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鱼类产品中嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增结合CRISPR/Cas12a快速检测及耐药性分析
1
作者
高子惠
曲心平
+7 位作者
凌莉
于海洋
张蕾
胡蝶
吴笛
何雨霏
郑秋月
曹际娟
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024年第11期90-97,共8页
目的建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中...
目的建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中嗜水气单胞菌,并分析其耐药性。方法采用基于最新的CRISPR基因编辑技术建立RPA结合CRISPR/Cas12a新方法,快速检测嗜水气单胞菌,同时采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法比对两种方法的检出率。筛查嗜水气单胞菌分离株的耐药性,采用纸片扩散法测定耐药表型,采用荧光染料(SYBR green,SYBG)实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定耐药基因,分析耐药表型与耐药基因结果的一致性。结果在74例鱼类样品中,基于RPA-CRISPR/Cas12a和LAMP同时检测出6例嗜水气单胞菌。分析耐药性测试结果发现,分离株对5大类10种抗生素的耐药情况差异较大,耐药表型与耐药基因结果一致性较高。结论所建立的RPA-CRISPR/Cas12a方法适用于嗜水气单胞菌快速检测。而细菌耐药性的产生机制比较复杂,耐药表型的产生在一定程度上受耐药基因调控。研究结果为水产品中嗜水气单胞菌快速检测和耐药性筛查提供新思路和方法。
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关键词
嗜水气单胞菌
重组酶聚合酶扩增
簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白
环介导等温扩增
实时荧光定量聚合酶链式反应
耐药表型
耐药基因
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职称材料
嗜热链球菌中CRISPR序列的检测与同源性分析
被引量:
9
2
作者
邓凯波
霍贵成
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期153-157,共5页
为探明内蒙古的8株嗜热链球菌的CRISPR,用PCR方法扩增了其CRISPR序列,并采用生物信息学方法分析和预测了重复序列(direct repeat,DR)的同源性及二级结构。结果表明:除S4只含有一个CRISPR结构外,其余7株嗜热链球菌均检测出3条CRISPR序列...
为探明内蒙古的8株嗜热链球菌的CRISPR,用PCR方法扩增了其CRISPR序列,并采用生物信息学方法分析和预测了重复序列(direct repeat,DR)的同源性及二级结构。结果表明:除S4只含有一个CRISPR结构外,其余7株嗜热链球菌均检测出3条CRISPR序列,远高于CRISPR database公布细菌中具有该结构的比例(46.4%),且分别具特异性的重复序列(DR1~DR3);CRISPR最长达2853bp,最短仅101bp。对DR的二级结构预测发现,DR1~DR3均能形成回文结构,但茎环大小会有差异;在同源性比对中发现,除多数同属或同种外,供试DR还与个别远缘菌种具有高同源性,这种现象证明了供试菌株的CRISPR序列同样存在的水平基因转移,并可能存在其他的进化进程。
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关键词
嗜热链球菌
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats(CRISPR)检测
同源性
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职称材料
乳酸菌CRISPR-Cas系统同源性分析
3
作者
李婉
张丹青
+1 位作者
王娜娜
霍贵成
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期134-140,146,共8页
CRISPR-Cas系统为乳酸菌抵抗噬菌体等外源基因元件提供获得性免疫,利用生物信息学方法分析了CRISPR序列及cas基因在乳酸菌种间的同源性关系。利用生物信息学方法预测NCBI中已测序的部分乳酸菌所含CRISPRCas系统,并对重复序列和Cas蛋白...
CRISPR-Cas系统为乳酸菌抵抗噬菌体等外源基因元件提供获得性免疫,利用生物信息学方法分析了CRISPR序列及cas基因在乳酸菌种间的同源性关系。利用生物信息学方法预测NCBI中已测序的部分乳酸菌所含CRISPRCas系统,并对重复序列和Cas蛋白序列进行系统发生学分析。结果显示,嗜热链球菌、德氏乳杆菌和瑞士乳杆菌标准菌株均含不同数目的 CRISPR-Cas系统,各类型的重复序列高度保守,Cas蛋白序列同源性较高。CRISPR-Cas系统的同源性与其亚型密切相关,而与菌种亲缘关系有较大差异,证明了CRISPR-Cas系统能够通过基因水平转移传播这一结论。
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关键词
乳酸菌
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats(CRISPR)-Cas系统
同源性
重复序列
间隔序列
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职称材料
益生菌遗传育种方法研究进展
4
作者
高娉娉
刘汉清
+3 位作者
张凤
凌新
郭丽琼
林俊芳
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第22期302-310,共9页
益生菌的多样化益生作用使其在人类健康领域发挥着重要作用,基于益生菌生产的药品、食品和膳食补充剂也受到越来越多的关注。目前,研究人员致力于为药品和食品行业选育新型益生菌,以期为食品药品行业的发展提供新的思路。遗传育种为选...
益生菌的多样化益生作用使其在人类健康领域发挥着重要作用,基于益生菌生产的药品、食品和膳食补充剂也受到越来越多的关注。目前,研究人员致力于为药品和食品行业选育新型益生菌,以期为食品药品行业的发展提供新的思路。遗传育种为选育具有有益特性的益生菌菌株提供了一个很好的平台,这对提升益生菌的市场价值和人类健康具有重要意义。为了今后更好的开展益生菌育种工作,该文综述了原生质体融合、基因组重排、常压室温等离子体诱变及基因编辑技术[成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated,CRISPR-Cas)技术和碱基编辑技术]等遗传育种技术的研究现状及在益生菌中的应用,并讨论了遗传育种的安全性,旨在为优良益生菌的选育提供参考,促进益生菌资源的开发和利用。
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关键词
益生菌
原生质体融合
基因组重排
常压室温等离子体
成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白(
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats-associated
CRISPR-Cas)
碱基编辑
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职称材料
题名
鱼类产品中嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增结合CRISPR/Cas12a快速检测及耐药性分析
1
作者
高子惠
曲心平
凌莉
于海洋
张蕾
胡蝶
吴笛
何雨霏
郑秋月
曹际娟
机构
大连民族大学生命科学学院
广州海关技术中心
出处
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024年第11期90-97,共8页
基金
国家重点研发计划项目(2022YFF1100805)
大连民族大学创新创业训练计划项目(202312026111)。
文摘
目的建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中嗜水气单胞菌,并分析其耐药性。方法采用基于最新的CRISPR基因编辑技术建立RPA结合CRISPR/Cas12a新方法,快速检测嗜水气单胞菌,同时采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法比对两种方法的检出率。筛查嗜水气单胞菌分离株的耐药性,采用纸片扩散法测定耐药表型,采用荧光染料(SYBR green,SYBG)实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定耐药基因,分析耐药表型与耐药基因结果的一致性。结果在74例鱼类样品中,基于RPA-CRISPR/Cas12a和LAMP同时检测出6例嗜水气单胞菌。分析耐药性测试结果发现,分离株对5大类10种抗生素的耐药情况差异较大,耐药表型与耐药基因结果一致性较高。结论所建立的RPA-CRISPR/Cas12a方法适用于嗜水气单胞菌快速检测。而细菌耐药性的产生机制比较复杂,耐药表型的产生在一定程度上受耐药基因调控。研究结果为水产品中嗜水气单胞菌快速检测和耐药性筛查提供新思路和方法。
关键词
嗜水气单胞菌
重组酶聚合酶扩增
簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白
环介导等温扩增
实时荧光定量聚合酶链式反应
耐药表型
耐药基因
Keywords
Aeromonas hydrophila
recombinase polymerase amplification
clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protei
loop-mediated isothermal amplification
real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction
drug-resistant phenotype
drug-resistant gene
分类号
TS254.7 [轻工技术与工程—水产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
嗜热链球菌中CRISPR序列的检测与同源性分析
被引量:
9
2
作者
邓凯波
霍贵成
机构
东北农业大学乳品科学教育部重点实验室
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期153-157,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(31171717)
教育部"长江学者和创新团队发展计划"项目(IRT0959)
文摘
为探明内蒙古的8株嗜热链球菌的CRISPR,用PCR方法扩增了其CRISPR序列,并采用生物信息学方法分析和预测了重复序列(direct repeat,DR)的同源性及二级结构。结果表明:除S4只含有一个CRISPR结构外,其余7株嗜热链球菌均检测出3条CRISPR序列,远高于CRISPR database公布细菌中具有该结构的比例(46.4%),且分别具特异性的重复序列(DR1~DR3);CRISPR最长达2853bp,最短仅101bp。对DR的二级结构预测发现,DR1~DR3均能形成回文结构,但茎环大小会有差异;在同源性比对中发现,除多数同属或同种外,供试DR还与个别远缘菌种具有高同源性,这种现象证明了供试菌株的CRISPR序列同样存在的水平基因转移,并可能存在其他的进化进程。
关键词
嗜热链球菌
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats(CRISPR)检测
同源性
Keywords
Streptococcus thermophiles
CRISPR
detection
homology
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
Q939.117 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
乳酸菌CRISPR-Cas系统同源性分析
3
作者
李婉
张丹青
王娜娜
霍贵成
机构
东北农业大学乳品科学教育部重点实验室
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期134-140,146,共8页
基金
国家自然科学基金(31171717)
国家"863计划"(2012AA022108)
文摘
CRISPR-Cas系统为乳酸菌抵抗噬菌体等外源基因元件提供获得性免疫,利用生物信息学方法分析了CRISPR序列及cas基因在乳酸菌种间的同源性关系。利用生物信息学方法预测NCBI中已测序的部分乳酸菌所含CRISPRCas系统,并对重复序列和Cas蛋白序列进行系统发生学分析。结果显示,嗜热链球菌、德氏乳杆菌和瑞士乳杆菌标准菌株均含不同数目的 CRISPR-Cas系统,各类型的重复序列高度保守,Cas蛋白序列同源性较高。CRISPR-Cas系统的同源性与其亚型密切相关,而与菌种亲缘关系有较大差异,证明了CRISPR-Cas系统能够通过基因水平转移传播这一结论。
关键词
乳酸菌
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats(CRISPR)-Cas系统
同源性
重复序列
间隔序列
Keywords
Lactic acid bacteria
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats (CRISPR)
homology repeats
spacers
分类号
TS252.1 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
益生菌遗传育种方法研究进展
4
作者
高娉娉
刘汉清
张凤
凌新
郭丽琼
林俊芳
机构
华南农业大学食品学院
广东省微生态制剂工程技术研究中心
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第22期302-310,共9页
基金
广东省重点领域研发计划项目(2022B0202050002)
国家自然科学基金项目(32272785)。
文摘
益生菌的多样化益生作用使其在人类健康领域发挥着重要作用,基于益生菌生产的药品、食品和膳食补充剂也受到越来越多的关注。目前,研究人员致力于为药品和食品行业选育新型益生菌,以期为食品药品行业的发展提供新的思路。遗传育种为选育具有有益特性的益生菌菌株提供了一个很好的平台,这对提升益生菌的市场价值和人类健康具有重要意义。为了今后更好的开展益生菌育种工作,该文综述了原生质体融合、基因组重排、常压室温等离子体诱变及基因编辑技术[成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated,CRISPR-Cas)技术和碱基编辑技术]等遗传育种技术的研究现状及在益生菌中的应用,并讨论了遗传育种的安全性,旨在为优良益生菌的选育提供参考,促进益生菌资源的开发和利用。
关键词
益生菌
原生质体融合
基因组重排
常压室温等离子体
成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白(
clustered
regularly
interspaced
short
palindromic
repeats-associated
CRISPR-Cas)
碱基编辑
Keywords
probiotics
protoplast fusion
genome shuffling
atmospheric and room temperature plasma
CRISPR-Cas
base editors
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
Q93-3 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鱼类产品中嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增结合CRISPR/Cas12a快速检测及耐药性分析
高子惠
曲心平
凌莉
于海洋
张蕾
胡蝶
吴笛
何雨霏
郑秋月
曹际娟
《食品安全质量检测学报》
CAS
2024
0
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职称材料
2
嗜热链球菌中CRISPR序列的检测与同源性分析
邓凯波
霍贵成
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013
9
在线阅读
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职称材料
3
乳酸菌CRISPR-Cas系统同源性分析
李婉
张丹青
王娜娜
霍贵成
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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职称材料
4
益生菌遗传育种方法研究进展
高娉娉
刘汉清
张凤
凌新
郭丽琼
林俊芳
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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