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PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定被引量：8: 1; 作者李珣陈思宇 +1 位作者胡传活王晓晔《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期726-730,共5页; 【目的】构建PK-15细胞酵母双杂交三框eDNA文库，为深入研究猪伪狂犬病病毒（PRV）与宿主细胞间的相互作用机制打下基础。【方法】提取PK-15细胞总RNA，采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA（dscDNA），并对其进行均一化和SfiI酶切处... 展开更多; 关键词 PK-15细胞酵母双杂交三框cdna文库均一化猪伪狂犬病病毒(PRV); 在线阅读下载PDF 职称材料

鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA表达文库的构建被引量：1: 2; 作者高玉龙刘伟 +4 位作者高宏雷邓小芸李铁强王笑梅沈荣显《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期10-13,共4页; 分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105CFU/mL、1×105... 展开更多; 关键词三框cdna文库 cdna表达文库法氏囊 B淋巴细胞传染性法氏囊病毒(IBDV); 在线阅读下载PDF 职称材料

硼毒害柑橘酵母单杂交文库构建及MIR397上游调控因子筛选: 3; 作者黄镜浩林雄杰 +4 位作者陈木兰饶文华和静怡高芳銮范国成《福建农业学报》北大核心 2025年第3期225-233,共9页; 【目的】以柑橘硼毒害响应关键基因MIR397为切入点筛选上游调控因子,以期为柑橘响应硼毒害的分子网络研究和定向品种改良提供理论参考。【方法】以雪柑(Citrus sinensis)和酸柚(C. grandis)为材料,采用SMART技术构建硼毒害处理叶片的均... 展开更多; 关键词柑橘硼毒害 cdna三框文库启动子调控因子; 在线阅读下载PDF 职称材料

梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库构建及互作蛋白的筛选被引量：1: 4; 作者赛静忆温玥 +1 位作者郝志超田嘉《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1877-1888,共12页; 【目的】筛选与FWL1互作的蛋白,为研究FWL1基因调节果实大小机理提供依据。【方法】以杜梨、库尔勒香梨、鸭梨、早美香为材料,提取4个梨品种果实细胞分裂关键时期的果肉组织混样RNA。构建梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库,并鉴... 展开更多; 关键词梨果实大小 fw2.2 三框cdna文库互作蛋白筛选; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定被引量：8: 1; 作者李珣陈思宇胡传活王晓晔; 机构广西大学动物科学技术学院; 出处《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期726-730,共5页; 基金国家自然科学基金项目(31502079 31402151) +1 种基金 2015GXNSFBA139077); 文摘【目的】构建PK-15细胞酵母双杂交三框eDNA文库，为深入研究猪伪狂犬病病毒（PRV）与宿主细胞间的相互作用机制打下基础。【方法】提取PK-15细胞总RNA，采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA（dscDNA），并对其进行均一化和SfiI酶切处理。，处理后的dscDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体，将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库，取三框cDNA初级文库进行混合扩增，通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率，最后收集文库细菌提取文库质粒。【结果】3种读码框cDNA文库的库容量分别为3．0×10^6,2．0×10^6和2．0×10^6CFU，文库实际扩增基数〉150万CFU；一号和三号读码框的基因重组率均为100％，二号读码框的基因重组率大于93％。cDNA文库外源基因插入片段长度在500～3000bp。cDNA文库质粒浓度约1．0mg/mL，质粒收获量约3．0mg。【结论】构建的PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库具有较高的重组率和库容量，符合酵母双杂交筛选要求，可用于研究PRV与PK-15细胞间的相互作用机制。; 关键词 PK-15细胞酵母双杂交三框cdna文库均一化猪伪狂犬病病毒(PRV); Keywords PK-15 cells yeast two hybrid three-frame cdna library normalization pseudorabies virus（PRV）; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA表达文库的构建被引量：1: 2; 作者高玉龙刘伟高宏雷邓小芸李铁强王笑梅沈荣显; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北农业大学; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期10-13,共4页; 基金国家973项目(2005CB523202); 文摘分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,文库总容量分别为1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,平均插入片段分别为1270bp、1190bp和1120bp,阳性重组率均为100%。将3种读码框的cDNA入门文库扩增后提取质粒,取等量的质粒通过LR重组反应将入门文库转换为三框表达文库,经测定平均滴度为1×105CFU/mL,文库总容量为1.2×106CFU,平均插入片段为1017bp,阳性重组率为100%。结果表明所构建的三框cDNA表达文库具有较高的重组率和较大的库容量,为进一步筛选鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)在法氏囊B淋巴细胞中的受体及研究细胞嗜性奠定了基础。; 关键词三框cdna文库 cdna表达文库法氏囊 B淋巴细胞传染性法氏囊病毒(IBDV); Keywords three-frame cdna library cdna expression library the bursa of Fabricius B Lymphoid cells infectious bursaldisease virus （IBDV）; 分类号 S852.659 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名硼毒害柑橘酵母单杂交文库构建及MIR397上游调控因子筛选: 3; 作者黄镜浩林雄杰陈木兰饶文华和静怡高芳銮范国成; 机构福建省农业科学院果树研究所/福建省植物营养与肥料重点实验室三明市农业农村局福建省农业科学院果树研究所福建农林大学植物保护学院; 出处《福建农业学报》北大核心 2025年第3期225-233,共9页; 基金国家自然科学基金面上项目(32472676) 福建省自然科学基金项目(2023J01371) +2 种基金福建科技计划引导性项目(2022N0021)。; 文摘【目的】以柑橘硼毒害响应关键基因MIR397为切入点筛选上游调控因子,以期为柑橘响应硼毒害的分子网络研究和定向品种改良提供理论参考。【方法】以雪柑(Citrus sinensis)和酸柚(C. grandis)为材料,采用SMART技术构建硼毒害处理叶片的均一化酵母单杂交三框cDNA文库,以硼毒害响应关键基因MIR397启动子中的脱落酸响应元件(Abscisic Acid Response Element, ABRE)、胚乳发育元件(General Control Non-repressed Protein 4,GCN4)、 BoxII-like元件(BoxII-likeCis-actingElement,BoxII-like)和乙烯响应元件(EthyleneResponseElement,ERE)为诱饵筛选上游的调控因子。【结果】所建三框文库容量分别为1.5×10^(6)、1.5×10^(6)、1.6×10^(6) CFU,外源基因插入片段长度为500~4 000 bp,重组率为100%,初级文库96克隆测序冗余率为0%;cDNA三框表达文库滴度4×10^(9) CFU·mL^(-1),满足酵母单杂交cDNA文库构建要求。单杂交文库筛选结果获得23条表达序列标签(expressed sequence tag, EST),其中ABRE元件11条、GCN4元件3条、ERE元件9条;60.87%的EST序列与植物的生长发育、逆境响应、信号转导及转录调控相关,17.39%的EST与蛋白质翻译相关,其余被注释的EST为蛋白酶。Y1H点对点验证HAP3、BBX和EIN3与ERE元件存在互作。【结论】本研究通过酵母单杂交文库筛选得到3个与硼毒害响应关键基因MIR397启动子ERE元件存在互作的转录因子,为进一步研究柑橘响应硼毒害的分子网络奠定基础。; 关键词柑橘硼毒害 cdna三框文库启动子调控因子; Keywords Citrus boron toxicity three-frame cdna library promoter regulator; 分类号 S667.9 [农业科学—果树学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库构建及互作蛋白的筛选被引量：1: 4; 作者赛静忆温玥郝志超田嘉; 机构新疆农业大学园艺学院; 出处《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1877-1888,共12页; 基金国家自然科学基金(31760561) 新疆维吾尔自治区园艺重点学科基金(2016-10758-3)。; 文摘【目的】筛选与FWL1互作的蛋白,为研究FWL1基因调节果实大小机理提供依据。【方法】以杜梨、库尔勒香梨、鸭梨、早美香为材料,提取4个梨品种果实细胞分裂关键时期的果肉组织混样RNA。构建梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库,并鉴定文库质量。构建诱饵载体并转化酵母菌,筛选与FWL1互作的蛋白,对初步筛选出的阳性酵母克隆进行测序并在NCBI中进行Blast比对,确定候选互作蛋白。【结果】文库库容约为3×10^(7) CFU,大于1×10^(7) CFU,平均插入片段大于1000 bp,阳性率为≥98%。诱饵载体无自激活功能,利用共转化方法,筛选出272个与FWL1互作的蛋白质。【结论】梨幼果膜系统酵母双杂交三框cDNA文库符合酵母双杂文库的基本条件,适用于后期筛选相互作用的蛋白。筛选出的272个互作蛋白在果实发育过程中表达不同,其中collagen and calcium-binding EGF domain-containing protein 1和metallothionein-like protein可能与梨果实大小发育有关。; 关键词梨果实大小 fw2.2 三框cdna文库互作蛋白筛选; Keywords pear fruit size fruit weight 2.2 construction of three-frame cdna library screening of interacting proteins; 分类号 S661.2 [农业科学—果树学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定	李珣陈思宇胡传活王晓晔	《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	8	在线阅读下载PDF 职称材料
2	鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA表达文库的构建	高玉龙刘伟高宏雷邓小芸李铁强王笑梅沈荣显	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	硼毒害柑橘酵母单杂交文库构建及MIR397上游调控因子筛选	黄镜浩林雄杰陈木兰饶文华和静怡高芳銮范国成	《福建农业学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库构建及互作蛋白的筛选	赛静忆温玥郝志超田嘉	《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料