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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建
被引量：
4
1
作者
贝为成
何启盖
+5 位作者
陈焕春
徐晓娟
洪文洲
肖少波
宋云峰
刘建杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期186-191,共6页
根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化...
根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。
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关键词
猪
传染性胸膜肺炎
放线杆菌
apx
ⅱ
^-/Amp^r
突变
株
基因构建
基因工程疫苗
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题名
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建
被引量：
4
1
作者
贝为成
何启盖
陈焕春
徐晓娟
洪文洲
肖少波
宋云峰
刘建杰
机构
华中农业大学动物医学院动物病毒室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期186-191,共6页
基金
湖北省科技攻关项目 (2 0 0 1AA2 0 1B0 2 )
国家自然科学基金资助 (3 0 2 0 0 0 1 1 )
文摘
根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。
关键词
猪
传染性胸膜肺炎
放线杆菌
apx
ⅱ
^-/Amp^r
突变
株
基因构建
基因工程疫苗
Keywords
Actinobacillus pleuropneumoniae
Recombinant transfer plasmid
Electroporate
Mutant strains
Genetic engineering vaccine
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建
贝为成
何启盖
陈焕春
徐晓娟
洪文洲
肖少波
宋云峰
刘建杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
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