CTHRC1基因在胃癌组织中的表达 被引量：3

1

作者 何敖林 吴福荣 +3 位作者 李莎莎 刘瑞文 朱为伟 胡雨佳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第7期1149-1151,共3页

目的:通过检测三螺旋重复胶原蛋白Ⅰ(CTHRC1)在胃癌组织中的表达水平,初步研究其在胃癌发生发展中的意义。方法:应用Western-Blot方法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,分别检测胃癌组织及与其相对应的远癌正常胃组织中CTHRC1的相... 目的:通过检测三螺旋重复胶原蛋白Ⅰ(CTHRC1)在胃癌组织中的表达水平,初步研究其在胃癌发生发展中的意义。方法:应用Western-Blot方法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,分别检测胃癌组织及与其相对应的远癌正常胃组织中CTHRC1的相对表达水平。结果:33例胃癌组织中CTHRC1的相对表达量为0.315±0.234,与其对应的33例远癌正常胃组织中的CTHRC1的相对表达量为0.500±0.148,差异有统计学意义(t=6.482,P<0.01)。结论:CTHRC1在胃癌组织中的表达显著降低,提示CTHRC1可能与胃癌的发生、发展有关。 展开更多

关键词 胃肿瘤 三螺旋重复胶原蛋白Ⅰ 免疫印迹杂交

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CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究 被引量：2

2

作者 谭非 徐星 +1 位作者 高品 苏向前 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期932-938,共7页

目的:探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。方法:采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双... 目的:探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。方法:采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织(P<0.001),基因CTHRC1的表达趋势相反(P<0.001),且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织(P=0.003)。结论:miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。 展开更多

关键词 cthrc1 miR-520d-5P 转移性结直肠癌 细胞增殖 侵袭

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沉默CTHRC1表达对乳癌MDA-MB-157细胞体外侵袭转移能力的影响

3

作者 梁冰 王峰 +1 位作者 刘景超 陈建中 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第4期493-496,共4页

目的:探讨沉默CTHRC1基因表达对乳癌MDA-MB-157细胞体外侵袭转移能力的影响。方法:化学合成靶向CTHRC1基因的siRNA,分别以不同浓度(10、20和30nmol/L)转染MDA-MB-157细胞,同时以转染阴性对照siRNA和未转染细胞为对照。转染48h后,应用RT-... 目的:探讨沉默CTHRC1基因表达对乳癌MDA-MB-157细胞体外侵袭转移能力的影响。方法:化学合成靶向CTHRC1基因的siRNA,分别以不同浓度(10、20和30nmol/L)转染MDA-MB-157细胞,同时以转染阴性对照siRNA和未转染细胞为对照。转染48h后,应用RT-PCR和Westernblot检测细胞CTHRC1mRNA和蛋白的表达情况。以干扰效率最高的CTHRC1siRNA浓度再次转染MDA-MB-157细胞,同时以转染阴性对照siRNA、转染Lipofectamine2000和未转染细胞为对照,分别在转染前、转染24、48和72h后收集细胞,BoydenChamber检测细胞侵袭能力的变化;转染48h后做细胞划痕实验,分别于划痕后24、48和72h检测划痕宽度。结果:各组细胞CTHRC1mRNA和蛋白表达的差异有统计学意义(F=28.185和17.776,P<0.001)。随着CTHRC1siRNA转染浓度的增加,CTHRC1mRNA和蛋白的表达下降,30nmol/LCTHRC1siRNA干扰效率最高。MDA-MB-157细胞转染30nmol/LCTHRC1siRNA后,穿膜细胞数和划痕愈合能力明显下降(P<0.05)。结论:抑制CTHRC1基因的表达能有效抑制乳癌MDA-MB-157细胞体外的侵袭和转移能力。 展开更多

关键词 胶原三股螺旋重复蛋白1 乳癌 RNA干扰 侵袭 转移

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CTHRC1在结直肠癌中的表达及作用机制 被引量：4

4

作者 严力 叶耿泰 +3 位作者 沈智勇 朱显军 刘浩 李国新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期767-771,776,共6页

目的检测胶原三股螺旋重叠蛋白(CTHRC1)在结直肠癌组织及细胞中的表达,探讨CTHRC1对结直肠癌细胞生物学特性的影响和作用机制。方法应用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测CTHRC1在结直肠癌组织和5株结直肠癌细胞的表达;将靶向作用于CTHRC1... 目的检测胶原三股螺旋重叠蛋白(CTHRC1)在结直肠癌组织及细胞中的表达,探讨CTHRC1对结直肠癌细胞生物学特性的影响和作用机制。方法应用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测CTHRC1在结直肠癌组织和5株结直肠癌细胞的表达;将靶向作用于CTHRC1的sh RNA和NC转染进LOVO细胞;CCK-8、Transwell、平板克隆检测细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。Western blotting检测转染后CTHRC1、ERK1/2、P-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin表达的变化。结果与正常黏膜组织相比,20例癌组织中的CTHRC1 m RNA的平均表达量为0.0411±0.054,显著高于正常黏膜组织P=0.016,蛋白水平的结果与之一致;同时,CTHRC1在SW620和LOVO细胞里的表达(m RNA水平和蛋白水平)均显著高于HT29细胞株;较之对照组,CTHRC1敲低组抑制了LOVO细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,差异均具有统计学意义P<0.05。当CTHRC1在m RNA和蛋白水平的表达均被明显抑制时,总ERK1/2在保持基本不变的的前提下,P-ERK1/2明显降低,EMT出现逆转(即MET,E-cadherin升高,N-cadherin、Vimentin、β-catenin降低)。结论 CTHRC1在结直肠癌组织及高转移潜能的人结直肠癌细胞株SW620和LOVO中高表达。敲低CTHRC1抑制了结直肠癌细胞株LOVO的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。CTHRC1通过增强ERK1/2的磷酸化所介导的EMT促进结直肠癌的侵袭转移。 展开更多

关键词 结直肠癌 胶原三股螺旋重叠蛋白 短发卡RNA 上皮间充质转化 ERK1/2

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CTHRC1通过活化FAK-ERK1/2信号通路促进膀胱癌5637细胞迁移和侵袭 被引量：1

5

作者 印胡滨 何卫阳 +1 位作者 周翔 苟欣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期209-217,共9页

目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重... 目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重庆医科大学附属第一医院手术切除的144例膀胱癌组织和25例全膀胱切除的癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞RT4、5637、T24、UMUC-3、TCCSUP和输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1。采用免疫组织化学染色法、qPCR法和WB法检测膀胱癌组织和细胞中CTHRC1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线分析CTHRC1表达对总生存期(OS)的影响。运用RNAi技术,敲降5637细胞CTHRC1表达后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测CTHRC1表达下调对5637细胞迁移和侵袭的影响。利用基因集富集分析(GSEA)预测CTHRC1相关的潜在信号通路,WB法检测敲降CTHRC1表达对FAK-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响。结果:CTHRC1的转录和翻译水平在肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织和细胞中表达显著上调(均P<0.05),CTHRC1高表达组患者5年OS较低表达患者缩短(P<0.05)。干扰CTHRC1表达后,膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。GSEA预测显示,CTHRC1高表达组主要富集在黏着斑激酶(FAK)、肌动蛋白细胞骨架调节、FAK和ERK1/2信号通路。WB法实验结果表明,重组CTHRC1蛋白促进膀胱癌5637细胞FAK-ERK1/2信号通路活化(P<0.05或P<0.01)。结论:CTHRC1在MIBC中表达上调,且与膀胱癌患者不良预后密切相关;CTHRC1促进膀胱癌细胞迁移和侵袭,该过程可能与FAK-ERK1/2信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 胶原三螺旋重复蛋白1 膀胱癌 5637细胞 迁移 侵袭 FAK-ERK1/2信号通路 预后

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CTHRC1调控COL1A1过表达促进胃癌细胞增殖的研究 被引量：6

6

作者 汤月良 梁永艺 +1 位作者 邓冠群 黄延年 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期471-478,共8页

目的 探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)对胃癌细胞的增殖作用机制。方法 收集广州市增城区人民医院2017年6月-2018年6月经病理确诊的8例胃癌患者的癌组织及癌旁组织。采用Western blotting检测胃癌组织、癌旁组织和胃癌细胞系SGC-7901... 目的 探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)对胃癌细胞的增殖作用机制。方法 收集广州市增城区人民医院2017年6月-2018年6月经病理确诊的8例胃癌患者的癌组织及癌旁组织。采用Western blotting检测胃癌组织、癌旁组织和胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、BGC-803、MKN-45、MKN-28,以及人胃黏膜GES-1细胞中CTHRC1的蛋白表达水平;将si-CTHRC1、si-COL1A1转染至胃癌SGC-7901细胞后,用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率;用STRING数据库预测CTHRC1的靶基因;Western blotting和免疫荧光检测si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1蛋白表达情况;Kaplan-Meier分析CTHRC1和COL1A1蛋白在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中CTHRC1蛋白的表达量为0.87±0.13,明显高于癌旁组织(0.31±0.20);胃癌细胞系中CTHRC1蛋白的表达量均高于人胃黏膜GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后,细胞增殖明显降低,si-CTHRC1与si-COL1A1共转染组胃癌SGC-7901细胞活力(0.40±0.07)明显低于单独si-CTHRC1组(0.87±0.05)和si-COL1A1组(0.83±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05);si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后细胞凋亡率为16.77%±1.55%,高于空白对照组的4.80%±1.93%,差异有统计学意义(P<0.05);STRING数据库预测提示COL1A1为CTHRC1作用的靶基因;si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1相对蛋白表达量为0.92±0.16、1.08±0.23,均高于空白对照组的0.55±0.15、0.65±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫荧光检测发现,si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1蛋白表达明显降低;Kaplan-Meier分析结果示胃癌组织中CTHRC1高表达患者的5年生存率(27.4%)明显低于低表达患者(38.4%),胃癌组织中COL1A1高表达患者的5年生存率(20.4%)明显低于低表达患者(49.3%),差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 CTHRC1通过过表达COL1A1蛋白促进胃癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 胃肿瘤 胶原三股螺旋重叠蛋白1 胶原蛋白I型α1 细胞增殖

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沉默CTHRC1调控p53介导的线粒体凋亡诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡 被引量：5

7

作者 曾健 蒋斌 +1 位作者 黄果 陈娟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第12期1833-1839,共7页

目的探究短发夹RNA(shRNA)干扰载体沉默胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法将shRNA-CTHRC1质粒和阴性对照质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,采用qPCR法和Westernblot法分别检测CTHRC1mRNA和蛋白表达水平;C... 目的探究短发夹RNA(shRNA)干扰载体沉默胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法将shRNA-CTHRC1质粒和阴性对照质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,采用qPCR法和Westernblot法分别检测CTHRC1mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法和流式细胞术法分别检测细胞增殖活力和凋亡率;线粒体膜电位试剂盒(JC-10染色法)检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase3、细胞色素C(CytC)以及p53介导的线粒体凋亡途径相关蛋白p53、Apaf-1、Cleaved-caspase9、Bcl-2、Bax和PUMA等表达水平。将shRNA-CTHRC1质粒和si-p53干扰质粒分别或同时转染至MCF-7细胞中,Westernblot法检测p53和CytC蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果沉默CTHRC1可降低MCF-7细胞中CTHRC1mRNA和蛋白表达水平,抑制细胞增殖活力,提高细胞凋亡率,降低线粒体膜电位,上调Cleaved-caspase3、p53、Apaf-1、Cleaved-caspase9、Bax、PUMA和胞质中CytC等蛋白表达水平,下调Bcl-2和线粒体中CytC蛋白表达水平。然而,干扰p53表达可逆转CTHRC1沉默对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论CTHRC1沉默通过激活p53介导的线粒体凋亡途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 乳腺癌 胶原三螺旋重复蛋白1 p53 线粒体 细胞凋亡

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胶原三螺旋重复蛋白-1参与疾病作用研究进展 被引量：3

8

作者 韩乐 张玲玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期904-907,共4页

胶原三螺旋重复蛋白-1(collagen triple helix repeat containing-1,CTHRC1)是一种具有血管损伤修复作用的分泌型蛋白,参与血管重构、成骨细胞形成以及创伤修复。CTHRC1通过促进细胞迁移、血管形成参与肿瘤病理进程,通过促进成纤维样滑... 胶原三螺旋重复蛋白-1(collagen triple helix repeat containing-1,CTHRC1)是一种具有血管损伤修复作用的分泌型蛋白,参与血管重构、成骨细胞形成以及创伤修复。CTHRC1通过促进细胞迁移、血管形成参与肿瘤病理进程,通过促进成纤维样滑膜细胞迁移和血管形成而参与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管翳形成。CTHRC1主要通过Wnt信号通路发挥其作用。Wnt信号通路在RA滑膜细胞活化、骨吸收和关节破坏中起重要作用。该文就CTHRC1近年来研究进展进行综述。 展开更多

关键词 胶原三螺旋重复蛋白-1 肿瘤 细胞迁移 类风湿性关节炎 血管翳 WNT信号通路

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流感病毒对胶原三股螺旋重复蛋白1表达的影响

9

作者 宋惠 徐凤霞 +2 位作者 张盼 陈飒利 刘兴晖 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期1578-1580,共3页

目的:探讨流感病毒对胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)表达的影响。方法:将流感病毒H3N2感染A549细胞,采用反转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞内CTHRC1 m RNA和蛋白表达的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清和流感患者血清... 目的:探讨流感病毒对胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)表达的影响。方法:将流感病毒H3N2感染A549细胞,采用反转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞内CTHRC1 m RNA和蛋白表达的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清和流感患者血清中CTHRC1的水平,统计学分析其差异。结果:与对照细胞相比,感染H3N2的A549细胞m RNA和蛋白表达水平升高,且流感患者血清中CTHRC1的含量显著高于健康对照(P<0.05)。结论:流感病毒能够促进CTHRC1的合成和分泌。 展开更多

关键词 流感病毒 胶原三股螺旋重复蛋白1 酶联免疫吸附试验 表达

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血清14-3-3η蛋白和胶原三螺旋重复蛋白-1及类风湿因子在类风湿关节炎诊断中的价值 被引量：9

10

作者 刘宇晗 胡廷婷 谭立明 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1081-1085,共5页

目的血清14-3-3η蛋白和胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)参与类风湿关节炎(RA)的发展过程,类风湿因子(RF)是首个应用于诊断RA的血清学指标,对评估RA病情的活动性和监测预后有重要参考价值。文中旨在分析血清14-3-3η蛋白、CTHRC1和RF在RA... 目的血清14-3-3η蛋白和胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)参与类风湿关节炎(RA)的发展过程,类风湿因子(RF)是首个应用于诊断RA的血清学指标,对评估RA病情的活动性和监测预后有重要参考价值。文中旨在分析血清14-3-3η蛋白、CTHRC1和RF在RA患者诊断中的临床应用价值。方法选取2020年2月至2021年2月于南昌大学第二附属医院风湿免疫科确诊的RA患者为RA组(n=153);选取同期本院诊治的非RA患者作为non-RA组(n=116),其中多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)患者41例、骨关节炎(OA)患者43例和强直性脊柱炎(AS)患者32例;选取本院同期健康体检者作为健康对照组(n=64)。采用ELISA法检测血清14-3-3η蛋白和CTHRC1水平,采用速率散射比浊法检测血清RF和CRP水平,分析比较3组研究对象各指标水平并绘制受试者工作曲线(ROC),评估各指标单独或两两联合检测在RA诊断中的价值。结果RA组血清14-3-3η蛋白、CTHRC1和RF水平显著高于non-RA组和健康对照组(P<0.01),且non-RA组中PM/DM、OA和AS患者的14-3-3η蛋白水平高于健康对照组(P<0.01)。当14-3-3η蛋白和CTHRC1的截断值分别为2.54(ng/mL)和244.45(ng/mL)时,其ROC曲线下面积分别为0.844和0.836,对RA有较高的诊断价值。诊断RA灵敏度最高的是CTHRC1(82.35%),特异度最高的是14-3-3η蛋白(89.44%)。阳性预测值、阳性似然比和约登指数也表明14-3-3η蛋白诊断RA的价值较高。串联检测时14-3-3η蛋白与CTHRC1特异度最高(97.36%),并联检测时CTHRC1与RF灵敏度最高(96.66%)。其中14-3-3η蛋白与CTHRC1的约登指数在并联时最高(0.61)。结论14-3-3η蛋白是诊断RA的高特异度指标,CTHRC1及RF可作为RA诊断的灵敏度指标,联合检测可明显提高RA的诊断效能。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 14-3-3η蛋白 胶原三螺旋重复蛋白-1 类风湿因子

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胶原三螺旋重复蛋白-1与类风湿关节炎疾病活动度的相关性分析 被引量：4

11

作者 胡廷婷 刘宇晗 +3 位作者 李旭 李小航 陈四梅 谭立明(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期364-368,共5页

目的:探究类风湿关节炎(RA)患者血清胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)水平与疾病活动度的关系。方法:ELISA检测122例RA患者和61例健康体检者的血清CTHRC1水平。应用DAS28-ESR将RA患者分为非活动性RA组和活动性RA组,Spearman相关系数和二元L... 目的:探究类风湿关节炎(RA)患者血清胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)水平与疾病活动度的关系。方法:ELISA检测122例RA患者和61例健康体检者的血清CTHRC1水平。应用DAS28-ESR将RA患者分为非活动性RA组和活动性RA组,Spearman相关系数和二元Logistic回归分析CTHRC1浓度与RA疾病活动度的相关性。结果:①活动性RA组CTHRC1浓度明显高于非活动性RA组(P<0.001),且与复合疾病活动度评分及大多数指标呈正相关;②血清CTHRC1水平诊断活动性RA组和非活动性RA组的曲线下面积(AUC)为0.843;③二元Logistic回归分析显示CTHRC1是与RA病情严重程度相关的独立危险因素,OR(95%CI)为1.010(1.001~1.012)。结论:RA患者CTHRC1水平显著升高并与疾病活动度相关。因此,CTHRC1可能成为评估RA疾病活动性的一种新型生物标志物。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 胶原三螺旋重复蛋白-1 28关节疾病活动度评分

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胶原三股螺旋重复蛋白1基因真核表达载体的构建及其与microRNA-30b关系初探 被引量：2

12

作者 周辉芳 隗和儒 +5 位作者 马士朝 张超群 王君平 杨新英 谢英 孙殿兴 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期377-380,共4页

目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pC... 目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果 采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功。2 μg和4 μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90%、89%和85%、83%。在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P<0.05)。而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P<0.05)。结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反。 展开更多

关键词 胶原三股螺旋重复蛋白1 质粒 细胞系 肿瘤 微RNAS

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