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北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查 被引量：14
1
作者 张凡 李耘 +1 位作者 甘露 闫梦瑶 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第6期610-620,共11页
目的调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiell... 目的调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48);m CIM和e CIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP,其中64株检出blaKPC-2基因,1株检出blaNDM-1基因,1株检出blaNDM-5基因,检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。m CIM和e CIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型,其中以ST11为主,共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药,对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现,仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上,其他均定位在质粒上,有4株细菌接合成功,其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒,质粒类型为Inc X3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5,下游为bleMBL、trp F、dsb C和IS26。结论北京地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子型别多态性大,同时又存在优势序列型,为ST11型。携带blaKPC-2基因的质粒大小不一,提示其遗传背景可能比较复杂。与blaKPC-2基因不同,对比国内外其他研究发现blaNDM-5基因的遗传背景比较稳定,Inc X3型质粒在介导blaNDM-5基因的传播上发挥着重要作用。 展开更多
关键词 碳青霉烯类抗生素 blakpc-2和blaNDM-5基因 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 细菌耐药
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携带bla_(KPC-2)基因泛耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件分析 被引量：1
2
作者 黄支密 夏守慧 +3 位作者 周芸 杨伟平 李洁 糜祖煌 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期139-143,共5页
目的了解临床分离的携带bla_(KPC-2)型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中可移动遗传元件(mobile genetic elements,MGEs)存在情况。方法在2008年11月至2009年7月从住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌... 目的了解临床分离的携带bla_(KPC-2)型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中可移动遗传元件(mobile genetic elements,MGEs)存在情况。方法在2008年11月至2009年7月从住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,通过分析3种基因gyrA、parC和mdfA序列对菌株进行分子鉴定。采用PCR方法检测4种可移动遗传元件遗传标记基因,分别为:泛宿主性接合性质粒遗传标记trbC、转座子Tn1548遗传标记tnpU、Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1‐sul1和插入序列共同区遗传标记ISCR1基因;对扩增阳性的4种遗传标记基因PCR产物采用双向测序,测序结果用Chromas软件直接作BLAST Search比对分析。结果本组19株gyrA、parC和mdf A基因PCR扩增均阳性,其基因序列经Gen Bank中的BLASTn程序进行同源性比较分析,证实19株均为肺炎克雷伯菌。19株中,4种可移动遗传元件遗传标记trbC、tnpU、qacE△1‐sul1和ISCR1基因阳性率均为100.0%,经对该4种遗传标记基因PCR阳性产物进行测序比对,发现与Gen Bank中已发布的4种相对应基因trbC、tnpU、qacE△1‐sul1和ISCR1序列完全相同(同源性均为100.0%),均得到确认。结论可移动遗传元件在携带bla_(KPC-2)型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中广泛存在。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 blakpc-2 碳青霉烯酶 可移动遗传元件 插入序列共同区 基因 分子鉴定
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耐碳青霉烯黏质沙雷菌对头孢他啶敏感性差异的机制研究
3
作者 张燕 郑洁 +6 位作者 王丹微 孟玲宁 高硕 刘畅 周万青 曹小利 沈瀚 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第7期831-837,共7页
目的分析耐碳青霉烯黏质沙雷菌(carbapenem resistant Serratia marcescens,CRSM)对头孢他啶敏感性差异的机制。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院2018年6月至2019年9月临床分离的CRSM菌株53株,采用Vitek 2.0 Compact配套GN13药敏板... 目的分析耐碳青霉烯黏质沙雷菌(carbapenem resistant Serratia marcescens,CRSM)对头孢他啶敏感性差异的机制。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院2018年6月至2019年9月临床分离的CRSM菌株53株,采用Vitek 2.0 Compact配套GN13药敏板卡和纸片扩散法对头孢他啶进行药物敏感性试验;提取53株CRSM菌株RNA,逆转录后进行荧光定量PCR检测blaKPC-2基因表达量;提取53株CRSM的基因组DNA进行细菌基因组重复序列PCR(repetitive extragenic palindromic elements-PCR,REPPCR),依据REP-PCR的分型结果,挑取6株(其中3株遗传背景完全相同,3株遗传背景完全不同)细菌提取基因组DNA进行全基因组学测序,分析blaKPC-2基因的侧翼序列。结果53株CRSM菌株中有24株对头孢他啶敏感,21株中介,8株耐药;53株CRSM中blaKPC-2基因表达量分析显示,头孢他啶敏感组与耐药组的Ct值、中介组与耐药组的Ct值具有统计学差异(P<0.0001),而敏感组与中介组的Ct值不具有统计学差异(P=0.4116);REP-PCR分型结果显示遗传多样性,以Ⅰ型(27株)和Ⅱ型(11株)最为常见;6株CRSM的全基因组学测序结果显示,这些菌株均携带5种相同耐药基因,分别是aac(6’)-Ic、blaSRT-1、blaKPC-2、blaCTX-M-14和qnrS1;侧翼序列分析显示,这6株细菌blaKPC-2的侧翼序列是相同的。结论本院CRSM菌对CAZ的敏感性差异可能由blaKPC-2的表达差异引起;虽然6株分析细菌中blaKPC-2的侧翼序列结构基本相同,但blaCTX-M的存在及AmpC酶的表达等也可能是CRSM对头孢他啶敏感性差异的原因,应进一步分析。 展开更多
关键词 黏质沙雷菌 碳青霉烯耐药 REP-PCR 荧光定量PCR blakpc-2
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