RNA干扰CTSL表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移 被引量：2

1

作者 王素梅 李力 +2 位作者 张玮 黎丹戎 唐步坚 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期525-530,共6页

目的:构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L,CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法:设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL... 目的:构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L,CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法:设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL的表达,筛选沉默效果最好的siRNA序列。设计并合成CTSL-shRNA序列,与psilence4.1-CMV-neo载体连接,构建psilence4.1-CTSL表达载体。psilence4.1-CTSL转染A2780细胞,获得稳定转染克隆A2780-CTSL。RT-PCR和Western blotting验证CTSL基因干扰效果,MTT法和集落形成实验检测A2780细胞的增殖,流式细胞术检测A2780细胞周期,Transwell侵袭小室实验检测A2780细胞体外侵袭和迁移能力。结果:筛选出干扰效果最好的siRNA-CTSL-1202序列,并成功构建相应的CTSL-shRNA表达载体psilence4.1-CTSL。稳定转染psilence4.1-CTSL能沉默A2780细胞中CTSL的表达。沉默CTSL基因后可抑制A2780细胞的侵袭和转移,但不影响A2780细胞的增殖、细胞周期和黏附活性。结论:成功构建CTSL基因siRNA的真核表达载体,RNA干扰CTSL基因表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。 展开更多

关键词 组织蛋白酶l基因(ctsl) SIRNA 卵巢癌 侵袭 转移

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凡纳滨对虾CTSL基因PCR-SSCP多态性与生长性状的关联分析及其mRNA的差异表达 被引量：3

2

作者 钱昭英 李喜莲 +1 位作者 辛静静 刘小林 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期121-127,共7页

利用PCR-SSCP技术对379尾凡纳滨对虾组织蛋白酶Cathepsin L(CTSL)基因多态性进行检测,采用最小二乘法对多态性与生长性状的相关性进行分析;利用Real-time quantitative PCR检测CTSL基因mRNA的差异表达情况。结果表明:引物C6(F/R)扩增片... 利用PCR-SSCP技术对379尾凡纳滨对虾组织蛋白酶Cathepsin L(CTSL)基因多态性进行检测,采用最小二乘法对多态性与生长性状的相关性进行分析;利用Real-time quantitative PCR检测CTSL基因mRNA的差异表达情况。结果表明:引物C6(F/R)扩增片段具有多态性,其扩增产物具有CC、CT和TT 3种基因型,TT基因型与CC基因型相比在第6外显子92bp处发生了C→T的突变,为沉默突变。最小二乘法分析结果表明,在体重、体长、第一腹节长和尾节长这4个指标上CC和CT基因型显著高于突变型TT(p<0.05),而在头胸甲长和头胸甲宽2个指标上,CC基因型显著高于CT和TT基因型(p<0.05)。CTSL基因mRNA在凡纳滨对虾各组织、不同性别个体肌肉组织、极端体重个体肌肉组织中相对表达量大小顺序分别为:肝胰脏>胃>眼柄>心脏>消化腺;雌虾>雄虾;极大个体>极小个体。结论:CTSL基因多态性对凡纳滨对虾生长性状有显著影响,可以作为影响该虾生长性状的候选基因,为该虾的选育提供分子遗传标记;CTSL基因mRNA的分布情况表明此基因可能正向调控对虾生长。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 组织蛋白酶l基因 PCR-SSCP 关联分析 差异表达

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日本血吸虫(中国大陆株)Cathepsin L基因的克隆、表达及其免疫保护功能的研究 被引量：1

3

作者 张慧 苑纯秀 +4 位作者 冯新港 傅志强 刘金明 蔡幼民 林矫矫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期11-15,18,共6页

目的开展日本血吸虫组织蛋白酶L(SjCL)功能研究,为研发血吸虫病抗病疫苗提供基础。方法应用RT-PCR技术分离、克隆日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L保守功能域编码基因,并在大肠杆菌系统中表达,应用免疫亲和层析法纯化组织蛋白酶L重组抗... 目的开展日本血吸虫组织蛋白酶L(SjCL)功能研究,为研发血吸虫病抗病疫苗提供基础。方法应用RT-PCR技术分离、克隆日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L保守功能域编码基因,并在大肠杆菌系统中表达,应用免疫亲和层析法纯化组织蛋白酶L重组抗原,用该基因纯化重组表达产物进行小鼠免疫保护实验。结果获得了672 bp的血吸虫组织蛋白酶L保守功能域cDNA序列,成功构建了原核表达载体pET28a(+)-SjCL,并在大肠杆菌中进行了表达,经免疫亲和层析获得了高纯度的SjCL融合蛋白,以该纯化物免疫小鼠,结果实验组减虫率为36.04%,肝组织减卵率为34%,粪卵减少率达49%,与对照组进行方差分析,差异均显著。结论获得日本血吸虫组织蛋白酶L保守功能域cDNA克隆,其原核表达产物免疫小鼠对抗血吸虫感染具有一定的保护性。 展开更多

关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶l 基因克隆表达 免疫

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基于秀丽隐杆线虫CPL-1-5-HT信号构建双荧光降脂化合物筛选平台 被引量：1

4

作者 林燕 张凯军 +1 位作者 邓羽君 张弦 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第12期1680-1685,共6页

抑制外周组织蛋白酶L相似蛋白(cathepsin L-like protease,CPL-1)活性可以激活中枢神经元血清素(5-HT)信号,降低秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)脂肪沉积。基于上述信号,文章利用23种天然提取物饲养线虫,通过实时荧光定量聚合酶... 抑制外周组织蛋白酶L相似蛋白(cathepsin L-like protease,CPL-1)活性可以激活中枢神经元血清素(5-HT)信号,降低秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)脂肪沉积。基于上述信号,文章利用23种天然提取物饲养线虫,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测发现,多种黄酮类化合物处理显著降低葡萄糖诱导的cpl-1基因表达,并增加tph-1基因表达。利用上述黄酮类化合物处理荧光标记脂滴相关蛋白DHS-3∶∶GFP线虫,检测其脂肪沉积,结果发现,黄酮类化合物均有降低葡萄糖诱导的脂肪沉积作用,提示黄酮类化合物通过CPL-1-5-HT信号调节线虫脂肪沉积。该文利用线虫构建了一种CPL-1∶∶mChOint;TPH-1∶∶GFP双荧光表达模型,用以快速、简便地筛选特定靶向的降脂化合物。 展开更多

关键词 组织蛋白酶l(ctsl) 血清素 脂肪沉积 天然产物 秀丽隐杆线虫

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组织蛋白酶L的结构与功能 被引量：12

5

作者 杨东辉 刘宇 +1 位作者 肖蓉 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1093-1099,共7页

组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,具有非常独特的合成和转运方式.CTSL前体酶原的前体肽含有ERF/WNIN模体和GNFD模体.CTSL的空间结构主要由α螺旋构成的L结构域以及由β折叠构成的R结构域组成.大量... 组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,具有非常独特的合成和转运方式.CTSL前体酶原的前体肽含有ERF/WNIN模体和GNFD模体.CTSL的空间结构主要由α螺旋构成的L结构域以及由β折叠构成的R结构域组成.大量研究工作表明,CTSL在体内生理和病理过程中,以及在寄生动物中都发挥着极其重要的功能.其生理作用广泛涉及到蛋白质水解、抗原提呈、T细胞分选、细胞凋亡以及胚胎发育等方面.CTSL还与多种类型的肿瘤发生、心血管疾病以及肾病等密切相关.另外,CTSL在寄生动物中也发挥着独特的作用.本文针对CTST的最新研究进展做了简要总结及分析,并指出了相关研究的发展趋势. 展开更多

关键词 组织蛋白酶l 前体酶原 生理作用 病理活动 寄生动物

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斑节对虾组织蛋白酶L基因的克隆及其表达分析 被引量：4

6

作者 李运东 周发林 +6 位作者 黄建华 马振华 杨其彬 邱丽华 傅明骏 陈劲松 江世贵 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期58-66,共9页

通过克隆得到斑节对虾(Penaeus monodon)组织蛋白酶L基因(PmCatL)cDNA全长。该基因序列全长1 850bp,包括1 026 bp的开放阅读框,编码341个氨基酸。预测的PmCatL蛋白由信号肽(Met^1-Ala^(18))、前体域(Val^(19)-Gln^(123))和成熟域(Leu^(1... 通过克隆得到斑节对虾(Penaeus monodon)组织蛋白酶L基因(PmCatL)cDNA全长。该基因序列全长1 850bp,包括1 026 bp的开放阅读框,编码341个氨基酸。预测的PmCatL蛋白由信号肽(Met^1-Ala^(18))、前体域(Val^(19)-Gln^(123))和成熟域(Leu^(124)-Val^(341))三部分构成,存在3个半胱氨酸蛋白酶活性位点(Cys^(148)、His^(287)、Asn^(308))和1个潜在的糖基化位点(Asn^(99))。具有组织蛋白酶L的E^(45)X_3RX_3FX_2NX_3IX_3N^(64)和G^(187)CXGG^(192)保守序列。同源性分析显示,PmCatL氨基酸序列与其他物种相似性为36%~75%。进化树显示PmCatL和罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)亲缘关系最近,并与其他无脊椎动物的组织蛋白酶L聚成一支。表达结果表明,PmCatL基因在肝胰腺、淋巴、肌肉、性腺等被测组织中均有表达,其中淋巴和肝胰腺的表达量较高;PmCatL基因在斑节对虾仔虾时期表达量较高,可能与斑节对虾在这一时期的生长发育相关;PmCatL在卵巢发育的Ⅳ期表达量最高,可能在斑节对虾的卵巢发育中发挥重要作用。 展开更多

关键词 斑节对虾 组织蛋白酶l 基因克隆 序列分析 基因表达 卵巢发育

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三角帆蚌组织蛋白酶L基因的克隆和序列特征与进化分析 被引量：9

7

作者 白志毅 汪桂玲 李家乐 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期104-111,共8页

组织蛋白酶L在多种生理过程中具有重要作用。根据本实验室构建的三角帆蚌(Hyriopsis cummgii)cDNA文库中已标注的EST序列,利用RACE方法克隆了三角帆蚌组织蛋白酶L基因的cDNA全序列(GenBank登录号为HQ610996)。结果表明,该序列全长为1 10... 组织蛋白酶L在多种生理过程中具有重要作用。根据本实验室构建的三角帆蚌(Hyriopsis cummgii)cDNA文库中已标注的EST序列,利用RACE方法克隆了三角帆蚌组织蛋白酶L基因的cDNA全序列(GenBank登录号为HQ610996)。结果表明,该序列全长为1 105 bp,包括24 bp的5′-末端非转录区,1 002 bp的开放阅读框和79 bp的3′-末端非转录区,共编码333个氨基酸,包含1个由20个氨基酸组成的信号肽。推测的三角帆蚌组织蛋白酶L前体肽具有组织蛋白酶前体抑制因子功能结构域,具有组织蛋白酶L家族高度保守结构基序ERFNIN[E-X3-R-X2-(L/V)-F-X3-N-X3-I-X3-N]、GNFD和GCXGG;该蛋白的半胱氨酸类蛋白酶半胱氨酸、组氨酸和天冬氨酸活性位点均高度保守。同源性分析表明,推测的三角帆蚌组织蛋白酶L氨基酸序列与其他贝类高度保守,同源性在60%-74%之间。进化分析显示,三角帆蚌组织蛋白酶L与其他贝类组织蛋白酶L聚为一支,在该支中,三角帆蚌与软体动物淡水螺(R.peregra)的亲缘关系最近。本研究结果为进一步研究三角帆蚌组织蛋白酶L的生理功能提供基础资料。 展开更多

关键词 三角帆蚌 组织蛋白酶l 基因克隆 进化分析

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草地贪夜蛾组织蛋白酶L的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备 被引量：2

8

作者 程杏安 林贤伟 +3 位作者 蒋旭红 刘展眉 钟国华 胡美英 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期410-422,共13页

【目的】克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的组织蛋白酶L(cathepsin L,CatL)基因,分析该基因的序列特征并制备该酶多克隆抗体,为探析其生理功能奠定基础。【方法】根据甜菜夜蛾Spodoptera exigua的组织蛋白酶L基因开放阅读框(ORF)... 【目的】克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的组织蛋白酶L(cathepsin L,CatL)基因,分析该基因的序列特征并制备该酶多克隆抗体,为探析其生理功能奠定基础。【方法】根据甜菜夜蛾Spodoptera exigua的组织蛋白酶L基因开放阅读框(ORF)序列两端直接设计引物克隆草地贪夜蛾组织蛋白酶L基因。利用生物信息学软件分析该基因的序列特征,利用ClustalX2软件进行同源比对和进化分析,利用同源建模预测该酶三维结构。通过原核表达重组蛋白,多次免疫新西兰大白兔制备该酶多克隆抗体。【结果】克隆获得了草地贪夜蛾的组织蛋白酶L基因SfCatL(GenBank登录号:HQ110065),ORF序列长1 035 bp,编码344个氨基酸,预测N-末端含有长度为16个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为36.8 kD,等电点为6.69。SfCatL氨基酸序列与其他13个物种的组织蛋白酶L氨基酸序列比较有53.7%~96.8%的一致性,与甜菜夜蛾组织蛋白酶L氨基酸序列一致性最高,达96.8%。同源建模预测表明,SfCatL折叠成紧密而稳定的元宝状结构,含3个对结构有稳定作用的二硫键,亲水性氨基酸主要包被在蛋白的表面。原核表达、纯化SfCatL蛋白制备抗血清,其效价超过1∶40 000,Western blot鉴定结果表明抗血清与草地贪夜蛾Sf9细胞SfCatL蛋白能够特异性结合。【结论】获得了草地贪夜蛾SfCatL完整ORF序列,分析了其特征,经原核表达、纯化获得高纯度的融合蛋白,成功获得多克隆抗体。本研究为进一步研究该基因的功能并开发组织蛋白酶抑制剂类杀虫剂提供理论依据。 展开更多

关键词 草地贪夜蛾 组织蛋白酶l 基因克隆 原核表达 抗体

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阳离子脂质体介导日本血吸虫组织蛋白酶L1基因的真核表达

9

作者 刘金辉 严涛 +3 位作者 黎帆 余克花 詹希美 易冰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期63-66,共4页

目的真核表达日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)以研究其生物学功能。方法采用阳离子脂质体复合质粒SjCL1/AD1-1 DNA并转染HeLa细胞,通过RT-PCR检测SjCL1基因在HeLa细胞中的转录,SDS-PAGE电泳法分析目的基因的蛋白表达产物,并进一步通过Wes... 目的真核表达日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)以研究其生物学功能。方法采用阳离子脂质体复合质粒SjCL1/AD1-1 DNA并转染HeLa细胞,通过RT-PCR检测SjCL1基因在HeLa细胞中的转录,SDS-PAGE电泳法分析目的基因的蛋白表达产物,并进一步通过Western Blot法证实。结果RT-PCR检测到转染的细胞中有与目的基因相符大小约1000bp转录条带,SDS-PAGE电泳发现表达质粒SjCL1/AD1-1DNA转染的细胞上清液中存在大小约为31kDa的表达蛋白带,Western Blot法证实该表达蛋白产物可和日本血吸虫兔血清发生特异的反应。结论阳离子脂质体将SjCL1/AD1-1转染入HeLa细胞后可特异地表达一个大小约为31kDa的可分泌的日本血吸虫蛋白产物。 展开更多

关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶l 阳离子脂质体 基因转染 基因表达

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家蚕组织蛋白酶L及其特异性抑制剂基因参与微生物诱导蚕体的免疫响应研究 被引量：3

10

作者 刘敏敏 占鹏飞 +4 位作者 黄绍华 周燕燕 费建明 王华兵 徐豫松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期650-657,共8页

给家蚕5龄第3天幼虫分别注射藤黄微球菌(革兰阳性菌)和球孢白僵菌(真菌)进行诱导处理,利用已登录的家蚕组织蛋白酶L基因Bm Cts L(Gen Bank登录号:S77508.1)和Bm Cts L特异性抑制剂基因Bm Cts LI(Gen Bank登录号:AJ131752)的全长序列设... 给家蚕5龄第3天幼虫分别注射藤黄微球菌(革兰阳性菌)和球孢白僵菌(真菌)进行诱导处理,利用已登录的家蚕组织蛋白酶L基因Bm Cts L(Gen Bank登录号:S77508.1)和Bm Cts L特异性抑制剂基因Bm Cts LI(Gen Bank登录号:AJ131752)的全长序列设计引物,实时荧光定量PCR检测微生物入侵后家蚕组织中Bm Cts L和Bm Cts LI基因的时空表达变化及协同反应,分析Bm Cts L酶活性变化与家蚕对微生物入侵免疫响应的相关性。家蚕的血细胞与脂肪体是微生物入侵后Bm Cts L和Bm CtsLI基因出现表达变化的主要组织,其中经藤黄微球菌诱导后,血细胞中的Bm Cts L基因响应最快,且基因mRNA转录水平极显著上调,脂肪体中的Bm Cts LI基因mRNA转录水平也极显著上调。微生物入侵后蚕体组织中Bm Cts L与Bm Cts LI基因的表达变化存在时间差异,其中Bm Cts L基因先于Bm Cts LI基因上调表达,推测Bm Cts LI基因通过对微生物入侵的协同反应调控BmCts L酶活性变化。藤黄微球菌比球孢白僵菌能更快诱导Bm Cts L和Bm Cts LI基因的表达变化;2种微生物诱导下蚕体血细胞中的Bm Cts L酶活性不仅上升快,而且明显高于其他组织。上述结果提示Bm Cts L和Bm Cts LI可能与家蚕的先天免疫相关,并且佐证了家蚕的血细胞在微生物入侵后能比其他组织更快速地产生免疫响应。 展开更多

关键词 家蚕 先天免疫 微生物诱导 组织蛋白酶l 组织蛋白酶l特异性抑制剂 基因表达

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海湾扇贝组织蛋白酶L基因编码区的克隆和分析 被引量：4

11

作者 李娟 李莉 张国范 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期338-343,共6页

通过cDNA末端快速扩增技术(RACE),从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到了组织蛋白酶L基因(AiCL)的编码区全长,为1 095 bp,推测编码364个氨基酸。经比对与分析发现蛋白序列中存在4个组织蛋白酶L活性位点保守氨基酸:Q164,C170,H30... 通过cDNA末端快速扩增技术(RACE),从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到了组织蛋白酶L基因(AiCL)的编码区全长,为1 095 bp,推测编码364个氨基酸。经比对与分析发现蛋白序列中存在4个组织蛋白酶L活性位点保守氨基酸:Q164,C170,H309,N329;6个极为保守的半胱氨酸残基:C167,C201,C210,C243,C302,C351。预测其N端17个氨基酸为信号肽序列,C端ASYPTV可能也是分泌信号。AiCL成熟蛋白分子由219个氨基酸构成,前体肽的切割位点预计在A145和M146之间。序列同源性分析中,AiCL蛋白序列与软体动物同源蛋白最为相似,序列一致性在50%以上,在系统进化树中与其它无脊椎动物组织蛋白酶L聚合到一起。通过SWISS-MODEL构建的AiCL成熟蛋白三维模型表明该蛋白空间结构高度保守。根据其序列特征,推测AiCL可能具有水解多种肌蛋白的活性。 展开更多

关键词 海湾扇贝 组织蛋白酶l基因 克隆 序列分析

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草鱼(Ctenopharyngodon idella)组织蛋白酶L基因克隆及表达特性分析 被引量：1

12

作者 刘益 刘巧林 +3 位作者 陈开健 乔庆 谭素梅 肖调义 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期52-59,共8页

为探究组织蛋白酶L(Cathepsin L,CtsL)是否在草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内发挥免疫功能,根据已构建的草鱼肌肉转录组数据库中unigene序列,采用RACE技术首次克隆得到全长为1 496 bp的草鱼组织蛋白酶L基因(CiCtsL)cDNA序列。序列分... 为探究组织蛋白酶L(Cathepsin L,CtsL)是否在草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内发挥免疫功能,根据已构建的草鱼肌肉转录组数据库中unigene序列,采用RACE技术首次克隆得到全长为1 496 bp的草鱼组织蛋白酶L基因(CiCtsL)cDNA序列。序列分析和同源建模显示该基因编码的蛋白具备组织蛋白酶前体抑制结构域I29和木瓜蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶Pept_C1结构域。系统进化分析表明,CiCtsL与斑马鱼CtsL聚为一支。CiCtsL mRNA在7个组织中均有表达,其中肝脏中的相对表达水平最高。感染GCRV后,CiCtsL在各组织中的表达量显著上调,呈现先上升后下降的趋势。研究表明CiCtsL参与了草鱼抵抗GCRV的免疫应答反应,可在草鱼先天免疫调控中发挥重要作用。 展开更多

关键词 草鱼 组织蛋白酶l 基因克隆 草鱼呼肠孤病毒(Grass CARP reovirus GCRV) 基因表达

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