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基于荧光蛋白的生物探针设计策略及其应用
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作者 张宁 田烨 《遗传》 北大核心 2025年第7期711-728,共18页
荧光蛋白的发现为细胞生物学研究带来了革命性进展。通过将荧光蛋白与目标蛋白融合,构建荧光生物探针,可以在活细胞和生物体内实时监测细胞事件的动态变化。荧光蛋白的独特理化特性,如光谱范围、发色团成熟速度、pH敏感性和稳定性等,为... 荧光蛋白的发现为细胞生物学研究带来了革命性进展。通过将荧光蛋白与目标蛋白融合,构建荧光生物探针,可以在活细胞和生物体内实时监测细胞事件的动态变化。荧光蛋白的独特理化特性,如光谱范围、发色团成熟速度、pH敏感性和稳定性等,为探针的设计提供了多样化的选择。基于这些特性,研究者开发了用于监测不同分子事件的多种荧光生物探针。本文系统总结了荧光蛋白探针设计的主要策略及其在生物学研究中的典型应用,为开发更高效、更专用的新型荧光生物探针以应对复杂生物学问题提供了参考。 展开更多
关键词 荧光蛋白 荧光生物探针 荧光时钟 循环重排荧光蛋白 双分子荧光互补 二聚化依赖荧光蛋白 荧光共振能量转移 光激活 光转换 光开关
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Mito-cpYFP cDNA转基因小鼠的建立及其自由基分布规律的初步探讨
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作者 戴优 郭静科 +4 位作者 陈琦 刘树滔 周建武 柯李晶 饶平凡 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1648-1652,共5页
目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP... 目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP(mitochondria-targeted cpYFP,mito-cpYFP)的载体pRP(Exp)-CAGG>mitocpYFP注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,采用PCR及RT-PCR的方法鉴定阳性小鼠,通过荧光观察自由基的分布并辅助鉴定阳性小鼠。结果:PCR、RT-PCR及荧光观察结果表明mito-cpYFP cDNA转基因小鼠构建成功。通过与野生型C57BL/6小鼠交配,得到F1、F2和F3代的新生幼鼠共计494只,其中,阳性幼鼠为255只,阳性率为51.6%。转基因阳性鼠体内出现了绿色荧光,其解剖伤口、肠道、脑部及口腔黏膜等荧光明显,而肾脏、肝脏及胸腺等荧光则较弱,耻骨联合部和膀胱出现绿色荧光,但约0.5 h后消失。结论:我们成功制备了可稳定表达并遗传mito-cpYFP的转基因小鼠品系。在活体动物体内,自由基在黏膜层含量较多。此模型可研究自由基在生物体内的含量及分布规律,为后续生物自由基作为信号分子在机体内传导途径的研究提供有效的工具。 展开更多
关键词 转基因小鼠 环状排列黄色荧光蛋白 自由基
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环化荧光蛋白生物探针荧光寿命成像研究进展
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作者 周加胜 王鹏 +2 位作者 周黄梅 许金铭 张三军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期71-80,共10页
环化荧光蛋白探针作为一种新型的基因编码生物探针,是由荧光蛋白和对探测物有特异性响应的结合域蛋白构成的。由于其独特的构造方式使其在对探测物检测时具有较高的灵敏度和较大的动态范围,引起了越来越多科学家的兴趣,已发展成为监测... 环化荧光蛋白探针作为一种新型的基因编码生物探针,是由荧光蛋白和对探测物有特异性响应的结合域蛋白构成的。由于其独特的构造方式使其在对探测物检测时具有较高的灵敏度和较大的动态范围,引起了越来越多科学家的兴趣,已发展成为监测生命活动的一种强有力工具。目前越来越多基于环化荧光蛋白技术开发的生物探针被广泛的应用于生物成像、药物筛选、细胞代谢物检测等领域,并发挥出了越来越大的作用。但是,这类探针目前仍然存在着开发工作量大,部分发光强度较弱及测量方法受限等问题,解决这些问题还需要科学家们不断的努力。对环化荧光蛋白生物探针进行综述,主要介绍了环化荧光蛋白生物探针的设计方法,已有探针的种类和基本性质,现阶段的发展状况以及存在的问题。另外,介绍了多种检测方法在环化荧光蛋白生物探针上面的使用,特别是近期出现的荧光寿命成像技术在其应用上的进展,比较了这些检测方法的优劣,旨在从多方面阐述环化荧光蛋白生物探针的发展现状,以便能给相关研究者提供一些参考和启发。 展开更多
关键词 生物探针 环化荧光蛋白 荧光寿命成像
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蛋白质循环排列与新型生物传感器的开发
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作者 邢一莹 秦晓红 米立志 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1673-1684,共12页
循环排列(circular permutation,CP)是自然界中蛋白质进化中产生的一种氨基酸序列重排现象。重排后的某些突变体仍具有类似该野生型蛋白质的天然构象和活性。生物传感器由分子识别单元和信号报告单元2部分组成,其分子识别单元通过分子... 循环排列(circular permutation,CP)是自然界中蛋白质进化中产生的一种氨基酸序列重排现象。重排后的某些突变体仍具有类似该野生型蛋白质的天然构象和活性。生物传感器由分子识别单元和信号报告单元2部分组成,其分子识别单元通过分子间相互作用,将生物体内的配体、离子浓度变化等微观过程转变成信号报告单元的可量化的可视化信号,从而实现生物学信号感知与检测。目前,蛋白质循环排列被广泛应用到生物传感器的设计中,成为近年来发展最为迅速的生物探针设计方法,已应用于生物分子的特异性识别和生命活动的实时监测,为病理研究、疾病预防和诊断提供了重要的手段。如何运用蛋白质循环排列,开发出新型可靠的生物传感器,是当前生物传感器设计中面临的1个重要科学问题。为此,本文总结并论述了以下3点工作。首先,本文简述了循环排列的发展历史,总结了循环排列的2种形成机制,通过实例详细阐述了循环排列对蛋白质结构的影响。其次,针对循环排列生物传感器的设计,本文主要以循环排列荧光蛋白(circular permutation fluorescent protein,cpFP)为例,总结了分子识别单元和信号报告单元两方面的设计策略,并汇总了循环排列蛋白质相关数据库。最后,本文总结了循环排列蛋白生物传感器的最新研究进展,展望了循环排列未来的发展方向,分析了目前循环排列生物传感器开发过程中存在的问题,以期为新型生物传感器的开发提供借鉴。 展开更多
关键词 循环排列 循环排列荧光蛋白 生物传感器
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