基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析

1

作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页

【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多

关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/Cas9

在线阅读 下载PDF 职称材料

镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠胸主动脉血管钙化中的作用及机制研究 被引量：6

2

作者 张俊霞 徐金升 +4 位作者 王双宇 白亚玲 张胜雷 崔立文 张慧然 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第36期4324-4328,共5页

目的探讨镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠模型血管钙化中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠采用随机数字表法均分为对照组(A组)、慢性肾衰竭血管钙化组(B1组)、低镁组(B2组)、高镁组(B3组)。用硫酸腺嘌呤加高磷饮食复制慢性肾衰竭... 目的探讨镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠模型血管钙化中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠采用随机数字表法均分为对照组(A组)、慢性肾衰竭血管钙化组(B1组)、低镁组(B2组)、高镁组(B3组)。用硫酸腺嘌呤加高磷饮食复制慢性肾衰竭大鼠血管钙化模型。造模成功后测量4组大鼠主动脉脉搏波速率(PWV),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动脉血管钙化标志分子核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA的表达情况,von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法测定钙水平。结果 B1组血肌酐、尿素氮、血磷水平高于A组(t=32.284、22.010、26.000,P<0.05)。4组血镁水平比较,差异有统计学意义(F=7.745,P<0.05);B3组血镁水平高于B2组(q=2.897,P<0.05)。4组主动脉钙水平比较,差异有统计学意义(F=6.824,P<0.05);B2组主动脉钙水平高于B1组(q=13.192,P<0.05);B1组主动脉钙水平高于A组(q=21.925,P<0.05);B3组主动脉钙水平低于B1组和B2组(q=9.333、21.782,P<0.05)。4组胸主动脉PWV值比较,差异有统计学意义(F=6.454,P<0.05);B2组PWV值高于B1组(q=13.492,P<0.05);B1组PWV值高于A组(q=14.311,P<0.05);B3组PWV值低于B1组和B2组(q=5.333、16.865,P<0.05)。4组胸主动脉Cbfα1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=3.212,P<0.05);B1和B2组Cbfα1 mRNA表达量高于A组(q=7.333、13.565,P<0.05);B3组Cbfα1mRNA表达量低于B1组和B2组(q=10.198、13.858,P<0.05);B2组Cbfα1 mRNA表达量高于B1组(q=12.279,P<0.05)。结论镁离子能够抑制高磷诱导的慢性肾衰竭大鼠血管钙化,改善血管弹性功能;其可能机制之一是镁离子通过抑制高磷诱导血管平滑肌细胞表型转化实现。 展开更多

关键词 肾功能衰竭 慢性 动脉硬化 脉搏波速率 镁 核心结合因子α1亚基 大鼠 主动脉 胸

在线阅读 下载PDF 职称材料

尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化中Cbfα1/Runx2表达的影响 被引量：17

3

作者 张山山 杨乃龙 +2 位作者 徐丽丽 李百举 崔晶 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,344,共5页

目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 ... 目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 mmol/l、0.4 mmol/l、0.8mmol/l)的成骨诱导组,通过倒置显微镜观察细胞形态,碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定细胞。在干预诱导第7天和第14天行RT-PCR检测Cbfα1/Runx2的表达。结果碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果均阳性,表示诱导后细胞为成骨细胞。RT-PCR结果表明,对照组各时间点均无Cbfα1/Runx2表达,尿酸培养组随尿酸浓度增加和时间的延长,Cbfα1/Runx2表达逐渐增强,呈现时间依赖性和浓度依赖性。结论尿酸可能通过促进Cbfα1/Runx2的表达,从而促进hBMSCs向成骨细胞分化。 展开更多

关键词 尿酸 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Cbfcfal RUNX2

在线阅读 下载PDF 职称材料

胃癌高发区人群RUNX3表达与胃黏膜病变的关系 被引量：4

4

作者 李文庆 潘凯枫 +7 位作者 张阳 张联 马峻岭 周彤 李吉友 王政 苏英 游伟程 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期348-352,共5页

目的:探讨RUNX3蛋白表达与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染相关胃黏膜病变的关系。方法:选取山东省临朐县胃癌高发区具有明确胃黏膜病理诊断的1 026例H.pylori感染者为研究对象,采用免疫组织化学方法,检测最高诊断部位胃黏膜组织RU... 目的:探讨RUNX3蛋白表达与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染相关胃黏膜病变的关系。方法:选取山东省临朐县胃癌高发区具有明确胃黏膜病理诊断的1 026例H.pylori感染者为研究对象,采用免疫组织化学方法,检测最高诊断部位胃黏膜组织RUNX3蛋白表达状况。结果:在1 026例患有不同胃黏膜病变的研究对象中,RUNX3表达阳性者为359例,表达率为35.0%(359/1 026),表达率随胃黏膜病变的加重呈逐渐下降趋势,由浅表性胃炎/正常(superficial gastritis/normal,SG/N)的65.6%(40/61)降至异型增生(dysplasia,DYS)的22.4%(60/268,P<0.01)。以SG/N为对照组,RUNX3表达阳性为参照,RUNX3表达阴性者患慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)、肠上皮化生(intestinal metaplasia,IM)和DYS的风险分别为表达阳性者的2.83倍[oddsratio(OR)=2.83,95%confidence interval(CI)=1.58～5.06)],3.52倍(OR=3.52,95%CI=1.98～6.24)和7.19倍(OR=7.19,95%CI=3.81-13.56)。进一步分析显示,不论吸烟(或饮酒)状况如何,RUNX3表达阴性者与表达阳性且不吸烟(或不饮酒)者相比,患IM和DYS的风险均明显增加,ORs在2.78～12.29之间。结论:RUNX3蛋白表达水平与H.pylori感染相关胃黏膜病变程度呈明显的负相关,提示RUNX3表达下调可能在胃黏膜病变的演变过程中起重要作用。 展开更多

关键词 胃肿瘤 胃黏膜 核心结合因子α3亚基 螺杆菌感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究 被引量：85

5

作者 武密山 赵素芝 +4 位作者 任立中 王茹 白霞 韩红伟 李彬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期222-226,共5页

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向... 目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。 展开更多

关键词 川续断皂苷Ⅵ 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞增殖 细胞分化 碱性磷酸酶 核心结合因子α-1

在线阅读 下载PDF 职称材料

核结合因子相关的急性髓系白血病的临床分析 被引量：5

6

作者 李巍 秘营昌 +7 位作者 刘兵城 周春林 林冬 王慧君 刘旭萍 李庆华 卞寿庚 王建祥 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期517-524,共8页

目的探讨影响核结合因子(CBF)相关的急性髓系白血病(AML)患者临床特征、细胞遗传学特点及影响其生存、预后的主要因素。方法对130例CBF AML[其中AML伴t(8;21)87例、AML伴inv(16)/t(16;16)43例]患者进行随访,分析其免疫表型、染色体核型... 目的探讨影响核结合因子(CBF)相关的急性髓系白血病(AML)患者临床特征、细胞遗传学特点及影响其生存、预后的主要因素。方法对130例CBF AML[其中AML伴t(8;21)87例、AML伴inv(16)/t(16;16)43例]患者进行随访,分析其免疫表型、染色体核型及治疗、生存情况、影响总体生存时间及无复发生存时间的因素。结果 130例CBF AML患者总完全缓解率96.1%,其中1疗程总完全缓解率77.2%。中位生存期(OS)51.64(0.26～132.5)个月,中位无复发生存期(RFS)未达1.18～96.62个月。3年OS率50%,5年OS率41%;3年RFS率59%,5年RFS率54%。年龄、染色体核型与OS有关,其中年龄≥45岁患者、染色体核型伴9q-的患者预后差、生存期短。在巩固治疗过程中采用≥2疗程的中剂量阿糖胞苷(Ara-C)巩固治疗方案的患者预后好,生存期长。OS、RFS对比分析显示:AML伴inv(16)/t(16;16)的OS较AML伴t(8,21)明显延长(P=0.046),但AML伴t(8,21)的RFS较AML伴inv(16)/t(16;16)明显延长(P=0.038)。结论年龄、染色体核型及巩固治疗的方案是影响CBFAML患者生存、预后的主要因素,在巩固治疗中采用≥2疗程的中剂量Ara-C可以延长CBF AML患者的OS、RFS。AML伴inv(16)/t(16;16)患者较AML伴t(8,21)患者总体生存期长、预后好。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 核结合因子 预后

在线阅读 下载PDF 职称材料

高浓度他克莫司抑制人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化(英文) 被引量：2

7

作者 韦鸿雁 潘伟 +3 位作者 邱霓 黄丽 周宏灏 肖洲生 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期223-228,共6页

目的探讨他克莫司（FK506）对人骨髓间质干细胞（hBMSCs）增殖及向成骨细胞分化的影响。方法 FK506 0.001-5μmo.lL-1处理hBMSCs细胞中,雌二醇0.01μmol·L^-1或咖啡因100μmol·L^-1为阳性对照组,作用24 h后用BrdU掺入法检测... 目的探讨他克莫司（FK506）对人骨髓间质干细胞（hBMSCs）增殖及向成骨细胞分化的影响。方法 FK506 0.001-5μmo.lL-1处理hBMSCs细胞中,雌二醇0.01μmol·L^-1或咖啡因100μmol·L^-1为阳性对照组,作用24 h后用BrdU掺入法检测细胞增殖,在促成骨细胞分化液中作用8 d后用比色法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,作用12 d后用邻甲酚酞络合法检测钙沉积量;通过检测磷酸盐释放量间接反映钙调神经磷酸酶（CaN）活性,Western印迹法检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）表达。结果与DMSO对照组相比,FK506 0.001-0.01μmol·L^-1促进细胞增殖,但对ALP活性及钙沉积量无影响;FK506 0.5-5μmo·lL^-1呈浓度依赖性地抑制细胞增殖,显著抑制ALP活性及减少钙沉积量（P〈0.05）。此外,FK5060.1-5μmo·lL^-1浓度依赖性地降低CaN活性,与相同浓度FK506呈浓度依赖性地下调Cbfα1的表达效应相一致。结论高浓度FK506可通过CaN/Cbfα1通路抑制hBMSCs增殖及向成骨细胞成骨分化。 展开更多

关键词 他克莫司 人骨髓间质干细胞 钙调神经磷酸酶 核心结合因子α1亚基

在线阅读 下载PDF 职称材料

体外诱导C2C12细胞向成骨细胞的分化 被引量：4

8

作者 张勇 杨彤涛 +3 位作者 胡运生 廖博 文艳华 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期473-477,共5页

目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。... 目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。方法体外培养小鼠成肌细胞C2C12,用重组腺病毒质粒pAd-IL-31介导Cbfa1/Osf2基因瞬时转染小鼠成肌C2C12细胞,Western blot检测Cbfa1蛋白表达。结果 Cbfa1蛋白表达、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(osteocalcin,OCN)分泌量以及茜素红染色感染组明显高于对照组。结论成肌细胞C2C12可以作为种子细胞构建组织工程化骨。 展开更多

关键词 成骨细胞特异性转录因子a1 成肌细胞C2C12 Western BLOT

在线阅读 下载PDF 职称材料

OGP(10-14)及其类似物G48A对成骨细胞IGF-1和Cbfα1表达的影响 被引量：5

9

作者 丁晓颖 邱明才 +2 位作者 彭永德 王宝利 王德心 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期137-140,共4页

目的探讨成骨生长肽羧基端片段[OGP(10-14)](G36G)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响。方法体外分离SD大鼠成骨细胞,传代培养后取第3代细胞并用于实验。根据不同处理因素... 目的探讨成骨生长肽羧基端片段[OGP(10-14)](G36G)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响。方法体外分离SD大鼠成骨细胞,传代培养后取第3代细胞并用于实验。根据不同处理因素,将成骨细胞分为G36G组(培养液含1×10-11mol/LG36G)、G48A组(培养液含1×10-13mol/LG48A)、甲状旁腺激素(PTH)组(培养液含1×10-8mol/LPTH)和对照组(未处理)。运用RT-PCR技术分别检测各组成骨细胞Cbfα1、IGF-1mRNA的表达,并进行统计学比较。结果G36G组、G48A组、PTH组和对照组Cbfα1mRNA表达分别为1.123±0.081、1.101±0.115、1.104±0.054、0.893±0.067;IGF-1mRNA表达分别为1.130±0.067、1.213±0.111、1.173±0.180、0.908±0.081。经统计学分析,G36G组、G48A组和PTH组Cbfα1、IGF-1mRNA表达较对照组显著上升(均P<0.05),而其三组间比较无显著差异(P>0.05)。结论OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞Cbfα1和IGF-1mRNA的表达具有上调作用。 展开更多

关键词 成骨生长肽 类似物 成骨细胞 胰岛素样生长因子-1 核心结合因子Α1 RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

核心结合因子α1在成牙本质细胞样细胞MDPC-23中的表达 被引量：4

10

作者 郭婷 曹罡 +3 位作者 余擎 肖明振 赵守亮 吉兰 《医学研究生学报》 CAS 2006年第12期1067-1069,1072,I0018,共5页

目的:观察核心结合因子α1(cbfα1)在成牙本质细胞样细胞MDPC-23中的表达情况,为进一步研究cbfα1在牙胚发育,尤其是成牙本质细胞分化过程中的作用奠定基础。方法:通过瞬时转染、免疫荧光染色、W esternb lot等方法,研究转染或BMP-2刺激... 目的:观察核心结合因子α1(cbfα1)在成牙本质细胞样细胞MDPC-23中的表达情况,为进一步研究cbfα1在牙胚发育,尤其是成牙本质细胞分化过程中的作用奠定基础。方法:通过瞬时转染、免疫荧光染色、W esternb lot等方法,研究转染或BMP-2刺激时,cbfα1在MDPC-23细胞中的表达情况。结果:在普通MDPC-23细胞中未发现cbfα1的表达;转染pcDNA3-cbfα1 48 h后,cbfα1表达量最高;加入骨形态发生蛋白-2(BMP-2)刺激,可诱导内源性cbfα1的表达,但表达量小于pcDNA3-cbfα1组;而pcDNA3-cbfα1组和BMP-2+pcDNA3-cbfα1组的cbfα1表达量差异无显著性意义(P>0.05)。结论:转染pcDNA3-cbfα1 48 h后,cbfα1表达量最高,可作为今后研究的观测点。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 瞬时转染 转录调控

在线阅读 下载PDF 职称材料

左、右归丸及其拆方对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：19

11

作者 宋囡 何文智 +1 位作者 王智民 任艳玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1268-1274,共7页

目的:研究左、右归丸及其拆方含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法:分别以左归丸、右归丸、两方共同药、滋肾阴药、补肾阳药、阳性对照药补佳乐和蒸馏水制备的大鼠含药血清加诱... 目的:研究左、右归丸及其拆方含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法:分别以左归丸、右归丸、两方共同药、滋肾阴药、补肾阳药、阳性对照药补佳乐和蒸馏水制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠)干预BMSCs,并以不含诱导剂的空白含药血清组为对照,共8组,采用改良钙钴法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,茜素红法观察矿化结节的形成,并用real-time RT-PCR法检测核心结合因子α1(core binding factor alpha 1,Cbfα1)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)mRNA表达,用Western blotting法检测Cbfα1和ColⅠ蛋白表达。结果:左、右归丸及其拆方与阳性对照药补佳乐均可协同诱导剂诱导BMSCs成骨分化,其中,左归丸和滋肾阴药可显著促进ALP生成和矿化结节形成,上调Cbfα1和ColⅠmRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:左、右归丸及其拆方含药血清能协同诱导剂促进BMSCs成骨分化,左归丸和滋肾阴药促进BMSCs成骨分化的作用优于右归丸和补肾阳药。 展开更多

关键词 左归丸 右归丸 骨髓间充质干细胞 碱性磷酸酶 核心结合因子Α1 Ⅰ型胶原

在线阅读 下载PDF 职称材料

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制 被引量：6

12

作者 薛龑 傅晓萌 +3 位作者 郑金源 陈梅环 林东红 徐建萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1020-1025,共6页

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和W... 目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE)3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达;Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高;PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P<0.05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。 展开更多

关键词 核结合因子白血病 SARI Kasumi-1细胞株 细胞凋亡 PI3K/AKT通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

核心结合因子(Cbfa1／Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达 被引量：3

13

作者 张辛 杨民 +4 位作者 林霖 陈苹 马康涛 敖英芳 周春燕 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期67-71,共5页

目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/Runx2cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ518... 目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/Runx2cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2。经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测。通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功。Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%。转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白。 展开更多

关键词 核心结合因子 脂肪组织来源干细胞 腺病毒载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

间期荧光原位杂交检测核心结合因子相关急性白血病的初步研究 被引量：2

14

作者 刘晓力 杜庆锋 +5 位作者 宋兰林 张嵩 李荣 林榕 刘启发 周淑芸 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第10期1038-1041,共4页

目的应用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)检测初诊急性白血病患者中核心结合因子(CBF)受累的染色体异常情况并对治疗后患者的微小残留病(MRD)进行监测,同时对I-FISH与常规染色体G显带的灵敏度进行比较。方法在骨髓形态学初筛的基础上,应... 目的应用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)检测初诊急性白血病患者中核心结合因子(CBF)受累的染色体异常情况并对治疗后患者的微小残留病(MRD)进行监测,同时对I-FISH与常规染色体G显带的灵敏度进行比较。方法在骨髓形态学初筛的基础上,应用常规染色体G显带技术对15例急性髓系白血病(AML)进行核型分析,应用I-FISH对患者可能受累的CBF相关靶基因进行检测,其中7例患者治疗后进行了MRD监测。结果(1)正常对照组中,CYTOCELL公司提供的3种探针(AML1/ETO易位探针、MYH11基因断裂点双色探针和ETV6/AML1易位探针)的正常分界值分别为4.13%、1.95%和2.12%。(2)常规染色体G显带分析,15例患者中有6例伴有潜在累及CBF基因的染色体异常,其中8例AML-M2中5例伴t(8;21),2例AML-M4EO中1例伴inv(16),5例儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)未检出相应的异常。I-FISH检测15例患者发现有12例累及CBF基因,其中8例AML-M2患者均为AML1/ETO融合基因(+),2例AML-M4EO病人CBFβ/MYH11融合基因均为(+),5例儿童B-ALL中2例ETV6/AML融合基因(+)。(3)3例AML-M2患者中2例MRD阳性;2例M4E0患者治疗后MRD监测结果均阴性;2例B-ALL患者1例阴性,1例阳性。结论I-FISH较常规染色体G显带技术能够更灵敏地检测出累及CBF的急性白血病,在初诊时联合应用这两种? 展开更多

关键词 间期荧光原位杂交 检测 核心结合因子 急性白血病 染色体异常

在线阅读 下载PDF 职称材料

终末期肾脏病患者桡动脉中膜钙化与核心结合因子α_1及Ⅰ型胶原的关系研究 被引量：3

15

作者 张俊霞 徐金升 +4 位作者 靳晶晶 白亚玲 张胜雷 崔立文 张慧然 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第26期3069-3073,共5页

目的探讨终末期肾脏病（ESRD）患者桡动脉中膜钙化与核心结合因子α1（Cbfα1）及Ⅰ型胶原的关系。方法选择2009年5月—2012年12月在河北医科大学第四医院肾内科住院初次行前臂动-静脉内瘘成形术的ESRD患者62例。采用von kossa染色法观... 目的探讨终末期肾脏病（ESRD）患者桡动脉中膜钙化与核心结合因子α1（Cbfα1）及Ⅰ型胶原的关系。方法选择2009年5月—2012年12月在河北医科大学第四医院肾内科住院初次行前臂动-静脉内瘘成形术的ESRD患者62例。采用von kossa染色法观察桡动脉钙化情况,并根据组织钙化积分将患者分为无钙化组（〈1.0分）和钙化组（1.0~4.0分）;采用免疫组织化学法观察Cbfα1及Ⅰ型胶原的表达情况;检测相关临床指标〔空腹血清钙（Ca）、血清磷（P）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、血红蛋白（Hb）、碱性磷酸酶（ALP）、铁蛋白、甲状旁腺素（iPTH）和C反应蛋白（CRP）,血压,体质指数（BMI）〕。结果62例ESRD患者桡动脉标本中25例（40.3%）发生血管钙化,其中轻中度钙化22例（35.5%）,重度钙化3例（4.8%）,均发生在血管中膜。根据组织钙化积分,无钙化组37例,钙化组25例。钙化组桡动脉中膜均有Cbfα1及Ⅰ型胶原的阳性表达;无钙化组桡动脉中膜31例（83.8%）Cbfα1阳性表达,19例（51.4%）Ⅰ型胶原阳性表达。钙化组Cbfα1及Ⅰ型胶原的阳性表达积分均高于无钙化组（P〈0.05）。钙化组与无钙化组的年龄、BMI、血压、Ca、iPTH、TG、TC、LDL、HDL、Hb、CRP、铁蛋白、ALP比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;钙化组血清P水平高于无钙化组（P〈0.05）。钙化组Cbfα1阳性表达积分与血清P呈正相关（r=0.679,P〈0.05）,与年龄、BMI、血压、血清Ca、TG、TC、LDL、HDL、iPTH、Hb、CRP、铁蛋白、ALP无相关性（P〉0.05）;Ⅰ型胶原阳性表达积分与血清P呈正相关（r=0.393,P〈0.05）,与年龄、BMI、血压、血清Ca、TG、TC、LDL、HDL、iPTH、Hb、CRP、铁蛋白、ALP无相关性（P〉0.05）;Cbfα1阳性表达积分与Ⅰ型胶原阳性表达积分呈正相关（r=0.307,P〈0.05）。结论 ESRD患者血管中膜钙化发生率较高,其发生机制可能与高磷诱导血管平滑肌细胞表型转化,促进I型胶原表达增加有关,为临床进一步研究提供了参考依据。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 Ⅰ型胶原 终末期肾脏病 血管中膜钙化 高磷血症

在线阅读 下载PDF 职称材料

MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用(英文) 被引量：3

16

作者 张秀珍 宋利格 王博 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2009年第2期115-122,共8页

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated proteinkinase，MAPK）信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1（corebinding factor-1，Cbfal）蛋白表达中的作用，以探... 目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated proteinkinase，MAPK）信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1（corebinding factor-1，Cbfal）蛋白表达中的作用，以探讨淫羊藿甙对成骨细胞作用的信号传导机制。方法用酶消化法分离24h内新生sD大鼠颅盖骨成骨细胞，进行原代培养。在培养液中加入淫羊藿甙（10ng／mL），作用于成骨细胞5min、10min、30min、60min，抽提总蛋白，用Westernblot法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达。用雌二醇（10^-8mol／L）作用于成骨细胞5min、10min、30min，同上法检测细胞中ERK、P．ERK、P38和p-P38蛋白的表达。用淫羊藿甙（10ng／mL）、雌二醇（10^-8mol／L）和u0126或SB203580单独或共同干预成骨细胞24h，抽提核蛋白，用Westernblot法检测Cbfal蛋白的表达。结果①淫羊藿甙作用于成骨细胞，30min时可促进ERK蛋白的磷酸化，并可持续至60min，和空白组比较，差异有显著性（P〈0．05）；淫羊藿甙作用于成骨细胞，5min时即可促进P38蛋白的磷酸化，在30min时达高峰，并可持续至60min，和空白组比较，差异有显著性（P〈0．05）。②雌二醇作用于成骨细胞，在30min时可促进ERK蛋白的磷酸化，和空白组比较，差异有显著性（P〈0．05）；雌二醇作用于成骨细胞，在10min时可促进P38蛋白的磷酸化，并可持续至30min，和空白组比较，差异有显著性（P〈0．05）。③淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中Cbfal蛋白的表达，和空白组相比，差异有显著性（P〈0．05）。u0126和SB203580可以抑制淫羊藿甙和雌二醇促进Cbfal蛋白表达的作用。结论①淫羊藿甙和雌二醇均可以激活成骨细胞中ERK／MAPK和P38／MAPK信号通路；②淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中核转录因子Cbfal的表达，并且ERK／MAPK和P38／MAPK信号通路参与了此过程。 展开更多

关键词 丝裂原活化蛋白激酶 核心结合因子Α1 淫羊藿甙 成骨细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导的Cbfa1基因转移对NIH3T3细胞的调节作用 被引量：1

17

作者 郭国宁 张正丰 +4 位作者 周跃 郭志良 李华壮 张传志 曹国永 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期961-963,共3页

目的　探讨腺病毒介导的核心结合因子a1(corebindingfactora1,Cbfa1)基因转移对NIH3T3细胞的调节作用。方法　含有Cbfa1基因的重组腺病毒转染NIH3T3细胞,RT PCR检测成骨标志基因骨钙素(osteocalcin ,OCN)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、... 目的　探讨腺病毒介导的核心结合因子a1(corebindingfactora1,Cbfa1)基因转移对NIH3T3细胞的调节作用。方法　含有Cbfa1基因的重组腺病毒转染NIH3T3细胞,RT PCR检测成骨标志基因骨钙素(osteocalcin ,OCN)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨唾液蛋白(bonesialoprotein ,Bsp)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase ,AKP)、Cbfa1的表达。Westernblot检测Cbfa1的表达,免疫细胞化学染色检查OCN的表达。结果　NIH3T3细胞在Cbfa1基因转移后RT PCR检测到OCN、Bsp、AKP、typeⅠcollagen基因的表达,Westernblot检测到Cbfa1蛋白的表达,免疫细胞化学染色检测到了OCN蛋白的表达。结论　腺病毒介导Cbfa1基因转移NIH3T3细胞后出现成骨表型。 展开更多

关键词 CBFA1 成骨 NIH3T3

在线阅读 下载PDF 职称材料

雌二醇对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响 被引量：3

18

作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 侯建红 栗群英 黄迎春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第13期1155-1158,共4页

目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)ⅠA及核结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠... 目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)ⅠA及核结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用RT PCR和Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,且呈剂量依赖性 ,并被Northernblot结果所证实。ALP活性随E2浓度增加而降低 ,细胞Ⅰ型胶原的合成量随E2浓度增加而减少。结论　E2能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,降低成骨细胞生成。 展开更多

关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 骨形态发生蛋白受体ⅠA 分化 核结合因子α1

在线阅读 下载PDF 职称材料

核心结合因子a1、骨形成蛋白及骨桥素在小鼠牙周组织发育中的免疫组化定位研究 被引量：1

19

作者 杨丕山 潘克清 +1 位作者 李纾 姜波 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期487-490,共4页

目的探讨核心结合因子a1、骨形成蛋白和骨桥素3者在小鼠牙周组织发育过程中的时间和空间分布特点、表达意义及它们之间的相互作用。方法用SABC免疫组化法检测3者在出生后不同时期小鼠牙周组织发育中的表达及特点。结果牙齿发育早期,仅... 目的探讨核心结合因子a1、骨形成蛋白和骨桥素3者在小鼠牙周组织发育过程中的时间和空间分布特点、表达意义及它们之间的相互作用。方法用SABC免疫组化法检测3者在出生后不同时期小鼠牙周组织发育中的表达及特点。结果牙齿发育早期,仅骨形成蛋白在牙囊细胞中表达;当牙根开始发育后,3者皆在牙周膜细胞、成牙骨质细胞中表达,但骨形成蛋白在无细胞牙骨质和细胞牙骨质中皆不表达,核心结合因子a1在细胞牙骨质中表达,而骨桥素则在无细胞牙骨质、细胞牙骨质和牙槽骨表面皆呈强阳性表达。结论核心结合因子a1、骨形成蛋白、骨桥素3者皆参与牙周组织的发育,对矿化和生长发育发挥重要作用。 展开更多

关键词 核心结合因子A1 骨形成蛋白 骨桥素

在线阅读 下载PDF 职称材料

S100钙结合蛋白β与α突触核蛋白与帕金森病患者抑郁及运动障碍的关系 被引量：4

20

作者 李婷 郑丽娜 +1 位作者 张叶 王黎明 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期418-421,共4页

目的研究帕金森病(PD)患者血清S100钙结合蛋白β(S100β)及α突触核蛋白(α-syn)水平与患者抑郁及运动障碍的关系。方法选择2022年1月至12月聊城市人民医院收治的PD患者194例,根据汉密尔顿抑郁量表评分分为非抑郁组102例(0~13分)及抑郁... 目的研究帕金森病(PD)患者血清S100钙结合蛋白β(S100β)及α突触核蛋白(α-syn)水平与患者抑郁及运动障碍的关系。方法选择2022年1月至12月聊城市人民医院收治的PD患者194例,根据汉密尔顿抑郁量表评分分为非抑郁组102例(0~13分)及抑郁组92例(≥14分)。运动障碍采用Hoehn-Yahr(H-Y)分级及统一帕金森病评定量表Ⅲ(UPDRS-Ⅲ)进行评分,用多因素logistic回归分析PD患者抑郁的独立危险因素,用Spearman相关性分析血清S100β及α-syn水平与患者抑郁及运动障碍的关系。结果抑郁组体质量指数低于非抑郁组,H-Y分级、UPDRS-Ⅲ评分、S100β、α-syn均高于非抑郁组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,H-Y分级、UPDRS-Ⅲ评分、S100β、α-syn为PD患者抑郁的独立危险因素(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,PD患者S100β水平与H-Y分级、UPDRS-Ⅲ评分呈正相关(r=0.698,P=0.005;r=0.637,P=0.011);α-syn水平与H-Y分级、UPDRS-Ⅲ评分呈正相关(r=0.654,P=0.021;r=0.611,P=0.035)。ROC曲线显示,S100β、α-syn诊断PD患者抑郁的截断值分别为486.65μg/L、3894.27 ng/L,曲线下面积分别为0.889(95%CI:0.812~0.923)、0.761(95%CI:0.714~0.828),S100β曲线下面积显著优于α-syn(P<0.05)。结论PD患者血清S100β、α-syn水平与其抑郁发生及运动功能障碍密切相关。 展开更多

关键词 帕金森病 S100钙结合蛋白β亚基 Α突触核蛋白 抑郁 运动障碍 LOGISTIC模型 危险因素

在线阅读 下载PDF 职称材料