抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析 被引量：1

1

作者 崔蕴霞 王一飞 +4 位作者 林剑 任哲 银巍 宁波 冯炼强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第7期353-355,共3页

目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法和免疫沉... 目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定，同时，应用分子生物学技术，对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆，并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原。 展开更多

关键词 单克隆抗体 基因克隆 dna序列分析 bfgf抗体

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人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆 被引量：1

2

作者 于凤山 段德义 +2 位作者 孙成三 秦丽华 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期131-134,共4页

为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然... 为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM- 3zf( + )载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果 :RT- PCR扩增到 4 73bp的带有 K ozak序列的 c DN A片段。显示 :克隆到碱性成纤维细胞生长因子 c DN A片段 。 展开更多

关键词 bGFG RT-PCR 序列分析 神经系统疾病 基因克隆

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扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因组DNA的克隆及序列分析 被引量：17

3

作者 林琳 谢必峰 +5 位作者 杨冠珍 施巧琴 林奇英 谢联辉 吴松刚 吴祥甫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期12-16,共5页

扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有重要工业生产价值的碱性脂肪酶(PEL) .在通过 3′RACE和 5′RACE获得PEL完整的cDNA序列的基础上 ,通过PCR方法首次克隆了该脂肪酶的完整的基因组DNA序列 (GenBank登录号为AF330 6 35 ... 扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有重要工业生产价值的碱性脂肪酶(PEL) .在通过 3′RACE和 5′RACE获得PEL完整的cDNA序列的基础上 ,通过PCR方法首次克隆了该脂肪酶的完整的基因组DNA序列 (GenBank登录号为AF330 6 35 ) .该脂肪酶DNA全长 14 0 4bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区DNA由 1135个碱基组成 ,含有 5个内含子 ,大小分别为 5 8bp、4 7bp、5 0bp、5 6bp和 6 9bp .在已报道的丝状真菌脂肪酶中 ,PEL基因的内含子数量最多 ,而其大小与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子一样 ,均为只有几十个碱基的小内含子 .PCR扩增获得的PLEDNA序列还包括由 195个碱基组成的 3′端非编码区序列 ,74个碱基的部分 5′端非编码区序列 .PELDNA全长序列中的 - 2 4至 - 2 7nt为TATAbox ,终止码TGA下游15 6nt出现AATAAA序列 ,TGA下游 182位出现poly(A)尾 ,为典型的真核基因结构 .同源性序列分析表明 ,PEL与其它真菌来源脂肪酶的基因组DNA序列同源性约为 39%～ 4 9% ,PEL内含子之间或PEL内含子与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子之间的序列同源性约 4 2 %～ 5 7% . 展开更多

关键词 扩展青霉 碱性脂肪酶 基因克隆 基因组dna 序列分析

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中华蜜蜂DNA甲基化转移酶Dnmt3基因克隆及表达谱分析 被引量：5

4

作者 刘亭亭 刘俊峰 +4 位作者 王文祥 王欢 王子龙 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期284-290,共7页

为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4... 为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4日龄蛹,1日龄蜂王和产卵蜂王)头部的Dnmt3基因mRNA的表达量。结果表明:该基因cDNA序列全长2277bp,编码758个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为88.24kD,等电点为7.85。将中华蜜蜂与其他物种的Dnmt3基因的结构域进行比对,同时将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的Dnmt3氨基酸序列进行同源性比对和系统发育分析,发现与西方蜜蜂的Dnmt3序列一致性高达99%。该基因在工蜂和蜂王不同发育时期均有表达,1日龄工蜂与7日龄工蜂中没有显著差异(P>0.05),30日龄工蜂中的表达量显著高于前两者(P<0.05);蜂王蛹中的表达量显著高于工蜂蛹(P<0.05);1日龄的蜂王中的表达量显著高于1日龄的工蜂(P<0.05);产卵工蜂与产卵蜂王中的表达量没有差异(P>0.05)。这种表达情况提示其可能与工蜂劳动分工及蜜蜂卵巢发育有关。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 dna甲基化 dna甲基化转移酶 基因克隆 序列分析 表达谱分析

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甜荞胰蛋白酶抑制剂cDNA片段的克隆及序列特征 被引量：3

5

作者 张政 李玉英 +1 位作者 史晓儒 王转花 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期46-51,共6页

采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-R... 采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-RACE等方法,直接体外扩增该抑制剂基因,首次获得总长为361bp的DNA片段 GenBank登录号为AY335158 ,并命名为BTI-W1.该片段包括一个183bp的开放阅读框,编码61个氨基酸.由该基因推导的氨基酸序列与已报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI-2的氨基酸序列的同源性达100%.BTI-W1基因的获得,对于深入开展荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能关系的研究具有重要意义,也为荞麦植物资源的开发利用建立了前期研究基础. 展开更多

关键词 养麦 胰蛋白酶抑制剂 RT-PCR 基因克隆 dna序列分析

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沙田柚无机焦磷酸酶基因的cDNA克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 秦新民 万珊 +2 位作者 李惠敏 覃屏生 张渝 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期842-847,867,共7页

植物自交不亲和性是植物生殖过程中普遍存在的一种现象,是植物特异性识别并拒绝自身花粉或亲缘关系很相近的花粉的一种遗传机制。无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,IPPase)在植物生长发育方面起重要作用。该研究根据沙田柚花柱... 植物自交不亲和性是植物生殖过程中普遍存在的一种现象,是植物特异性识别并拒绝自身花粉或亲缘关系很相近的花粉的一种遗传机制。无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,IPPase)在植物生长发育方面起重要作用。该研究根据沙田柚花柱消减文库中EST序列(无机焦磷酸酶基因内部片段),设计了2对特异引物5'-GSP1,5'-n GSP1,3'-GSP2 and 3'-n GSP2,通过SMART-RACE PCR技术从所构建的沙田柚花柱抑制性消减文库中克隆了沙田柚无机焦磷酸酶基因的c DNA全长序列,利用Blastn、DNAman和Expasy软件对所克隆的基因进行同源性分析,以及基因编码的氨基酸的分子量、等电点、疏水性等理化性质分析。结果表明:IPPase基因c DNA全长为1 136 bp(Gen Bank登录号为KF990474),开放阅读框(ORF)全长为654 bp,共编码217个氨基酸,包括170 bp 5'UTR和312 bp的3'UTR;编码的蛋白质的分子量为24.4 k Da,等电点为5.96;蛋白结构域分析显示沙田柚IPPase与焦磷酸酶具有相同的保守结构域;对沙田柚IPPase蛋白质序列进行疏水性分析,结果表明沙田柚IPPase基因编码的肽链中疏水性最大值约为3.21,最小值约为-2.98,属于亲水性蛋白,无跨膜区域;Blastn搜索的结果显示,沙田柚IPPase基因序列与多种植物的IPP基因高度同源;序列分析表明,沙田柚IPPase基因核苷酸的同源性与毛果杨(Populus trichocarpa)和橡胶树(Hevea brasiliensis)IPPase基因均为87%;氨基酸序列与克莱门柚(Citrus clementina)无机焦磷酸酶完全一致。该研究结果可为深入研究无机焦磷酸酶在沙田柚自交不亲和中的作用机理提供基础。 展开更多

关键词 沙田柚 无机焦磷酸酶 全长c dna 基因克隆 序列分析

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GDNF在人脑胶质瘤细胞中表达的检测及其cDNA的克隆

7

作者 段德义 孙成三 +3 位作者 杨有文 于凤山 张进禄 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期6-10,共5页

为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用... 为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用逆转录 PCR法扩增上述两种长度的 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM-T载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果表明 ,脑胶质瘤细胞中只扩增出 5 5 8bp的胶质细胞源性神经营养因子全长 c DNA片段 ,未见 6 36 bp片段 ;且扩增效率较成熟多肽 c DNA甚低。提示 ,该细胞合成的胶质细胞源性神经营养因子可能还存在不含有信号肽而只能在细胞内潴留的成熟多肽形式。作为自泌性生长因子 ,它可能调节瘤细胞生长等生物学行为 ;同时克隆到的胶质细胞源性神经营养因子全长及其成熟多肽的 c DNA片段 。 展开更多

关键词 胶质细胞源性神经营养因子 基因克隆 RT-PCR dna序列分析 胶质瘤细胞

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斑节对虾金属硫蛋白全基因DNA克隆及生物学信息分析

8

作者 周发林 郑丽明 +3 位作者 杨其彬 黄建华 杨丽诗 江世贵 《湖北农业科学》 2017年第3期575-578,582,共5页

为深入研究斑节对虾(Penaeus monodon)金属硫蛋白MT(Pm-MT)基因参与斑节对虾性腺发育调控的分子机制,根据Pm-MT基因的c DNA序列,利用普通PCR和染色体步移(Genome Walking)技术获得Pm-MT基因的DNA全长序列,该基因序列DNA全长为2 744 bp,... 为深入研究斑节对虾(Penaeus monodon)金属硫蛋白MT(Pm-MT)基因参与斑节对虾性腺发育调控的分子机制,根据Pm-MT基因的c DNA序列,利用普通PCR和染色体步移(Genome Walking)技术获得Pm-MT基因的DNA全长序列,该基因序列DNA全长为2 744 bp,由2个内含子和3个外显子组成。其中启动子区域为806 bp,2个内含子长度分别为1 194、242 bp,3个外显子长度分别为22、78、77 bp。在启动子区域预测到转录因子糖皮质激素应答元件和雌激素应答元件与卵巢发育密切相关。 展开更多

关键词 斑节对虾(Penaeus monodon) 金属硫蛋白 全基因dna克隆 生物信息学分析

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摇蚊基因组DNA提取及CO Ⅰ基因克隆与序列分析 被引量：1

9

作者 校新蕾 李修伟 +3 位作者 梁亚萍 孙青彬 祁之秋 谷祖敏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期143-149,共7页

以羽摇蚊和溪流摇蚊4龄幼虫为材料,分别采用CTAB法、KAc法和SDS-蛋白酶K法提取基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和COⅠ-PCR扩增等检测手段比较分析DNA质量。结果表明,SDS-蛋白酶K法提取的DNA质量优于CTAB法和KAc法,适用于PCR扩增。对... 以羽摇蚊和溪流摇蚊4龄幼虫为材料,分别采用CTAB法、KAc法和SDS-蛋白酶K法提取基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和COⅠ-PCR扩增等检测手段比较分析DNA质量。结果表明,SDS-蛋白酶K法提取的DNA质量优于CTAB法和KAc法,适用于PCR扩增。对2种摇蚊细胞色素氧化酶Ⅰ亚基基因(COⅠ基因)进行克隆、测序(GenBank登录号为KF833366,KF833367和KF833368)和分析。结果显示,凭证标本号为xjq1和xjq2的羽摇蚊和凭证标本号为mnh1的溪流摇蚊的COⅠ基因序列长度分别为654bp、669bp和528bp,GC含量分别为37.3%,37.1%和34.5%。与已报道的摇蚊COⅠ基因序列在片段长度,组成和GC含量上具有一致性。采用NJ法构建的系统发育树清晰地将双翅目长角亚目下摇蚊科、蚊科和瘿蚊科各科昆虫有效分开,这与传统的分类结果高度一致,显示线粒体DNACOⅠ基因可以用于摇蚊昆虫种类的分子鉴定。 展开更多

关键词 羽摇蚊 溪流摇蚊 基因组dna提取 COⅠ基因 克隆 序列分析

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拟南芥Lfy基因的克隆及全序列分析 被引量：6

10

作者 邵寒霜 李继红 +1 位作者 郑学勤 陈守才 《热带作物学报》 CSCD 1998年第2期32-35,共4页

以拟南芥花蕾为材料，对Leafy（简称Lfy）基因进行了克隆和全序列分析。结果表明，该基因全长1263bP，共编码420个氨基酸，与国外已报道的序列相比较，具有99．78％的氨基酸同源性。

关键词 Lfy基因 克隆 序列分析 拟南芥

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蚊防御素基因的克隆及序列分析 被引量：5

11

作者 支国舟 陈晓光 +5 位作者 周晓红 彭鸿娟 林立丰 易建荣 江静娴 张淑萍 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期499-502,共4页

目的克隆我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物,进行PCR和RT-PCR。结果分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中... 目的克隆我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物,进行PCR和RT-PCR。结果分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段,将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较,显示埃及伊蚊和白纹伊蚊的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性,而中华按蚊的扩增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低,且不具备特征性的6 个半胱氨酸序列。结论克隆出埃及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因,蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。 展开更多

关键词 蚊 防御基因 克隆 序列分析

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牛朊蛋白(bPrP^C)基因的克隆和序列分析 被引量：7

12

作者 吴润 谢庆阁 +1 位作者 刘湘涛 陈豪泰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期318-323,共6页

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编... 分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编码区序列,为含单一外显子的完整开放阅读框,与国内外报道的已知序列基本相同。本次所报道的牛PrP(bPrPC)基因含6个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln/Arg或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp/Arg-Gly-Gln。这些bPrPC基因序列相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别在99.0%～100.0%和99.2%～100.0%之间。在整个18个碱基替换中,多数替换是保守的,为同义突变,仅有5个替换引起氨基酸突变,分别为HN200302的W60R、HN200303的S154N、MN200301的A129V、NN200302的Q234R和NN200303的Q94R突变。发现牦牛朊粒基因在126(A→G)、234(G→A)和678(T→C)位的特征性核苷酸替换,但均为同义码替换。 展开更多

关键词 牛 朊蛋白 基因克隆 序列分析 神经变性疾病 疯牛病 朊病毒

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北京长白杂交猪IgGH链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建 被引量：3

13

作者 李新生 高凤山 +4 位作者 李云岗 崔保安 陈红英 崔沛 夏春 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,... 根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%. 展开更多

关键词 猪IgG H链基因 CH2和CH3 基因克隆 dna序列分析 原核表达

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人胸腺素α1原核表达重组体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量：4

14

作者 徐峰 陈智 徐建国 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2001年第2期52-54,58,共4页

目的 :以基因工程方法获得人胸腺素 α1 (Tα1 )多肽产品。方法 :通过 PCR扩增人工合成模板的方法获得人 Tα1基因 ,然后将其克隆入原核细胞表达载体 p GEMEX1 ,用重组体转化大肠杆菌 ,并从 m RNA和蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的... 目的 :以基因工程方法获得人胸腺素 α1 (Tα1 )多肽产品。方法 :通过 PCR扩增人工合成模板的方法获得人 Tα1基因 ,然后将其克隆入原核细胞表达载体 p GEMEX1 ,用重组体转化大肠杆菌 ,并从 m RNA和蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况。结果 :构建了人 Tα1克隆重组体 p UC1 8-Tα1 ,经序列分析证实对码、序列无误 ;成功构建了人 Tα1原核细胞表达重组体 p GE-MEX1 -Tα1 ;从 m RNA水平证实 p GEMEX1 -Tα1在大肠杆菌 JM1 0 9(DE3)中能够转录 ;转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3) ,经 IPTG诱导 ,能产生一 36 k D左右的融合蛋白。结论 :构建成功重组体 p GE-MEX1 -Tα1 。 展开更多

关键词 胸腺素Α1 基因表达 克隆 大肠杆菌 dna 互补 序列分析

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稻胚凝集素基因的克隆、序列分析及表达 被引量：1

15

作者 郝峥嵘 刘庆法 +3 位作者 季昀 叶鸣明 陈永青 沈大棱 《西北植物学报》 CAS CSCD 1999年第2期183-189,共7页

以水稻基因组ＤＮＡ为模板，以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＳｍａⅠ位点。序列分析表明，克隆到的基因片段大小为７８１ｂｐ，没有内含子，编码１条... 以水稻基因组ＤＮＡ为模板，以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＳｍａⅠ位点。序列分析表明，克隆到的基因片段大小为７８１ｂｐ，没有内含子，编码１条长２２７个氨基酸、分子量约２３ｋＤ的肽链，其中Ｎ－端２８个氨基酸是信号肽。与报道的稻胚凝集素ｃＤＮＡ序列进行顺序同源性比较，发现它们之间有很高的同源性（９９．７４％），其编码区第１６７和５６３位各有１个碱基突变，但两者均为同义突变，并未造成氨基酸序列的变化。回收插入片段克隆到表达载体ｐＲＳＥＴ－Ｃ中，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中得到表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明，融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的５％。鉴于凝集素可能具有抗病虫害的能力，稻胚凝集素基因的克隆及其在原核系统中的成功表达有助于我们进一步揭示稻胚凝集素在植物防御以及其他生理活动中的功能。 展开更多

关键词 稻胚凝集素基因 序列分析 基因表达 水稻

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大鼠代谢型谷氨酸受体第5亚型基因片段的克隆 被引量：1

16

作者 秦丽华 于风山 +1 位作者 于恩华 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期11-14,共4页

从大鼠的尾壳核组织中提取总 RNA,以 RT-PCR方法扩增出大鼠 m Glu R5 长度约 43 5 bp的 c DNA片段。将这一片段克隆到 PGEM-T载体中进行序列分析 ,结果证实所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 m Glu R5 的一段基因序列。克隆的这段大鼠m Gl... 从大鼠的尾壳核组织中提取总 RNA,以 RT-PCR方法扩增出大鼠 m Glu R5 长度约 43 5 bp的 c DNA片段。将这一片段克隆到 PGEM-T载体中进行序列分析 ,结果证实所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 m Glu R5 的一段基因序列。克隆的这段大鼠m Glu R5 特异性基因片段可用于制作探针 ,利用原位杂交技术检测其 m RNA在正常或异常状况下的表达 ;也可制作反意 c DNA或反意 m RNA以研究 m Glu R5 在生理或病理状态下的作用 ;还可进行反意 c DNA或反意 m RNA基因治疗。总而言之 ,克隆的这段基因 ,对研究 m Glu R5 在生理及病理条件下的功能变化 。 展开更多

关键词 基因克隆 dna MGLURS 序列分析

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人脂联素基因的克隆及序列分析 被引量：1

17

作者 李丙蓉 郑丹 +3 位作者 邓华聪 兰丽珍 郑宏庭 刘金波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期293-295,共3页

目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:... 目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:从脂肪组织总RNA中扩增得到735bpapM1基因,其cDNA序列与GenBank报导的人脂联素基因apM1同源性为99.7%(159位和558位碱基发生了无义突变),获得了质粒pGEM-T-apM1,测序鉴定正确。结论:成功的克隆了apM1基因全长cDNA。 展开更多

关键词 脂联素基因 克隆 分子 逆转录聚合酶链反应 序列分析 dna

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猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆和分析 被引量：1

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作者 姜法铭 曹海军 +5 位作者 朱志盈 姚惠娟 樊生超 华修国 崔立 缪德年 《上海农业学报》 CSCD 2006年第4期18-21,共4页

根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分... 根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分析表明,IgG H链基因CH2-CH3序列全长为669 bp,编码CH2-CH3的221个氨基酸和J区的1个脯氨酸。利用DNASTAR软件将其与猪IgG H链各CH2-CH3序列进行比较,发现其与U03778-1、U03779-2a、U03780-2b、U03781-3、U03782-4的核苷酸序列同源率分别为92.1%、98.4%、98.5%、93.0%和97.2%,推导的氨基酸序列同源率分别为86.5%、96.4%、96.5%、87.0%和94.2%。经进化树分析提示,该序列可能为一个新的亚型。 展开更多

关键词 猪IgG H链基因 CH2-CH3 基因克隆 dna序列分析

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拟南芥AtPSK3基因的克隆及序列分析(英文) 被引量：1

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作者 林俏慧 谢秀祯 郭勇 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期349-352,i0003,共5页

根据拟南芥基因组数据库提供的信息,首次以特异引物经PCR技术克隆到拟南芥硫肽激素α的一个前体基因———AtPSK3,并对其进行了测序。序列分析表明,所获得的AtPSK3基因全长为505bp,含有一个内含子和两个没有3′或5′非转译区的外显子,... 根据拟南芥基因组数据库提供的信息,首次以特异引物经PCR技术克隆到拟南芥硫肽激素α的一个前体基因———AtPSK3,并对其进行了测序。序列分析表明,所获得的AtPSK3基因全长为505bp,含有一个内含子和两个没有3′或5′非转译区的外显子,与数据库提供的序列比较,同源性为100%。 展开更多

关键词 AtPSK3基因 基因克隆 dna序列分析

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抗CD3单克隆抗体重、轻链可变区基因的克隆及序列分析

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作者 张囡 陈明洁 +6 位作者 陈敬 金海陵 张爱华 闭兰 左建民 王志友 史良如 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期608-610,共3页

目的 :抗CD3单克隆抗体 (WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法 :采用RT PCR技术 ,从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH 、VL 片段 ,经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体 ,测序鉴定。结果 :通过国际联机检索发现VH 、VL 基因与Ig同源 ,分... 目的 :抗CD3单克隆抗体 (WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法 :采用RT PCR技术 ,从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH 、VL 片段 ,经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体 ,测序鉴定。结果 :通过国际联机检索发现VH 、VL 基因与Ig同源 ,分别符合小鼠IgVH 、Vκ基因特征。VH 基因属于鼠重链VH 第IIB亚类 ,全长 36 3bp ,可编码 12 1个氨基酸 ;VL 基因属于鼠κ轻链第III亚类 ,全长 330bp ,可编码 110个氨基酸。结论 :成功获得WuT3单抗的重、轻链可变区基因。 展开更多

关键词 mcab WuT3 基因克隆 dna序列分析 抗CD3单克隆抗体

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