猪圆环病毒2型、3型和4型检测的三重荧光定量PCR建立及Cap基因变异分析

1

作者 王鑫雨 李佳妮 +6 位作者 薄惠文 马琛琛 武文娟 于永乐 杨海燕 马清霞 张传美 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5789-5800,共12页

旨在建立一种快速简便、可同时检测猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)2型、3型和4型三种病原的三重荧光定量PCR检测方法,并应用建立的方法对临床疑似感染PCV的样本进行PCV2、PCV3及PCV4的检测和分子流行病学分析。根据PCV2及PCV3的Re... 旨在建立一种快速简便、可同时检测猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)2型、3型和4型三种病原的三重荧光定量PCR检测方法,并应用建立的方法对临床疑似感染PCV的样本进行PCV2、PCV3及PCV4的检测和分子流行病学分析。根据PCV2及PCV3的Rep蛋白(replicase protein,Rep)基因序列、PCV4的Cap蛋白(capsid protein,Cap)基因序列,设计合成3对特异性引物和3种不同荧光基团标记的TaqMan探针,进行反应体系和反应条件的优化,构建阳性质粒及标准曲线,评价方法的特异性、敏感性和重复性。结果表明,建立的PCV三重荧光定量PCR检测方法特异性强,不同亚型PCV和常见猪病原体均无交叉反应;检测下限均为1.0×10^(2)copies·μL^(-1),批内和批间变异系数均小于2.0%,重复性良好。对检测为阳性的样品进行Cap蛋白基因序列扩增、克隆和测序,获得41条序列,其中11条PCV2a,8条PCV2b,15条PCV2d及7条PCV3a。34条PCV2 Cap蛋白相似性为96.7%~99.7%,7条PCV3 Cap蛋白相似性为97.2%~99.9%。本试验成功建立了一种PCV三重荧光定量PCR,且可检测出不同基因型的猪圆环病毒的混合感染,PCV2d、PCV3a当前依然为国内优势基因型,为临床PCV的准确诊断提供了更快速更精准的检测方法。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 荧光定量PCR cap基因 遗传进化分析

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鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用 被引量：2

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作者 韩晓语 杨俊杰 +4 位作者 赵洪哲 郭昊 王亚新 温永俊 王凤雪 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期95-101,共7页

为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件... 为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10^(2)~1×10^(7) copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10^(2) copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。 展开更多

关键词 cap基因 鸽圆环病毒 实时定量PCR

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1株猪圆环病毒4型的Cap基因生物信息学分析

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作者 徐国 何小莉 +2 位作者 郑秋燕 张珏 何江 《养殖与饲料》 2024年第12期68-73,共6页

[目的]贵州省某养殖场仔猪疑似感染PCV4,为了解该毒株的分子生物学特征。[方法]从疑似仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中提取核酸,应用PCR方法进行PCV4 Cap基因全长扩增和测序。同时,运用生物信息学软件进行Cap基因和对其编码的氨基... [目的]贵州省某养殖场仔猪疑似感染PCV4,为了解该毒株的分子生物学特征。[方法]从疑似仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中提取核酸,应用PCR方法进行PCV4 Cap基因全长扩增和测序。同时,运用生物信息学软件进行Cap基因和对其编码的氨基进行分析。[结果]所获得的PCV4 Cap核苷酸序列全长为687 bp,通过预测,在转录过程中,其起始密码子和终止密码子对应的DNA序列分别为ATG和TAA;核苷酸与参考毒株的同源性均在96.2%~99.1%,所编码氨基酸的相似性为89.5%~96.1%;ORF2编码的氨基酸变异位点共23个,且变异位点主要集中于115位之后;本试验所收集的19株PCV4 Cap基因系统进化树未呈现出空间和时间上的规律。[结论]在贵州省某养殖场发生断奶疑似仔猪多系统衰竭综合征的病料中检测到PCV4,该毒株的Cap基因与中国江西的JXYC-2021遗传距离较近,且从系统进化树上发现PCV4在全世界的分布无地域性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒4型 ORF2 cap基因 序列分析

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鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

4

作者 王星月 杨志远 +5 位作者 林健 张紫萱 周雨婷 程慧敏 刘月焕 胡格 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期335-342,共8页

为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成... 为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成功建立了荧光定量PCR检测方法。此外,还对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行了全面评估。利用建立的荧光定量PCR方法对华北和西北部分地区147份临床样本进行检测,并对阳性代表样本的Cap全长序列进行遗传演化分析。结果表明,所建立的荧光定量PCR方法在1×10^(4)至1×10^(8)拷贝·μL^(-1)范围内显示出良好的线性关系,最低检测限达到1×10^(1)拷贝·μL^(-1),显著高于传统PCR方法。此方法具有良好的重复性,且不与其他常见鸽病病原产生交叉反应。采用本试验方法检测的147份华北和西北部分地区肉鸽和信鸽临床样本PiCV阳性率为85.0%,阳性样本的Cap全长序列分析及遗传演化分析结果显示,6株分离株相似性在89.8%~97.5%之间,与PiCV HeBeiTS2021株在同一个分支,亲缘关系较近。建立的PiCV荧光定量PCR方法具备灵敏、特异和稳定等优点,可用于PiCV的快速检测,同时流行病学调查结果表明,2022—2023年华北和西北部分地区PiCV感染率较高,为我国PiCV的防控研究提供数据支撑。 展开更多

关键词 鸽圆环病毒 cap基因 荧光定量PCR 分子流行病学 遗传演化分析

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基于基因重测序信息的大豆基因靶向CAPS标记开发 被引量：7

5

作者 束永俊 李勇 +3 位作者 柏锡 才华 纪巍 朱延明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2015-2021,共7页

为了开发大豆基因靶向的功能分子标记,本研究采用生物信息学方法分析了大豆基因重测序数据,筛选出酶切位点突变的SNP位点,设计PCR引物163对,选用东北地区主栽品种绥农14的DNA为模板进行PCR扩增,其中139对引物获得大小为400～1200bp的特... 为了开发大豆基因靶向的功能分子标记,本研究采用生物信息学方法分析了大豆基因重测序数据,筛选出酶切位点突变的SNP位点,设计PCR引物163对,选用东北地区主栽品种绥农14的DNA为模板进行PCR扩增,其中139对引物获得大小为400～1200bp的特异片段。以大豆绥农14、合丰25、Acher、Evans、Peking、PI209332、固新野生大豆、科丰1号和南农1138-2的DNA为模板,采用筛选的139对引物进行PCR扩增,对扩增产物进行酶切分析,发现73对引物的PCR产物具有酶切多态性,开发出CAPS标记73个。通过功能注释分析发现,这73个CAPS标记靶向的基因主要参与细胞内亚细胞定位过程、蛋白质的结合与催化以及代谢过程等,与大豆重要农艺性状的形成相关,可以用于大豆品种的鉴定和分子系统进化的研究。 展开更多

关键词 大豆 重测序数据 单核苷酸多态性 酶切扩增多态性序列 基因靶向功能标记

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猪Ⅱ型圆环病毒Cap基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量：6

6

作者 马友记 柳纪省 +3 位作者 赵兴绪 李志勇 殷相平 李宝玉 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第6期713-717,共5页

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV／Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架... 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV／Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-Cap。为进一步研究PCV2腺病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪Ⅱ型圆环病毒 cap基因 重组腺病毒 同源重组

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猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立与Cap基因序列分析 被引量：5

7

作者 朱小甫 吴旭锦 +3 位作者 熊忙利 张文娟 尹宝英 邢蕾 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期84-90,共7页

建立一种检测PCV3流行毒株感染的PCR方法,并分析Cap基因序列变异情况,为PCV3流行病学调查提供技术支持。根据GenBank中公开的PCV3全基因序列,分别设计了质粒构建引物和检测引物,通过构建阳性质粒、灵敏度试验、特异性试验、临床样品检... 建立一种检测PCV3流行毒株感染的PCR方法,并分析Cap基因序列变异情况,为PCV3流行病学调查提供技术支持。根据GenBank中公开的PCV3全基因序列,分别设计了质粒构建引物和检测引物,通过构建阳性质粒、灵敏度试验、特异性试验、临床样品检测试验以及测序分析,建立PCR检测方法。结果显示:建立的PCR方法检测的极限为50 copies/μL,以PRRSV、CSFV、PEDV、PRV、PPV、PCV-2的cDNA/DNA作为模板,用该方法扩增结果均为阴性,表明建立的方法特异性良好;应用该方法检测了285份样品,阳性39份,阳性率为13.7%。Cap基因序列分析显示,20株比对序列核苷酸同源性为87.1%~100%,SXSL1702与SXXA1812同源性为87.1%,在基因进化树中SXSL1702单独构成一个分支,提示SXSL1702株Cap基因与其他毒株有较大差异。成功建立了检测PCV3感染的PCR方法,为进一步流行病学调查和生物学特性研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 PCR检测方法 流行病学 cap基因 序列分析

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鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：4

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作者 张兴晓 邹金峰 +4 位作者 相琪旺 王鑫 陈琳 谢之景 姜世金 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期7-11,共5页

通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表... 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 cap基因 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 IFA

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猪圆环病毒2型Cap全基因的克隆与原核表达 被引量：7

9

作者 李海花 覃尧 +1 位作者 张全红 李秀丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期337-341,共5页

Cap蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的主要结构蛋白,能诱导免疫保护,是临床上利用血清学诊断PCV2的主要依据。本研究根据PCV2TJ株全基因核苷酸序列(GenBank登录号:KC751546)设计特异性引物,利用PCR从PCV2TJ株扩增... Cap蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的主要结构蛋白,能诱导免疫保护,是临床上利用血清学诊断PCV2的主要依据。本研究根据PCV2TJ株全基因核苷酸序列(GenBank登录号:KC751546)设计特异性引物,利用PCR从PCV2TJ株扩增获得Cap全基因,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET32a-Cap,经IPTG诱导获得约48ku的重组融合蛋白,Western blotting分析结果表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体和PCV2阳性猪血清均呈阳性反应。本研究成功克隆Cap全基因,构建原核表达载体,并实现Cap融合蛋白的表达,这为PCV2Cap蛋白的功能研究及诊断方法的建立和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 cap基因 克隆 原核表达

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猪圆环病毒3型陕西株Cap基因的克隆、序列分析及原核表达 被引量：3

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作者 苏战强 苏红 +5 位作者 尹峥 王理想 刘刚 许信刚 周宏超 张琪 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期7-10,共4页

为了克隆猪圆环病毒3型Cap基因并进行序列分析和原核表达,参考GenBank上已发表的PCV3(KY418606.1)Cap基因序列,合成1对上、下游引物,PCR扩增Cap基因,进行序列分析和原核表达。结果显示,成功克隆到642 bp的Cap基因,核苷酸序列分析显示,PC... 为了克隆猪圆环病毒3型Cap基因并进行序列分析和原核表达,参考GenBank上已发表的PCV3(KY418606.1)Cap基因序列,合成1对上、下游引物,PCR扩增Cap基因,进行序列分析和原核表达。结果显示,成功克隆到642 bp的Cap基因,核苷酸序列分析显示,PCV3 Cap基因与国内分离株核苷酸同源性最高为95.97%,氨基酸分析显示Cap蛋白不含信号肽和跨膜区。经IPTG诱导后获得了分子质量约35 ku的Cap蛋白,该蛋白能与PCV3阳性血清结合,具备良好的抗原性。成功克隆并原核表达PCV3陕西株Cap基因,为进一步建立PCV3的快速检测方法和研制PCV3亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 cap基因 序列分析 原核表达

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2017年-2019年郑州地区猪圆环病毒3型分子流行病学调查及Cap基因序列分析 被引量：11

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作者 刘燕 朱金凤 《动物医学进展》 北大核心 2022年第1期127-130,共4页

为了分析2017年-2019年郑州地区猪场中猪圆环病毒3型(PCV-3)分子流行情况及代表株Cap基因序列遗传情况,采集郑州地区规模化猪场、散养猪场中患病猪的淋巴结、脾脏、肾脏及血清样品1175份,采用PCR进行PCV3检测,并选择代表株的Cap基因进行... 为了分析2017年-2019年郑州地区猪场中猪圆环病毒3型(PCV-3)分子流行情况及代表株Cap基因序列遗传情况,采集郑州地区规模化猪场、散养猪场中患病猪的淋巴结、脾脏、肾脏及血清样品1175份,采用PCR进行PCV3检测,并选择代表株的Cap基因进行PCR检测与分析其遗传变异情况。结果表明,2017年-2019年郑州地区猪场PCV3总阳性率为14.6%,2019年阳性率最高(19.5%),呈现逐年升高的趋势;8个代表株PCV3 Cap基因序列与GenBank登录的12株参考株的同源性在92.%~100%之间;系统进化树表明7个代表株PCV3的Cap基因序列与12株参考株位于一个大的分支,另外1株单独构成一个分支,8个代表株PCV3 Cap基因个别碱基发生变化,未出现明显的遗传变异情况。研究结果为该地区猪场中PCV3流行病学调查及综合防控提供科学依据。 展开更多

关键词 猪 猪圆环病毒3型 分子流行病学 cap基因 遗传变异

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番茄叶霉病高抗基因Cf-9的CAPS标记创建 被引量：4

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作者 陈丽静 李天来 +4 位作者 李君明 宋燕 王玉昆 王孝宣 徐合金 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期21-24,共4页

根据番茄叶霉病高抗基因Cf-9的基因序列设计3对特异扩增引物,以近等基因系和本组的多重PCR检测材料为试材,扩增Cf-9基因1～2867 bp之间的单拷贝片段,3对引物分别扩增出560 bp,1 000 bp,1 080 bp的特异片段.分别用限制性内切酶TaqⅠ,Hind... 根据番茄叶霉病高抗基因Cf-9的基因序列设计3对特异扩增引物,以近等基因系和本组的多重PCR检测材料为试材,扩增Cf-9基因1～2867 bp之间的单拷贝片段,3对引物分别扩增出560 bp,1 000 bp,1 080 bp的特异片段.分别用限制性内切酶TaqⅠ,Hind Ⅲ,HinfⅠ,EcorⅠ酶切,限制性内切酶TaqⅠ酶切特异引物SCAR1扩增的560特异片段具有酶切多态性,抗病品种酶切出450 bp,330 bp,290 bp的特异片段,感病品种酶切出450 bp,290 bp的特异片段.初步建成番茄叶霉病高抗基因Cf-9的CAPS标记,经近等基因系及其杂交种检验,结果稳定可靠,可用于番茄Cf-9抗病基因辅助选育. 展开更多

关键词 番茄 叶霉病 Cf-9基因 capS标记

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猪圆环病毒2型Cap基因的克隆与原核表达 被引量：7

13

作者 杨克礼 时代 +7 位作者 段正赢 田永祥 周丹娜 郭锐 刘泽文 袁芳艳 刘威 孟丽 《江西农业学报》 CAS 2017年第1期96-101,共6页

利用PCV2鄂州株的基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入Sac I和Hind III酶切位点,扩增出PCV2鄂州株的ORF2基因;将该片段克隆至p ET-28a原核表达载体,经PCR、酶切鉴定,成功构建了阳性重组表达质粒p ET-ORF2。将其转入大肠杆... 利用PCV2鄂州株的基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入Sac I和Hind III酶切位点,扩增出PCV2鄂州株的ORF2基因;将该片段克隆至p ET-28a原核表达载体,经PCR、酶切鉴定,成功构建了阳性重组表达质粒p ET-ORF2。将其转入大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析确定重组蛋白大小为34.5 k D,主要以包涵体的形式表达。优化后确定最佳诱导条件为:37℃,至OD值0.4~0.6时加入终浓度为1 mmol/L的IPTG,诱导5 h。表达产物经His-tag镍柱纯化后进行Western-blot分析,结果表明表达的重组蛋白能够与PCV2标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 cap基因 克隆 原核表达

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结球甘蓝BoCBF1与BoCBF2基因的CAPS标记及其对耐寒性的影响 被引量：4

14

作者 靳哲 张扬勇 +5 位作者 方智远 刘玉梅 杨丽梅 庄木 刘基生 孙培田 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第07X期23-30,共8页

以两份具有不同耐寒性的甘蓝自交系341和21-3为试材,根据已有拟南芥CBF1基因序列及甘蓝基因组测序拼接出的Scaffold信息,获得了甘蓝BoCBF1和BoCBF2基因编码区的全长序列。经PCR产物直接测序发现BoCBF1基因在自交系341和21-3间的变异表现... 以两份具有不同耐寒性的甘蓝自交系341和21-3为试材,根据已有拟南芥CBF1基因序列及甘蓝基因组测序拼接出的Scaffold信息,获得了甘蓝BoCBF1和BoCBF2基因编码区的全长序列。经PCR产物直接测序发现BoCBF1基因在自交系341和21-3间的变异表现为4个单核苷酸多态性(SNP),而BoCBF2基因则表现为16个SNP及1个18bp碱基的插入缺失(InDel)。为简便快捷地鉴定两个自交系间BoCBF1和BoCBF2基因序列的变异,开发了BoCBF1和BoCBF2基因的CAPS标记,分别命名为BoCBF1-TaqαⅠ和BoCBF2-BstUⅠ。利用这两个CAPS标记对两个自交系、F1、F2群体的基因型与耐寒性进行相关性分析,发现这两个基因的变异与材料的耐寒性极显著相关,可用该标记进行甘蓝耐寒育种的分子标记辅助选择。 展开更多

关键词 结球甘蓝 BoCBF1基因 BoCBF2基因 capS标记 耐寒性

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番茄抗晚疫病基因ph-3的RAPD及CAPS标记 被引量：8

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作者 吴媛媛 李海涛 +3 位作者 张子君 邹庆道 吕书文 杨国栋 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期716-719,共4页

将番茄抗晚疫病ph-3基因已有的RAPD特异片段进行克隆、测序。根据该测序结果设计SCAR引物对抗病亲本、感病亲本、抗病池、感病池、F1个体进行扩增,均获得一条592bp的特异片段。感病基因型和杂合抗病基因型存在XbaⅠ酶切位点,酶切后分别... 将番茄抗晚疫病ph-3基因已有的RAPD特异片段进行克隆、测序。根据该测序结果设计SCAR引物对抗病亲本、感病亲本、抗病池、感病池、F1个体进行扩增,均获得一条592bp的特异片段。感病基因型和杂合抗病基因型存在XbaⅠ酶切位点,酶切后分别产生了261bp、193bp和95bp以及592bp、261bp、193bp和95bp的特异性片段,纯合抗病基因型无此酶切位点,酶切结果仍为592bp的产物。这些片段能成功区分抗病材料、感病材料和F1个体,很有可能是与ph-3基因连锁的CAPS标记。 展开更多

关键词 番茄 晚疫病 ph-3基因 capS标记

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粗穗披碱草1H^tS染色体的蛋白质二硫键异构酶基因CAPS标记 被引量：4

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作者 宫文萍 刘成 +2 位作者 李光蓉 周建平 杨足君 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期409-415,共7页

中国春-粗穗披碱草罗伯逊1Ht S.1BL易位系高抗小麦条锈病、叶锈病和白粉病。为了获得抗病小片段易位系,用中国春ph1b基因缺失突变体对1Ht S.1BL进行了诱导,获得了大量诱导后代。本研究用位于小麦1DS染色体的87个EST-STS标记对中国春、... 中国春-粗穗披碱草罗伯逊1Ht S.1BL易位系高抗小麦条锈病、叶锈病和白粉病。为了获得抗病小片段易位系,用中国春ph1b基因缺失突变体对1Ht S.1BL进行了诱导,获得了大量诱导后代。本研究用位于小麦1DS染色体的87个EST-STS标记对中国春、粗穗披碱草和1Ht S.1BL易位系进行分析,未发现多态性标记。对其中扩增较好的引物BE444859的PCR产物进行随机克隆测序,获得了14个序列,与已发表的小麦蛋白质二硫键异构酶基因序列具有97%以上的同源性,14个序列均包含3个外显子和2个内含子。限制性酶切位点分析表明,仅2个序列含有HaeIII酶切位点。验证实验结果表明,BE444859/HaeIII组合可以在供试材料中获得多态性。进而用BE444859/HaeIII对一套中国春-粗穗披碱草附加系和151株诱导后代材料进行分析,结果显示,特异多态性条带仅出现在含1Ht S的材料中;68株后代材料均可扩增出多态性带。因此,BE444859/HaeIII可以作为粗穗披碱草蛋白质二硫键异构酶基因CAPS标记,用于检测小麦背景中的1Ht S染色体。本研究揭示当杂交亲本间无直接PCR多态性而又需要建立标记时,发展CAPS标记是行之有效的方法。 展开更多

关键词 粗穗披碱草 分子标记 蛋白质二硫键异构酶基因

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水稻孕穗期耐冷基因的CAPs标记辅助选择 被引量：11

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作者 刘之熙 刘云开 詹庆才 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期127-131,共5页

以孕穗期耐冷性极强的北海PL5为供体亲本,与综合农艺性状优良,但孕穗期不耐冷的晚稻品种湘晚籼29号、湘晚籼31号及台中101号杂交,在F3代进行了CAPs标记辅助选择.从3个F3群体中,分别选出携带纯合耐冷基因的个体4,2,6株,作为改良晚籼稻孕... 以孕穗期耐冷性极强的北海PL5为供体亲本,与综合农艺性状优良,但孕穗期不耐冷的晚稻品种湘晚籼29号、湘晚籼31号及台中101号杂交,在F3代进行了CAPs标记辅助选择.从3个F3群体中,分别选出携带纯合耐冷基因的个体4,2,6株,作为改良晚籼稻孕穗期耐冷性的重要中间材料,同时建立了简便、快速、准确的CAPs标记分析配套方法. 展开更多

关键词 水稻 孕穗期耐冷基因 capS 标记辅助选择

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猪圆环病毒Cap基因重组质粒的构建及对小鼠免疫效果研究

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作者 刘自立 张志 +5 位作者 吴发兴 刘爽 董雅琴 邵卫星 段纲 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期37-41,共5页

用PCR方法扩增出猪圆环病毒2型的Cap基因,将1个Cap基因、2个串联Cap基因和3个串联Cap基因定向克隆于真核表达载体pcDNA4-His/Max,构建真核表达载体pcDNA4-His/Max-Cap、pcDNA4-His/Max-2Cap和pcDNA4-His/Max-3Cap。将构建好的重组质粒以... 用PCR方法扩增出猪圆环病毒2型的Cap基因,将1个Cap基因、2个串联Cap基因和3个串联Cap基因定向克隆于真核表达载体pcDNA4-His/Max,构建真核表达载体pcDNA4-His/Max-Cap、pcDNA4-His/Max-2Cap和pcDNA4-His/Max-3Cap。将构建好的重组质粒以100μg/只腿部肌肉注射昆明小鼠,同时设置pcDNA4-His/Max和生理盐水对照,于首免后14d、28d再次免疫,并分别于首免后7、14、28、35、49d用ELISA方法检测小鼠抗体水平,对不同串联重组质粒免疫原性进行初步评价。结果显示,重组质粒于35d能诱导小鼠产生较高的体液免疫,2个Cap和3个Cap串联基因的免疫效果远远高于1个Cap基因的免疫效果,差异极显著(P<0.01)。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 cap基因 核酸疫苗

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介导分泌表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建 被引量：2

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作者 张春雷 靳立明 +5 位作者 叶昱 张杰 朱俊 高又文 廖明 樊惠英 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期564-568,共5页

应用杆状病毒表达系统,将猪圆环病毒2型ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMDual pH启动子控制下的多克隆位点,引入EGT信号肽取代ORF2原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以便于后期的纯化.将构建质粒转... 应用杆状病毒表达系统,将猪圆环病毒2型ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMDual pH启动子控制下的多克隆位点,引入EGT信号肽取代ORF2原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以便于后期的纯化.将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体,提取重组Bacmid质粒.将阳性重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞,72 h收集培养上清液获得重组杆状病毒.间接免疫荧光试验和Westernblot表明,该重组杆状病毒可以在昆虫细胞实现猪圆环病毒2型Cap蛋白的分泌表达. 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 EGT信号肽 cap蛋白 重组杆状病毒

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烟粉虱Q与B隐种mtCOI基因的遗传变异及其对利用CAPS标记进行隐种鉴别的影响 被引量：5

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作者 刘国霞 高长生 +1 位作者 付海滨 褚栋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1238-1244,共7页

【目的】为了评估Vsp I,Sty I和Stu I为基础的线粒体细胞色素氧化酶I基因(mt COI)酶切扩增多态性序列(cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)标记方法鉴别烟粉虱Q与B隐种的有效性。【方法】本研究对国内外烟粉虱种群的mt COI基... 【目的】为了评估Vsp I,Sty I和Stu I为基础的线粒体细胞色素氧化酶I基因(mt COI)酶切扩增多态性序列(cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)标记方法鉴别烟粉虱Q与B隐种的有效性。【方法】本研究对国内外烟粉虱种群的mt COI基因进行了测序并鉴定了其隐种;在对464个Q隐种、98个B隐种mt COI序列分析的基础上,利用Vsp I,Sty I和Stu I对Q与B隐种分别进行了CAPS标记验证。检索并比对了Gen Bank中烟粉虱Q与B隐种mt COI序列中Vsp I,Sty I和Stu I酶切位点分布情况。【结果】对国内外烟粉虱种群研究发现,以Vsp I为基础的CAPS标记方法能够有效鉴别实验中的Q与B隐种;利用Stu I或Sty I的CAPS标记方法无法有效鉴别Q与B隐种。对Gen Bank中烟粉虱Q与B隐种mt COI序列比对发现,利用Vsp I,Sty I和Stu I为基础的CAPS标记方法不能有效鉴别Q与B隐种。【结论】以Vsp I,Sty I和Stu I为基础的CAPS标记方法鉴别Q与B隐种方面均有一定的局限性。 展开更多

关键词 烟粉虱 隐种 mtCOI基因 酶切扩增多态性序列(capS) 隐种鉴定

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