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转CpTI基因毛白杨的获得 被引量:19
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作者 郝贵霞 朱祯 朱之悌 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z01期116-119,共4页
In this study,cowpea trypsin inhibitor (CpTI) gene, an insecticidal gene,was introduced into two Populus tomentosa clones by gene transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. The transformed regeneration shoo... In this study,cowpea trypsin inhibitor (CpTI) gene, an insecticidal gene,was introduced into two Populus tomentosa clones by gene transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. The transformed regeneration shoots were obtained directly by leaf discs.In order to established selection condition,leaf discs were cultured in the medium with increasing concentration kanamycin.Kanamycin resistant(km r)plantlets were obtained by 3~4 cycles screening in selective condition.Then transformed shoots were rooted in the medium containing kanamycin 50?mg/L and transferred to greenhouse.The presence of CpTI gene in transgenic plants were confirmed by PCR and PCR\|Southern blot. 展开更多
关键词 毛白杨 根农杆菌介导法 转基因植株 cpti基因
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转CpTI基因不结球白菜的抗虫性表现 被引量:4
2
作者 佘建明 何晓兰 +3 位作者 蔡小宁 苏小俊 袁希汉 李彬 《江苏农业学报》 CSCD 2004年第4期230-232,共3页
通过卡那霉素筛选、目的基因分子检测和生物学抗虫性鉴定 ,从转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因不结球白菜遗传工程植株自交后代中选育出抗虫性可遗传的纯合材料。用室内人工饲喂方法 ,以鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫为靶害虫 ,对转基因植株进行... 通过卡那霉素筛选、目的基因分子检测和生物学抗虫性鉴定 ,从转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因不结球白菜遗传工程植株自交后代中选育出抗虫性可遗传的纯合材料。用室内人工饲喂方法 ,以鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫为靶害虫 ,对转基因植株进行抗虫性鉴定。试验结果显示 ,转CpTI基因纯合材料对 1~ 2龄小菜蛾和斜纹夜蛾幼虫具有抗性 。 展开更多
关键词 cpti基因 不结球白菜 转基因植株 抗虫性 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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抗虫转CpTI基因植物定性PCR检测技术的建立 被引量:4
3
作者 朱珠 王永 +4 位作者 兰青阔 赵新 余景会 郭永泽 程奕 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期56-60,共5页
为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退... 为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退火温度为58℃,引物浓度为0.4μmol/L较好,该方法能够特异性检测样品中CpTI基因,检测灵敏度达0.05%(质量比)。该方法符合农业转基因生物产品成分检测标准对特异性、灵敏度、重复性的要求,可为抗虫转CpTI基因植物生物安全管理提供技术支撑。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因特异性检测 定性PCR
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农杆菌介导抗虫CpTI基因的花生遗传转化及转基因植株的再生 被引量:23
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作者 徐平丽 单雷 +4 位作者 柳展基 王芳 张斌 毕玉平 张传坤 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期5-8,共4页
通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因... 通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因花生具有一定的抗虫性。 展开更多
关键词 花生 遗传转化 农杆菌介导 抗虫cpti基因 转基因植株 植株再生 抗虫性 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究 被引量:11
5
作者 赵强 赵志文 +2 位作者 张廷婷 崔德才 王斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期54-58,共5页
本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进... 本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶抑制剂 cpti 基因转化 欧美杨 转基因植株
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修饰的cpti基因在转基因棉花后代中的表达及其抗虫性分析 被引量:2
6
作者 陈宛新 王伟 +2 位作者 吴茜 常团结 朱祯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期21-25,共5页
对转修饰cpti基因 (即sck基因 )的抗虫棉T3 代进行了分子检测和抗虫性检测。PCR ,Southern杂交证明外源基因已稳定遗传给后代植株。抑制剂活性检测表明转sck基因后代比转未修饰cpti基因后代具有更强的胰蛋白酶抑制剂活性。抗虫性分析表... 对转修饰cpti基因 (即sck基因 )的抗虫棉T3 代进行了分子检测和抗虫性检测。PCR ,Southern杂交证明外源基因已稳定遗传给后代植株。抑制剂活性检测表明转sck基因后代比转未修饰cpti基因后代具有更强的胰蛋白酶抑制剂活性。抗虫性分析表明 ,转基因后代对棉铃虫的生长发育具有明显的抑制作用。结果进步说明 ,将外源蛋白细胞内靶向定位的策略应用于棉花抗虫基因工程 ,可以提高外源蛋白在细胞内的积累量 。 展开更多
关键词 cpti基因 转基因棉花 修饰基因 豇豆蛋白酶抑制剂 抗虫棉 陆地棉 抗虫性分析 基因表达
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结球甘蓝抗虫转基因植株及其后代的抗性表现 被引量:12
7
作者 佘建明 蔡小宁 +5 位作者 朱卫民 张初贤 丁万霞 李建斌 李彬 朱祯 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期73-76,共4页
应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶 (NPTⅡ )基因的重组质粒导入结球甘蓝栽培品种春甘蓝“鸡心 2 3”和秋甘蓝“黑叶头”。对转基因当代植株 (T0 )及其自交后代 (T1、T2 、T3)群体进行卡那霉素抗... 应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶 (NPTⅡ )基因的重组质粒导入结球甘蓝栽培品种春甘蓝“鸡心 2 3”和秋甘蓝“黑叶头”。对转基因当代植株 (T0 )及其自交后代 (T1、T2 、T3)群体进行卡那霉素抗性、抗虫性鉴定和分子检测。经PCR DNA分子杂交检测 ,确认抗虫基因———豇豆胰蛋白酶抑制剂基因已整合到受体植株的基因组中 ,并在有性生殖过程中传递给后代。卡那霉素抗性和抗虫性状在T0 代植株上得到表达 ;T1代植株中发生分离 ;T2 代中呈现出 3种不同类型的株系 :抗性纯合、杂合型和敏感性纯合株系 ;从T3 代中获得卡那霉素抗性和抗虫性纯合的株系。试验结果显示 ,卡那霉素抗性和抗虫性状在转基因植株自交后代中的表现基本符合显性单基因的分离规律。在T2 、T3 代抗虫性纯合的株系中 ,鳞翅目小菜蛾、甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的 1~ 2龄幼虫校正死亡率为 6 %~ 10 0 % ,从中选出一批校正死亡率达 80 展开更多
关键词 结球甘蓝 转基因植株 豇豆胰蛋白酶抑制剂 新霉素磷酸转移酶 卡那霉素抗性 抗虫性
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结球甘蓝的离体再生及基因转化条件研究 被引量:15
8
作者 佘建明 蔡小宁 +5 位作者 朱祯 徐鹤林 朱卫民 吴敬音 王爱民 丁万霞 《江苏农业学报》 CSCD 1996年第3期6-9,共4页
以结球甘蓝鸡心23、晨光51号两个自交不亲和系种子的无菌苗的下胚轴为外植体材料,在附加1mg/lBA、1mg/lZT、0.05mg/lNAA或2mg/lZT、0.05mg/lNAA的稍作修改的MS培养基上诱导不定芽发... 以结球甘蓝鸡心23、晨光51号两个自交不亲和系种子的无菌苗的下胚轴为外植体材料,在附加1mg/lBA、1mg/lZT、0.05mg/lNAA或2mg/lZT、0.05mg/lNAA的稍作修改的MS培养基上诱导不定芽发生,不定芽诱导频率分别为86.4%、100%和86.3%、40.6%。头孢霉素有抑制结球甘蓝下胚轴诱导不定芽的作用,羧苄青霉素则能保持原有的不定芽诱导频率。卡那霉素在诱导不定芽的过程中,有完全抑制其发生的作用,而在不定芽和幼苗生长阶段则有筛选作用。卡那霉素敏感性测定结果,10mg/l卡那霉素为适宜的选择浓度。以下胚轴的切段为受体,应用农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)重组质粒导入结球甘蓝。 展开更多
关键词 结球甘蓝 再生植株 基因转化 农杆菌
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究 被引量:5
9
作者 吕玲玲 雷建军 +3 位作者 宋明 曹必好 陈国菊 曾国平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期78-82,共5页
通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对... 通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳;PCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中.转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用. 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因转化 花椰菜 农杆菌介导
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普通不结球白菜抗虫转基因植株的获得 被引量:27
10
作者 佘建明 蔡小宁 +3 位作者 朱祯 朱卫民 张初贤 袁希汉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期79-82,共4页
以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料 ,在附加 2 mg/LCPPU、0 .1m g/L NAA和 7.5 m g/L Ag NO3的稍作修改的 MS培养基上诱导不定芽。子叶 (柄 )和子叶切段诱导不定芽频率分别为 32 .5 2 %、4.3... 以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料 ,在附加 2 mg/LCPPU、0 .1m g/L NAA和 7.5 m g/L Ag NO3的稍作修改的 MS培养基上诱导不定芽。子叶 (柄 )和子叶切段诱导不定芽频率分别为 32 .5 2 %、4.35 %和 4.79%、11.5 5 %。应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (Cp TI)和新霉素磷酸转移酶基因 (N PT )的重组质粒导入普通不结球白菜 ,获得具有卡那霉素抗性的再生植株。具有卡那霉素抗性的当代转基因植株 (T0 )及其自交后代 (T1 )植株经 PCR和 Southern blot分子检测 ,确认抗虫基因已整合到受体植株的基因组中 ,并通过有性生殖遗传给后代。体外生物学测定结果 ,显示抗虫性状在转基因植株自交后代植株中得到表达。 展开更多
关键词 普通不结球白菜 转基因植株 农杆菌 cpti
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国槐离体再生及抗虫基因sck的转导 被引量:6
11
作者 张晓英 王华芳 +2 位作者 朱祯 王天祥 尹伟伦 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第9期34-38,F0003,共6页
以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐。国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS+BA3 mg·L-1+IA... 以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐。国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS+BA3 mg·L-1+IAA0·05 mg·L-1+G418 8 mg·L-1+Cef 500 mg·L-1上。不定芽在培养基1/2MS+IBA1·0 mg·L-1+G418 10 mg·L-1+Cef 100 mg·L-1上进一步培养获得完整再生植株。通过PCR和Southern blotting检测证明,修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck已成功导入国槐细胞。 展开更多
关键词 国槐 根癌土壤农杆菌 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck 基因转导
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定 被引量:6
12
作者 杨朝辉 宋洪元 何凤田 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期731-735,共5页
用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进... 用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 转化 芥菜 抗虫鉴定 农杆菌介导
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外源基因在不结球白菜转基因植株后代中的表达 被引量:8
13
作者 佘建明 蔡小宁 +5 位作者 朱卫民 张初贤 朱祯 袁希汉 苏小俊 李彬 《江苏农业学报》 CSCD 2002年第1期33-36,共4页
应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因和新霉素磷酸转移酶基因的重组质粒导入不结球白菜地方品种———“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”中 ,获得抗虫转基因植株。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代T1代植株中发生分离 ;在... 应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因和新霉素磷酸转移酶基因的重组质粒导入不结球白菜地方品种———“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”中 ,获得抗虫转基因植株。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代T1代植株中发生分离 ;在T2 代中出现 3种不同类型的株系 :抗性纯合、杂合型和敏感性纯合株系。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代中的表现基本符合孟德尔显性单基因的分离规律。从T2 、T3 、T4代中选择出抗虫性纯合株系 ,并获得一批对 1~ 2龄鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫的校正死亡率达 6 0 展开更多
关键词 不结球白菜 转基因植株 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 新霉素磷酸转移酶基因 抗虫性
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根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究
14
作者 杨朝辉 何凤田 +4 位作者 宋明 江渝 彭家和 李蓉芬 黄刚 《西南农业学报》 CSCD 2004年第1期74-77,共4页
为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI... 为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中。在室内进行了喂虫试验,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照,转基因植株之间存在抗虫性差异。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 芥菜 转化 抗虫
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豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得 被引量:36
15
作者 李燕娥 朱祯 +11 位作者 陈志贤 吴霞 王伟 李淑君 朱玉 焦改丽 吴家和 徐鸿林 范小平 孟晋红 肖桂芳 李向辉 《棉花学报》 CSCD 北大核心 1998年第5期237-243,共7页
利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cow-peaTrypsinInhibitor,CpTI)基因转移进入棉花(GosypiumhirsutumL.)。棉花幼... 利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cow-peaTrypsinInhibitor,CpTI)基因转移进入棉花(GosypiumhirsutumL.)。棉花幼苗的下胚轴与携带有CpTI基因和Npt-Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养,在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性(Kmr)愈伤组织。选择Npt-Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导,继而在分化培养基上进行植株分化,最终获得了再生棉花植株。经Npt-Ⅱ分析、PCR及Southern检测证明,外源CpTI基因和标记基因(Npt-Ⅱ基因)存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫(Heliothisarmigera)生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。 展开更多
关键词 棉花转化 根癌农杆菌 抗虫基因 豇豆 cpti
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