番茄粉红色果实相关基因的dCAPS和InDel标记开发与应用 被引量：11

1

作者 董淑芳 王孝宣 +3 位作者 高建昌 国艳梅 黄泽军 杜永臣 《中国蔬菜》 北大核心 2016年第1期24-29,共6页

采用SuperBSA方法分别构建100份粉红色番茄材料和100份红色番茄材料的DNA混合池,对测序结果的SNP位点进行分析。结果表明:在1号染色体上的127个SNP位点中,有6个与番茄果实颜色高度相关,其中1个位点与粉红色果实高度相关。利用该SNP位点... 采用SuperBSA方法分别构建100份粉红色番茄材料和100份红色番茄材料的DNA混合池,对测序结果的SNP位点进行分析。结果表明:在1号染色体上的127个SNP位点中,有6个与番茄果实颜色高度相关,其中1个位点与粉红色果实高度相关。利用该SNP位点开发了1个共显性d CAPS标记,在红色、粉红色和杂合F_13种基因型之间的多态性较好。同时,利用番茄重测序数据分析番茄起源时发现,在粉红色番茄中SIMYB12基因的上游存在1个603bp的缺失,利用该缺失突变位点开发了1个共显性In Del标记,在红色、粉红色和杂合F_13种基因型之间也表现出较好的多态性。利用新开发的2个标记对F_2群体进行遗传分析,鉴定结果与田间表型观察结果符合度均达到95%以上,表明这2个标记可以用于番茄苗期分子标记辅助选择。 展开更多

关键词 番茄 粉红色果实 dcaps INDEL 分子标记

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基于茶树SNP的dCAPS标记体系研究 被引量：4

2

作者 张成才 王丽鸳 +4 位作者 韦康 成浩 包云秀 刘本英 汪云刚 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期517-522,共6页

从茶树EST序列中搜寻出候选SNPs位点,在候选SNPs两侧设计测序引物进行PCR扩增,并对扩增产物双向测序验证;然后从每个扩增子中选择一个确证的SNPs,设计dCAPS引物,并进行扩增和酶切验证,将SNPs转化为dCAPS标记;最后,在长叶白毫×福鼎... 从茶树EST序列中搜寻出候选SNPs位点,在候选SNPs两侧设计测序引物进行PCR扩增,并对扩增产物双向测序验证;然后从每个扩增子中选择一个确证的SNPs,设计dCAPS引物,并进行扩增和酶切验证,将SNPs转化为dCAPS标记;最后,在长叶白毫×福鼎大白的F1群体中检测了标记的分离情况。结果发现,20对测序引物中有11对扩增成功,共确证了17个SNPs,占检测总数的54.8%;在设计的11对dCAPS引物中,有8对在长叶白毫、福鼎大白和龙井43等8个品种中表现出多态性,成功转化为dCAPS标记,转化成功率72.7%;8个dCAPS标记中的DCC229和DCC371在长叶白毫和福鼎大白之间表现有多态性,经检测,它们在这2个品种的F1群体中均符合孟德尔1︰1分离。 展开更多

关键词 茶树 EST SNP dcaps

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大豆胞囊线虫主效抗病基因Rhg4(GmSHMT)的CAPS/dCAPS标记开发和利用 被引量：10

3

作者 史学晖 李英慧 +3 位作者 于佰双 郭勇 王家军 邱丽娟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1463-1471,共9页

大豆胞囊线虫(soybean cyst nematode,SCN)严重危害世界大豆生产,Rhg4(resistance to Heterodera glycines 4)是控制大豆SCN抗性的2个主效位点之一。本研究针对Rhg4(Gm SHMT)上的2个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP... 大豆胞囊线虫(soybean cyst nematode,SCN)严重危害世界大豆生产,Rhg4(resistance to Heterodera glycines 4)是控制大豆SCN抗性的2个主效位点之一。本研究针对Rhg4(Gm SHMT)上的2个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点开发了快速、经济、简便易行的CAPS(Rhg4-389)和d CAPS标记(Rhg4-1165),并用开发的2个标记鉴定了以大豆胞囊线虫应用核心种质为主的193份代表性抗感种质。结果表明,Rhg4-389和Rhg4-1165位点间存在显著连锁不平衡(P=0.0001,r2=0.87),可形成4种单倍型。Rhg4-389-G/Rhg4-1165-T和Rhg4-389-C/Rhg4-1165-A为优势单倍型,稀有单倍型Rhg4-389-G/Rhg4-1165-A和Rhg4-389-C/Rhg4-1165-T是在中国抗源中新发现的单倍型。结合193份种质对SCN 3号小种抗性鉴定分析发现,Rhg4-389-G和Rhg4-1165-T主要存在于抗病种质,它们形成的单倍型对抗病种质鉴定效率可达94.1%。本研究开发了可用于辅助大豆SCN抗性鉴定且方便育种家利用的CAPS/d CAPS标记,且用其摸清了应用核心种质等重要抗源在Rhg4位点的"本底",为育种家有效利用这些优异抗源提供了重要信息。 展开更多

关键词 大豆胞囊线虫 Rhg4 CAPS/dcaps标记 单倍型 分子标记辅助选择 Rhg4

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希尔斯山羊草1S^(s)S和3S^(s)S染色体特异dCAPS标记的建立 被引量：1

4

作者 倪佳俊 韩冉 +8 位作者 徐文竞 王开 祁广 曾小雪 訾妍 李豪圣 刘建军 汪晓璐 刘成 《山东农业科学》 北大核心 2023年第5期15-21,共7页

希尔斯山羊草是小麦的近缘种,具有抗病、抗逆、抗虫等优异性状,是小麦遗传改良的珍贵基因源。当前,我们创制了一批小麦-希尔斯山羊草杂交种质。然而,由于缺乏分子标记,上述种质无法被有效筛选和鉴定。为了建立希尔斯山羊草染色体特异分... 希尔斯山羊草是小麦的近缘种,具有抗病、抗逆、抗虫等优异性状,是小麦遗传改良的珍贵基因源。当前,我们创制了一批小麦-希尔斯山羊草杂交种质。然而,由于缺乏分子标记,上述种质无法被有效筛选和鉴定。为了建立希尔斯山羊草染色体特异分子标记,本研究通过对希尔斯山羊草基因组重测序,发掘希尔斯山羊草和小麦间单核苷酸多态性(SNP),选择150个多态性位点开发dCAPS标记,结果发现,相比中国春等小麦对照,利用引物AESD23和AESD105经PCR和酶切电泳后分别能在希尔斯山羊草中获得长度不同的多态性条带。利用一套中国春-希尔斯山羊草二体附加系和端体附加系对这些多态性条带进行定位,结果发现,AESD23能在中国春-希尔斯山羊草1S^(s)二体附加系和1S^(s)S端体附加系中扩增出长度为1800 bp的多态性条带,而AESD105能在中国春-希尔斯山羊草3S^(s)二体附加系和3S^(s)S端体附加系中扩增出长度为200 bp和300 bp的多态性条带。对小麦-希尔斯山羊草杂交种质检测发现,AESD23和AESD105均能对小麦-希尔斯山羊草杂交种质进行有效筛选和鉴定。因此,上述3个多态性片段可以作为dCAPS标记用于检测含希尔斯山羊草1S^(s)S或3S^(s)S染色质的材料,为检测和追踪小麦背景中希尔斯山羊草染色质提供了新的检测手段。 展开更多

关键词 小麦 希尔斯山羊草 基因组重测序 SNP分析 dcaps标记

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桃花型性状dCAPs标记的开发与应用

5

作者 高帆 冯贝贝 +6 位作者 宋聪豪 连晓东 郑先波 张海朋 王小贝 谭彬 冯建灿 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2022年第5期770-778,815,共10页

【目的】为准确、快速地鉴别桃铃型花和蔷薇型花,开发与桃花型性状相关的dCAPs标记。【方法】根据花型性状基因定位结果,其关联度最高的SNP位点位于PpB3-1基因启动子区域,基于SNP位点开发含有内切酶SalI-HF的dCAPs标记,在1个桃杂交群体... 【目的】为准确、快速地鉴别桃铃型花和蔷薇型花,开发与桃花型性状相关的dCAPs标记。【方法】根据花型性状基因定位结果,其关联度最高的SNP位点位于PpB3-1基因启动子区域,基于SNP位点开发含有内切酶SalI-HF的dCAPs标记,在1个桃杂交群体(73个杂种单株)和1个桃自然群体(102份种质资源)中扩增,用SalI-HF限制性内切酶对特异扩增片段进行酶切,用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方式对酶切产物进行检测分析。【结果】铃型花DNA扩增出来的条带可以被酶切,产生两种类型特异片段:308和282 bp两条特异片段(杂合显性,A/C)和282 bp一条特异片段(纯合显性,C/C);蔷薇型花DNA扩增出来的条带不能被酶切,产生一条308 bp特异片段(纯合隐性,A/A)。该标记在桃杂交群体和自然群体中的检测符合率均为100%。【结论】桃花型性状的dCAPs标记B3-1可用于桃花型性状分子标记辅助选择育种。 展开更多

关键词 桃 花型 dcaps标记

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结球甘蓝无蜡粉亮叶性状dCAPS标记引物优化

6

作者 王超 付天姿 +1 位作者 张晓烜 李秀乐 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期33-39,共7页

研究以野生型结球甘蓝98-1030和无蜡粉亮叶突变型98-1030作为父母本材料,杂交得到F_(1)代,将父母本作全基因组测序,根据所得区间内非同义SNP位点,共设计20对dCAPS引物,命名为DC01~DC20,利用亲本及F1代筛选引物。PCR扩增结果表明,有10对d... 研究以野生型结球甘蓝98-1030和无蜡粉亮叶突变型98-1030作为父母本材料,杂交得到F_(1)代,将父母本作全基因组测序,根据所得区间内非同义SNP位点,共设计20对dCAPS引物,命名为DC01~DC20,利用亲本及F1代筛选引物。PCR扩增结果表明,有10对dCAPS引物扩增出条带,限制性内切酶鉴定表明,其中有8对引物PCR产物可酶切产生特异性片段。 展开更多

关键词 结球甘蓝 dcaps分子标记 SNP 引物

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看麦娘对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测 被引量：5

7

作者 郭文磊 白霜 +2 位作者 池艳艳 冯莉 王金信 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期178-184,共7页

甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一,但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理,根据突变型和野... 甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一,但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理,根据突变型和野生型看麦娘在197位点处碱基序列的不同,本研究设计出了一种衍生性酶切扩增多态性序列（d CAPS）分子标记方法,可用于197位点突变的快速检测。通过在引物D197F序列的3′端引入一个错配碱基,扩增所得不同种群看麦娘的ALS片段经限制性内切酶Bam H I酶切后表现出多态性：野生敏感型分别产生了200和36 bp的2个条带;纯合突变型因无法被切开,只有236 bp的一个条带;而杂合突变型则同时产生了上述3个条带。该d CAPS检测结果准确、可靠,与经典的整株水平测定结果一致,并且可同时检测197位点上任一形式的突变。研究结果可为看麦娘等禾本科杂草对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测提供理论依据。 展开更多

关键词 看麦娘 甲基二磺隆 靶标抗性 ALS基因 突变 dcaps

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大豆核不育基因ms6功能性分子标记的开发与验证 被引量：4

8

作者 张颖 赵国龙 +4 位作者 林春晶 贾顺耕 郭凤兰 赵丽梅 张春宝 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期807-814,共8页

杂种优势利用是提高作物产量的有效手段之一。随着第三代"智能不育杂交育种技术"的兴起,核不育基因被广泛应用于作物杂交育种中。在大豆中,ms6作为重要的核不育基因被广泛应用于轮回选择育种,但在杂交育种中鲜有报道。本研究... 杂种优势利用是提高作物产量的有效手段之一。随着第三代"智能不育杂交育种技术"的兴起,核不育基因被广泛应用于作物杂交育种中。在大豆中,ms6作为重要的核不育基因被广泛应用于轮回选择育种,但在杂交育种中鲜有报道。本研究利用大豆ms6基因上的突变位点开发了12个dCAPS标记进行分析验证,其中3个dCAPS标记ms6-dCAPS-1、ms6-dCAPS-2和ms6-dCAPS-3的扩增产物酶切后出现明显多态性条带。经进一步验证,明确ms6-dCAPS-3标记稳定且重复性好,其扩增产物经限制性内切酶Hind III酶切后,可将ms6后代分离群体中纯合可育、杂合可育和纯合不育单株准确区分。为ms6核不育基因在杂交大豆育种中的应用提供了有效的技术支撑。 展开更多

关键词 大豆 隐性核不育 dcaps标记 多态性 筛选

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大豆7S球蛋白α'亚基缺失新种质中黄608的分子鉴定 被引量：2

9

作者 李俊英 孙如建 +4 位作者 李忠峰 魏中艳 任玉龙 王俊 邱丽娟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期18-25,共8页

大豆7S球蛋白α'亚基含量与大豆的营养品质和加工特性关系密切。本研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western blot)从中品661的EMS突变库中筛选出α'亚基缺失突变体中黄608。利用中黄608与登科1号创建了一个由... 大豆7S球蛋白α'亚基含量与大豆的营养品质和加工特性关系密切。本研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western blot)从中品661的EMS突变库中筛选出α'亚基缺失突变体中黄608。利用中黄608与登科1号创建了一个由210个个体组成的F2分离群体。遗传分析表明,α'亚基缺失由1对隐性单基因控制。利用连锁分析方法将该基因定位于第10染色体标记SSR10-1489与SSR10-1612之间,其中,包括控制α'亚基合成基因Cgy-1(Glyma.10G246300),序列分析发现,中黄608在Cgy-1第1外显子第84个碱基发生单碱基突变(G84→A84),导致氨基酸翻译提前终止。根据新发现的变异位点开发了共显性分子标记,并检测F2个体基因型,结果表明, Cgy-1基因型与α'亚基表型共分离。本研究不仅为大豆优质育种提供了新材料,同时也为分子育种提供了技术支持。 展开更多

关键词 大豆 α'亚基 突变体 7S球蛋白 dcaps标记

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白菜抗芜菁花叶病毒(TuMV)鉴定及抗源筛选

10

作者 李国亮 张淑江 +3 位作者 李菲 张慧 章时蕃 孙日飞 《园艺与种苗》 CAS 2018年第4期6-10,共5页

[目的]筛选出抗芜菁花叶病毒(Tu MV)的白菜种质资源。[方法]选取8份白菜高代自交系种质材料,在3叶期人工磨擦接种Tu MV-C4株系,进行抗/感病表型调查、d CAPS功能标记筛选以及ELISA试验鉴定。[结果]1600011-1、1600043-3、1600045-3和160... [目的]筛选出抗芜菁花叶病毒(Tu MV)的白菜种质资源。[方法]选取8份白菜高代自交系种质材料,在3叶期人工磨擦接种Tu MV-C4株系,进行抗/感病表型调查、d CAPS功能标记筛选以及ELISA试验鉴定。[结果]1600011-1、1600043-3、1600045-3和1600331-3为Tu MV感病材料;1600031-2、1600067-2、1600105-1和1600485-2为Tu MV抗病材料。[结论 ]研究鉴定了大白菜抗Tu MV的性状,为大白菜抗Tu MV育种提供了抗源材料。 展开更多

关键词 白菜 TUMV dcaps 种质资源 鉴定 筛选

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茶氨酸合成酶基因的SNP挖掘和遗传定位 被引量：5

11

作者 李小杰 马建强 +1 位作者 姚明哲 陈亮 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期251-257,共7页

茶氨酸合成酶(Theanine synthetase,TS)基因是茶树茶氨酸代谢过程中的关键酶基因。本研究以氨基酸含量差异明显的亲本及其杂交所得F_1子代为研究材料,克隆TS基因的c DNA序列,挖掘其SNPs位点,并成功将杂合SNP位点定位在遗传连锁群上。研... 茶氨酸合成酶(Theanine synthetase,TS)基因是茶树茶氨酸代谢过程中的关键酶基因。本研究以氨基酸含量差异明显的亲本及其杂交所得F_1子代为研究材料,克隆TS基因的c DNA序列,挖掘其SNPs位点,并成功将杂合SNP位点定位在遗传连锁群上。研究结果显示,通过序列比对在亲本间检测到3个SNPs,验证得到1个杂合的位点SNP735。将此位点成功转化为dCAPS标记,该标记在子代中的基因型分离比为1∶1,利用该群体已构建的茶树遗传图谱进行遗传定位,将dCAPS标记定位在连锁群LG03上,相邻标记为TM299和TM517。联合此标记及其相邻标记与游离氨基酸总含量和茶氨酸含量进行统计分析,表明具有显著的相关性。 展开更多

关键词 茶树 TS SNP dcaps标记 定位 茶氨酸

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胡柚新品种01-7的AS-PCR和d CAPS标记开发与应用 被引量：1

12

作者 吴伊静 张慧艺 +5 位作者 苗长久 汪丽霞 杨兴良 陈文博 徐昌杰 陈昆松 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1310-1321,共12页

【目的】挖掘胡柚新品种01-7和普通胡柚间的差异单核苷酸多态性(SNP),据此开发可区分01-7与其他胡柚的分子标记。【方法】对01-7a和普通胡柚ZZ(祖宗树)进行全基因组重测序,利用生物信息学分析方法挖掘两份材料间的纯合SNP。采用PCR、克... 【目的】挖掘胡柚新品种01-7和普通胡柚间的差异单核苷酸多态性(SNP),据此开发可区分01-7与其他胡柚的分子标记。【方法】对01-7a和普通胡柚ZZ(祖宗树)进行全基因组重测序,利用生物信息学分析方法挖掘两份材料间的纯合SNP。采用PCR、克隆结合Sanger测序对SNP的正确性进行验证,进而开发等位基因特异PCR(AS-PCR)和衍生酶切扩增多态性(dCAPS)分子标记体系,最后应用12份胡柚材料就AS-PCR和dCAPS分子标记的普适性进行评估。【结果】对01-7a和普通胡柚ZZ重测序原始数据进行过滤,共获得高质量碱基数36.06 Gb。利用生物信息学手段挖掘出一个纯合SNP:Chr1_7111834_G/A。01-7a和普通胡柚ZZ在该SNP位点的基因型分别是A/A和G/G,这一结果得到了经典的基因克隆-Sanger测序确认。基于此SNP开发了AS-PCR和dCAPS分子标记,经对12份胡柚材料测试,表现符合预期:AS-PCR-F1在所有4份01-7中扩增出特异条带,而在其他胡柚材料中无扩增;AS-PCR-F2在01-7中无扩增,在其他胡柚材料(脆红除外)中扩增出特异条带;所有4份01-7材料在dCAPS分析中出现酶切条带,而在其他胡柚材料(脆红除外)中不被酶切。脆红因突变产生天然的酶切识别位点而被酶切。经典的基因克隆-Sanger测序结果确认两种标记正确区分了基因型,并发现脆红有着不同于其他胡柚的分子标记条带是由于它在该SNP位点侧翼还有额外的序列变异。【结论】基于全基因组重测序数据挖掘出01-7a胡柚和普通胡柚ZZ间的一个纯合SNP,据此开发了ASPCR和dCAPS分子标记,该两标记可区分01-7、脆红、夏红和其他胡柚。 展开更多

关键词 胡柚 全基因组重测序 SNP AS-PCR dcaps

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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位鉴定 被引量：2

13

作者 张璐 王延群 +7 位作者 郝立沙 高明明 李爱东 陶冶 李莉 涂亚斌 蔡雪辉 路义鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期310-313,共4页

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株... 为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株MAb与毕赤酵母表达的dCap和原核表达的Cap蛋白均可以发生特异性免疫反应。采用肽扫描法对MAb的非核定位信号区进行抗原表位鉴定,结果表明该MAb可以识别的线性表位区域为131TKATALTYDPYVNYSS146。本实验结果为进一步研究Cap蛋白的结构和PCV2临床检测方法的建立奠定基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 DCAP 单克隆抗体 表位

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分子标记辅助选择在含辣椒素酯的辣椒新品种选育中的应用 被引量：4

14

作者 Yoshiyuki Tanaka Hirotsugu Yoneda +4 位作者 Munetaka Hosokawa Tetsuya Miwa Susumu Yazawa 马义花 孔秋生 《辣椒杂志》 2014年第4期45-49,共5页

辣椒素酯类物质是辣椒果实中低辣味的辣椒素类似物。其生物活性与辣椒素类物质相似,有抑制脂肪积累和抗氧化等特性。由于辣椒素酯类物质的辣味低,与辣椒素相比更易于制作食品添加剂。但是辣椒素酯类物质有水不稳定和热不稳定性,其含量... 辣椒素酯类物质是辣椒果实中低辣味的辣椒素类似物。其生物活性与辣椒素类物质相似,有抑制脂肪积累和抗氧化等特性。由于辣椒素酯类物质的辣味低,与辣椒素相比更易于制作食品添加剂。但是辣椒素酯类物质有水不稳定和热不稳定性,其含量随果实的成熟而逐渐降低。所以,含有辣椒素酯的果实适合在成熟之前鲜食。以前的遗传研究表明p-AMT和Pun1两个基因控制辣椒素酯的合成,这两个基因分别表示为A、B。基因型为aa BB和aa Bb的植株果实中含辣椒素酯,辣味较低。本研究在杂交育种中利用p-AMT和Pun1基因的DNA标记选育了一个含有辣椒素酯类物质的辣椒新品种。Murasaki(AAbb)和CH-19 Sweet(aa BB)杂交后代的基因型都用DNA标记进行了鉴定。p-AMT基因型利用d CAPS标记鉴定,Pun1基因型用SCAR标记鉴定。分析杂交后代的基因型,筛选出基因型aa BB或者aa Bb的植株并培育出了一个新品种Maru Salad。Maru Salad果实的辣椒素酯含量为700μg/g DW。同时Maru Salad的果实比CH-19 Sweet大,而且适合鲜食。 展开更多

关键词 CH-19 SWEET dcaps SCAR 假定的氨基转移酶 假定的酰基转移酶

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表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建

15

作者 程晓亮 林文耀 +4 位作者 叶煜 陈筱薇 严常燕 廖明 樊惠英 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期96-100,共5页

利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子... 利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子,gp64及dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-V,得到重组质粒pFastBac-dCap-V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞,获得的重组穿梭质粒Bacmid-dCap-V,经脂质体转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-dCap-V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达dCap蛋白. 展开更多

关键词 杆状病毒表面展示系统 猪圆环病毒2型 dCap基因

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