DⅢ区融合基因的重组腺病毒,在BHK-21细胞中表达。方法用PCR法扩增登革病毒1型和2型EDⅢ基因,依次克隆入pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-D1/D2EDⅢ。以此为模板,扩增包含CMV启动子-D1/D2EDⅢ-BGHpA的表达片段,与pENTR4载体连接形成质粒pENTR4-D1/D2EDⅢ,与pAd/PL-DEST进行体外同源重组,形成重组腺病毒载体pAd-D1/D2EDⅢ,在293A细胞系中包装成具有感染性的重组腺病毒,进一步感染BHK-21细胞,用间接免疫荧光法和Westernblot法检测重组蛋白在细胞中的表达情况。结果重组腺病毒构建成功,转染293A细胞后获得2×109pfu/mL滴度的重组腺病毒,感染哺乳动物细胞后能够表达1型和2型EDⅢ区目的蛋白。结论不同型别融合基因的重组腺病毒表达载体能有效地表达相应型别的目的蛋白,为进一步构建单一的四价重组腺病毒应用于登革疫苗研究奠定基础。
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关键词
登革病毒
外膜蛋白
D
ⅲ
区
腺病毒载体
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职称材料
题名
猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测
1
作者
张二芹
滕蔓
罗俊
赵孟孟
许倩茹
赵东
邓瑞广
张改平
机构
河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室
河南农业大学牧医工程学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017年第9期28-30,共3页
基金
河南省博士后科研资助项目(2013047)
河南省科技攻关计划项目(152102110127)
河南省农业科技推广财政补助资金项目(YCN201519111)
文摘
在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-PAGE和Western-Blot检测表达蛋白。结果成功构建原核表达载体p ET-28a-EDⅢ;EDⅢ蛋白在BL21(DE3)菌已表达,经Ni-NTA获得纯化蛋白,并经Western-Blot检测具有反应活性。
关键词
乙脑病毒
ED
ⅲ
蛋白
表达蛋白
Keywords
Japanese encephalitis
virus
domain
ⅲ
of
envelope
protein
expression
protein
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达
2
作者
张志珊
严延生
翁育伟
何似
机构
福建医科大学附属泉州第一医院检验科
福建省疾病预防控制中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第9期836-840,共5页
基金
福建省重点专项基金项目(NO.2004YZ01-2)
文摘
目的构建登革病毒1型和2型外膜蛋白(E蛋白)DⅢ区融合基因的重组腺病毒,在BHK-21细胞中表达。方法用PCR法扩增登革病毒1型和2型EDⅢ基因,依次克隆入pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-D1/D2EDⅢ。以此为模板,扩增包含CMV启动子-D1/D2EDⅢ-BGHpA的表达片段,与pENTR4载体连接形成质粒pENTR4-D1/D2EDⅢ,与pAd/PL-DEST进行体外同源重组,形成重组腺病毒载体pAd-D1/D2EDⅢ,在293A细胞系中包装成具有感染性的重组腺病毒,进一步感染BHK-21细胞,用间接免疫荧光法和Westernblot法检测重组蛋白在细胞中的表达情况。结果重组腺病毒构建成功,转染293A细胞后获得2×109pfu/mL滴度的重组腺病毒,感染哺乳动物细胞后能够表达1型和2型EDⅢ区目的蛋白。结论不同型别融合基因的重组腺病毒表达载体能有效地表达相应型别的目的蛋白,为进一步构建单一的四价重组腺病毒应用于登革疫苗研究奠定基础。
关键词
登革病毒
外膜蛋白
D
ⅲ
区
腺病毒载体
Keywords
dengue virus; envelope protein; domain ⅲ ; adenovirus
分类号
R373.3 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测
张二芹
滕蔓
罗俊
赵孟孟
许倩茹
赵东
邓瑞广
张改平
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达
张志珊
严延生
翁育伟
何似
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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