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Phylogeny and Homologous Recombination Occurring in Classical Swine Fever Viruses
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作者 Jiang Qing-yun Gao Yu +4 位作者 Li Wei-qun Ding Fan Juergen Richt Ren Yu-dong Li Guang-xing 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2019年第3期57-65,共9页
Classical swine fever virus(CSFV) is the causative agent of classical swine fever, a highly contagious disease of pigs. But there is little information on the recombination in natural populations of CSFVs. Therefore, ... Classical swine fever virus(CSFV) is the causative agent of classical swine fever, a highly contagious disease of pigs. But there is little information on the recombination in natural populations of CSFVs. Therefore, a phylogenetic analysis of 62 fulllength genome CSFV strains, isolated from all over the world, was performed to detect potential recombination events, with the recombinant sequences being analyzed with the SimPlot and RDP programs. The results identified a mosaic virus, Chinese CSFV HCLV(2)(AF091507.1), which is the one naturally emerged recombinant CSFV with two recombination breakpoints at 2 484 and 2 900 bp of the genome alignment. Its two putative parental-like strains were CSFV Shimen(AF092448.2) and CSFV strain C/HVRI(AY805221.1). This work demonstrated that homologous recombination did occur in natural CSFV populations. It had significant implications for understanding the molecular epidemiology of CSFV, and revealed that recombination was an important factor for high genetic diversities of CSFV. 展开更多
关键词 classical swine fever virus HOMOLOGOUS recombination PHYLOGENY genetic diversity
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Primary Selection of MicroRNA Acting on Classical Swine Fever Virus in Swine Umbilical Vein Endothelial Cells
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作者 HOU Bo ZHANG Yan-ming NING Peng-bo KANG Kai DENG Li DAI Chen rANG Qing-hai 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第B12期30-33,共4页
The aim of the study was to identify the microRNAs that act on classical swine fever virus (CSFV) in swine umbilical vein endothelial cells (SUVECs). The 3'-and 5'-untranslated regions ( UTR) of CSFV were clon... The aim of the study was to identify the microRNAs that act on classical swine fever virus (CSFV) in swine umbilical vein endothelial cells (SUVECs). The 3'-and 5'-untranslated regions ( UTR) of CSFV were cloned and then inserted into psiCHECH TM-2 plasmids carrying Firefly and Renilla luciferases reporter genes; microRNAs that acted with CSFV were predicted by bio-informatics analysis; then the recombinant plasmids and inhibitors of the predicted microRNA were co-transfected into SUVECs. The activities of Firefly and Renilla luciferases were detected by luminometry. The PCR products of the CSFV 5'-UTR (373 bp) and 3'-UTR (252 bp) were detected by electrophoresis on 1% agarose gels. Four microRNAs (ssc-miR-let7c, ssc-miR-106a, ssc-miR-18, ssc-miR-139) were screened out and evaluated. The CSFV 3'-UTR is the important target site of microRNA in SUVECs. The four microRNAs mentioned above had different inhibitory effects on the CSFV 3'-UTR, of which the ssc-miR-18 played the most important role. 展开更多
关键词 脐静脉内皮细胞 猪瘟病毒 血管内皮细胞 MICRORNA 荧光素酶报告基因 小分子RNA 重组质粒 电泳检测
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CSFV-ASFV-PRRSV多重PCR检测方法的建立
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作者 门旭坤 孙婷婷 +18 位作者 罗画叶 李爽 朱钧锐 蒋霁捷 孙祁 沈伟 张成鑫 陈超 张泽崧 姜志康 柳宇 高飞 李丽薇 刘长龙 周艳君 李国新 童光志 韩先杰 姜一峰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期118-123,共6页
近年来,CSF、ASF、PRRS三种疫病已成为危害我国养猪业的主要疫病,给我国养猪业造成了严重的经济损失。为建立能够同时检测3种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,根据GenBank中经典猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与... 近年来,CSF、ASF、PRRS三种疫病已成为危害我国养猪业的主要疫病,给我国养猪业造成了严重的经济损失。为建立能够同时检测3种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,根据GenBank中经典猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的有关基因序列,设计3对引物分别用于扩增CSFV的E2基因、ASFV的VP73基因和PRRSV的ORF7基因的目的片段,建立了同时检测3种病毒的多重PCR。该多重PCR可同时扩增出937 bp(CSFV)、307 bp(ASFV)、140 bp(PRRSV)的目的条带。多重PCR与单一PCR的符合率为100%。结果表明,该方法可用于这3种病毒的临床快速检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 经典猪瘟病毒 非洲猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重PCR
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1例CSFV、PCV2和PRRSV混合感染的流行病学调查
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作者 王翠 《养殖与饲料》 2025年第8期41-45,共5页
[目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调... [目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调研、临床症状观察及剖解初步判断该商品代育肥猪场感染了猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),实验室荧光RT-PCR/PCR检测该商品代育肥猪感染了PRRSV、PCV2型和猪瘟病毒(CSFV)。发病的主要原因为不规范引种、饲养管理不当、环境卫生差、生物安全管理不到位,采取综合防控措施后猪只死亡率降低至0%,腹泻、喘气、呼吸困难等临床症状缓解,疫情得到有效控制。[结论]猪病防控需加强引种把关、定期监测、疫苗防控及生物安全管理等综合性防控措施。 展开更多
关键词 流行病学调查 混合感染 疫苗防控 猪瘟 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征
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种公猪精液中CSFV、PCV2和PRRSV多重PCR检测方法的建立及应用
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作者 杨程 李文军 +6 位作者 张雪峰 程宁 刘野 王凯月 邵笑 李双玉 孙英峰 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期77-80,共4页
旨在建立可同时检测猪精液中猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重PCR方法。根据GenBank数据库中的CSFV E2基因、PCV2 ORF2基因及PRRSV ORF5基因,设计3对特异性引物,通过优化反应条件和特异性、... 旨在建立可同时检测猪精液中猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重PCR方法。根据GenBank数据库中的CSFV E2基因、PCV2 ORF2基因及PRRSV ORF5基因,设计3对特异性引物,通过优化反应条件和特异性、敏感性检验,建立可同时检测上述3种病原的多重PCR方法,用该方法对30份精液样品进行检测。结果表明,所建立的方法可同时扩增出734 bp(CSFV)、476 bp(PCV2)、305 bp(PRRSV)的目的条带,且对猪的其他病毒(PRV、PEDV、TEGV)扩增结果呈阴性,多重PCR最低检出限1×10^(7) copies/μL,具有良好的特异性和较高的灵敏度。用单一PCR与多重PCR方法对临床样品进行检测,两种方法的检测结果一致,表明该方法可同时对种公猪精液中CSFV、PCV2和PRRSV的检测。 展开更多
关键词 种公猪精液 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 多重PCR
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猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究
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作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页
【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 伪狂犬病病毒(PRV) 重组病毒 E2基因
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2022—2024年西南地区部分规模化猪场健康猪群4种重要疫病的病原学调查与分析
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作者 赵婵娟 鄢行安 曹立亭 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期33-42,共10页
在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)... 在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)和戊型肝炎病毒(HEV)进行调查和分析。在2022—2024年每年3—5月,从西南地区10个区县的47家规模化猪场的健康仔猪群中采集了5 349份全血样本和4 275份鼻拭子样本,通过聚合酶链式反应(PCR)对所有样本进行了PRRSV、PRV、CSFV和HEV检测。结果显示,PRRSV、PRV和CSFV在西南地区已得到有效控制。2022年、2023年和2024年,西南地区临床健康猪群中经典PRRSV(C-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.22%(4/1 811)、0.27%(5/1 831)和0(0/1 707),高致病性PRRSV(HP-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0.16%(3/1 831)和0.18%(3/1 707);PRV的阳性率分别为0.07%(1/1 505)、0.19%(3/1 541)和0(0/1 229);CSFV的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0(0/1 831)和0(0/1 707)。然而,HEV的阳性率呈上升趋势,从2022年的0.11%(2/1 811)、2023年的0.44%(8/1 831)增加到2024年的1.23%(21/1 707)。结果表明,西南地区的规模化猪场已经实现了对PRRSV、PRV和CSFV的有效预防和净化;但在生猪流动性较大的区域,仍能零星监测到相关病毒。与此同时,快速上升的HEV阳性率应引起规模化猪场管理者的高度关注,对HEV的监测和防控需进一步加强。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 伪狂犬病病毒(PRV) 猪瘟病毒(CSFV) 戊型肝炎病毒(HEV) 病原学调查
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云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症(PRDC)患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查 被引量:25
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作者 舒相华 尹革芬 +4 位作者 杨志雷 宋春莲 李文贵 潘伟荣 刘旭川 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-58,共5页
针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型... 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明:各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。 展开更多
关键词 猪呼吸道疾病综合征 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒
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检测CSFV、JEV、PRRSV三种RNA病毒多重RT-PCR方法的建立 被引量:11
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作者 张雪寒 何孔旺 +2 位作者 郭容利 俞正玉 倪艳秀 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期385-388,共4页
猪瘟病毒(CSFV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提。根据GenBank发表序列选取3对引物建立检测CSFV、JEV和PRRSV病毒的多重RT-PCR方... 猪瘟病毒(CSFV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提。根据GenBank发表序列选取3对引物建立检测CSFV、JEV和PRRSV病毒的多重RT-PCR方法,扩增产物分别为508 bp、380 bp、263 bp。经与IDEXX商品化的检测CSW抗原试剂盒比较,二者的符合率为96.7%;扩增JEV和PRRSV PCR产物分别经EcoR V和Sau3A I酶切得到预期的片段。建立的多重RT-PCR检测JEV、PRRSV和CSFV敏感度分别为12.5个TCID_(50)、10个TCID_(50)和10^(-3)ng总RNA。结果表明该多重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床三种病毒核酸的检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 流行性乙型脑类病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重RT-PCR
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PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测方法的建立 被引量:9
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作者 李维华 任慧英 +4 位作者 温建新 韩先杰 刘文华 邹玲 郭龙军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期379-383,共5页
根据GenBank上猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的已发表序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增... 根据GenBank上猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的已发表序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466bp、759bp、349bp、202bp和706bp片段。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,为预防和控制上述几种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪细小病毒 猪伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 复合PCR
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PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR的应用研究 被引量:11
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作者 李维华 任慧英 +3 位作者 刘文华 邹玲 温建新 李海忠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期12-15,共4页
采用建立的PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,对山东省不同地区送检的32份临床疑似病料进行PCR检测。结果表明:32份样品中,PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的阳性率分别为25.00%、0%、34.38%、71.88%和3.13%;共检出25份阳性病料... 采用建立的PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,对山东省不同地区送检的32份临床疑似病料进行PCR检测。结果表明:32份样品中,PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的阳性率分别为25.00%、0%、34.38%、71.88%和3.13%;共检出25份阳性病料,阳性率为78.13%,其中PRV-PRRSV双重感染的比例为31.25%,PCV2-PRV-PRRSV三种病原体混合感染的比例为25.00%;用单项PCR检测作对照,结果两者符合率为100%,表明该复合PCR检测方法具有较高的敏感性,可以作为临床上猪圆环病毒2型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的病原学快速诊断方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪细小病毒 猪伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 复合PCR
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猪瘟病毒E^(rns)结构蛋白鼠源单个B细胞抗体的制备和鉴定
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作者 黄禹丰 吴睿智 +9 位作者 徐璐 邹兴启 车斯琪 李芳韬 夏应菊 赵俊杰 赵启祖 刘业兵 贾伟新 朱元源 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期18-27,共10页
研制猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)结构蛋白单克隆抗体(简称“单抗”),对研究E^(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗,用CSFV E^(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠,通过流式分选技术分选特异性结合E^(... 研制猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)结构蛋白单克隆抗体(简称“单抗”),对研究E^(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗,用CSFV E^(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠,通过流式分选技术分选特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞,利用巢式聚合酶链式反应(PCR)扩增IgG抗体重链和轻链可变区基因,分别构建IgG抗体重链和轻链完整基因重组质粒,然后将重链和轻链重组质粒共转染至人胚胎肾细胞(HEK-293T)中进行单抗表达、纯化,并对单抗进行蛋白免疫印记(WB)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)鉴定。流式分选结果显示,本试验分选得到48个特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞。PCR扩增结果显示,从48个B细胞中扩增得到16对配对的IgG抗体重链和轻链可变区基因。WB、间接ELISA和IFA结果显示,本试验成功制备得到13株能与CSFV发生反应的E^(rns)单抗,其中1株(E0M11)仅与CSFV疫苗毒株(HCLV株、Thiverval株)反应,不与CSFV流行毒株(IVDC-HeB-01、IVDC-HuB-06)和牛流行性腹泻病毒(BVDV)反应。结果表明,本试验建立了快速筛选CSFV单抗的技术平台,制备的单抗有望用于CSFV鉴别诊断方法的建立,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 单克隆抗体 单个B细胞抗体技术 E^(rns)蛋白
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一步法CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR诊断方法的建立与初步应用 被引量:3
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作者 袁秀芳 路斌 +2 位作者 徐丽华 李军星 王一成 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期537-543,共7页
根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条Taq Man探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应... 根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条Taq Man探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应;可以检出20个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)低于4%,方法重复性好。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对50份疑似病例组织进行检测,结果荧光定量RT-PCR检出30份PRRSV阳性,13份CSFV阳性,均高于常规RT-PCR方法的检出数(24份PRRSV阳性,10份CSFV阳性)。本研究建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异性好、灵敏度高的特点,可用于PRRSV和CSFV的实验室快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 双重实时荧光定量RT-PCR
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猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定
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作者 林琪虹 李长尧 +2 位作者 张朝霞 宋厚辉 翁长江 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期179-184,共6页
为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb... 为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb亚类鉴定试剂盒检测结果显示3D5 MAb为IgM型。采用western blot检测制备的3D5 MAb与293T细胞中过表达的E2蛋白及CSFV感染猪肾细胞(PK-15细胞)后(感染后不同时间)天然表达E2蛋白的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测3D5 MAb与PK-15细胞中天然表达E2蛋白的反应性。Western blot结果显示,过表达E2蛋白的293T细胞和感染CSFV的PK-15细胞中(感染后12 h)均出现了40 ku左右的特异性条带。IFA结果显示,感染CSFV的PK-15细胞中出现红色荧光。以上结果表明,制备的3D5 MAb均能够与过表达的和天然表达的E2蛋白有较强的反应性。利用一系列表达截短的重组E2片段,通过western blot鉴定3D5 MAb识别的抗原表位,结果显示,E2蛋白氨基酸序列中的157REKPFPHRMD167为3D5 MAb的抗原表位。本研究首次制备了CSFV E2蛋白的MAb,并对其进行了表位鉴定,为进一步深入研究CSFV E2蛋白的结构、功能、抗原表位的筛选及新疫苗的研制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV多重qRT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 施开创 邹联斌 +4 位作者 胡杰 张步娴 莫胜兰 官家明 陈汉忠 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第3期63-68,共6页
根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具... 根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV。试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重TaqMan荧光定量RT-PCR
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猪非典型瘟病毒、经典猪瘟病毒、日本乙型脑炎病毒的三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 许浩文 陈军光 +6 位作者 马琼琼 潘杏明 郭美君 朱伟群 周莹珊 董婉玉 王晓杜 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期144-151,共8页
猪非典型瘟病毒(APPV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)均属于黄病毒科重要成员,从临床症状难以区分且三者的混合感染。为建立一种能快速鉴别检测APPV、CSFV、JEV的三重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本研究根据APPV 5'UT... 猪非典型瘟病毒(APPV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)均属于黄病毒科重要成员,从临床症状难以区分且三者的混合感染。为建立一种能快速鉴别检测APPV、CSFV、JEV的三重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本研究根据APPV 5'UTR基因、CSFV E2基因和JEV E基因分别设计引物与探针,将公司合成的重组质粒标准品pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E按体积比1:1:1混合后均为(1×10^(8)拷贝/μL)作为模板,经反应条件优化,初步建立同时检测这3种病毒的三重q PCR方法。以本研究构建的APPV慢病毒、CSFV慢病毒、JEV慢病毒,以及猪流感病毒、猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、诺如病毒的基因组为模板,采用建立的该方法检测,评估其特异性,结果显示,该方法仅能检测到APPV、CSFV、JEV的慢病毒,而其他病原检测结果均为阴性。选取1×10^(1)拷贝/μL~1×10^(8)拷贝/μL的混合质粒标准品和1×10^(1)TU/m L~1×10^(6)TU/m L的三种混合慢病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E的检测限均为1×10^(2)拷贝/μL,对3种慢病毒的检测限均为1×10^(2)TU/mL。以1×10~7拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10~3拷贝/μL的质粒标准品混合物作为模板,分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于4.5%。利用本研究建立的三重qPCR和已发表的3种病原的SYBR Green qPCR检测方法对111份临床样品(75份猪肛拭子样品和36份猪组织病料样品)分别检测,结果显示,该三重qPCR方法与已发表的APPV、CSFV、JEV SYBR Green qPCR方法的总符合率分别为99.10%、100%、100%。本研究首次建立的检测APPV、CSFV、JEV的三重TaqMan qPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为三者临床样品的快速鉴别检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 经典猪瘟病毒 日本乙型脑炎病毒 三重荧光定量PCR
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食源性动物组织中CSFV和PRRSV双重双色荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 魏文康 吕殿红 +5 位作者 温肖会 罗胜军 黄忠 周秀蓉 贾春玲 袁洁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期620-624,共5页
为建立同时检检测食源性动物组织中猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病病毒(PRRSV)的双色荧光定量RT-PCR方法。本研究根据SCFV和PRRSV基因序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应的体系和扩增条件,建立了能够检测食源... 为建立同时检检测食源性动物组织中猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病病毒(PRRSV)的双色荧光定量RT-PCR方法。本研究根据SCFV和PRRSV基因序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应的体系和扩增条件,建立了能够检测食源性动物组织中SCFV和PRRSV的双重双色荧光定量PCR的方法。其检测下限为1×102拷贝/μL,而且与其他一些猪病病毒无交叉反应,具有良好的特异性。该方法重复性和稳定性试验表明其组内和组间的变异系数最高分别为4.2和4.5。对比试验表明,该方法对CSFV和PRRSV检验的敏感性为常规RT-PCR方法的200倍;该方法的建立为食源性动物组织中CSFV和PRRSV提供了有效手段,该方法特异性和敏感性较好,能够应用于临床检测。 展开更多
关键词 食源性动物组织 猪瘟病毒 猪蓝耳病病毒 双重双色荧光定量PCR
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GOPC对猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖的影响
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作者 何俊瑶 宋梦昭 +2 位作者 纪甜甜 罗燕 邓文 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期1-5,共5页
旨在探究高尔基体支架蛋白GOPC对猪瘟病毒(CSFV)增殖的影响,为其在CSFV增殖过程中的作用和分子机制研究奠定基础。设计合成3条靶向猪GOPC基因的siRNA,验证对GOPC mRNA的干扰效率。以高效siRNA序列为基础,干扰GOPC在PK-15细胞表达,接毒... 旨在探究高尔基体支架蛋白GOPC对猪瘟病毒(CSFV)增殖的影响,为其在CSFV增殖过程中的作用和分子机制研究奠定基础。设计合成3条靶向猪GOPC基因的siRNA,验证对GOPC mRNA的干扰效率。以高效siRNA序列为基础,干扰GOPC在PK-15细胞表达,接毒后检测GOPC敲低情况下CSFV的增殖状况。同时用RT-qPCR和Western blot分析CSFV感染后PK-15细胞中GOPC的表达情况。结果表明,GOPC敲低的PK-15细胞中CSFV基因组拷贝数显著上升,IFA也检测到GOPC敲低后CSFV E2蛋白表达量显著增高。在CSFV感染PK-15细胞后,随着病毒感染时间的延长,宿主细胞GOPC的表达量出现了下调趋势,但在感染后24 h出现短暂上调。因此,从上述结果可以初步推断GOPC蛋白抑制CSFV的增殖复制,而CSFV则可以通过调节细胞GOPC蛋白表达从而促进自身增殖。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 GOPC蛋白 病毒增殖
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猪瘟病毒E2蛋白纳米颗粒的制备及在家兔上的免疫原性分析
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作者 张晓玲 何兴林 +6 位作者 张梦迪 李鹏飞 孙玉梅 马海龙 朱红梅 张梦佳 李文涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2301-2311,共11页
本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与Sp... 本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与SpyTag融合表达)以及纳米骨架蛋白LS(lumazine synthase-protein A),原核表达系统纯化纳米骨架蛋白mi3(mi3-SpyCatcher),进一步组装成纳米颗粒LS-E2-pFc NP和mi3-E2 NP,并通过透射电镜和动态光散射试验进行鉴定,各组蛋白分别与ISA201佐剂乳化,制备亚单位疫苗。选用1.5~2.0 kg重的日本长耳大白兔35只,随机分为7组,包括空白对照组(n=3)、PBS阴性对照组(n=3)、E2组(n=5)、E2-pFc组(n=5)、LS-E2-pFc NP组(n=5)、mi3-E2 NP组(n=5)和CSFV E2商业化亚单位疫苗组(n=3)。于0、21 d进行肌肉注射免疫,42 d将CSFV C株经耳缘静脉按照100 RID50·只-1进行攻毒,通过阻断ELISA、中和试验、体温监测和RT-qPCR等试验评估兔的特异性抗体水平、中和抗体水平、兔体定型热反应以及脾脏病毒载量。结果显示,各组分蛋白成功表达,纯化后的蛋白条带单一,纯度较高。透射电镜可观察到粒径在10~70 nm的纳米颗粒结构,动态光散射试验观察到mi3-E2平均粒径(68 nm)大于mi3(42.73 nm),LS-E2-pFc平均粒径(42.4 nm)大于LS(13 nm)。免疫试验结果表明,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗均有良好的免疫效果,攻毒前7 d,血清中特异性抗体阻断率均在89%以上,组间差异不显著(P>0.05)。攻毒后,PBS阴性对照组出现典型的兔体定型热反应,其余免疫组的体温变化不明显;攻毒后7 d,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗组的中和抗体效价分别为1∶10392.4、1∶37168.4、1∶75473.6、1∶20201.8、1∶2407,其中,LS-E2-pFc NP组的中和抗体水平最高。RT-qPCR结果显示,E2组有一只兔检出低拷贝的病毒载量,拷贝数为5.83 copies·μL^(-1),其余免疫组未检到病毒载量。以上结果显示LS-E2-pFc NP免疫组效果最好,中和抗体水平最高。这种“标记”疫苗可以对自然感染和免疫接种的动物进行鉴别诊断,有助于猪场净化猪瘟。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2亚单位疫苗 自组装纳米疫苗 中和抗体
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基于重组E^(rns)和E2蛋白的检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA的建立
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作者 向蕊 朱利塞 +3 位作者 赵小刚 应碧云 王贵平 贾爱卿 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期134-140,共7页
本研究利用原核系统表达了猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)和E2串联蛋白,通过切胶纯化的方法得到高纯度的目的蛋白作为包被抗原,经过各反应条件的优化初步建立ELISA方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行检验,与商品化试剂盒以及IFA试验进... 本研究利用原核系统表达了猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)和E2串联蛋白,通过切胶纯化的方法得到高纯度的目的蛋白作为包被抗原,经过各反应条件的优化初步建立ELISA方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行检验,与商品化试剂盒以及IFA试验进行平行比较,评估方法的准确性。结果表明建立了一种特异性强、敏感性好、准确率高且适用于临床猪瘟抗体检测的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 E^(rns)蛋白 串联表达 ELISA
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