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APOBEC3B调控葡萄膜黑色素瘤复制应激的研究
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作者 宗春燕 何杰 +2 位作者 张哲 贾仁兵 沈键锋 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1034-1044,共11页
目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响。方法·应用免疫组织化学... 目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响。方法·应用免疫组织化学染色和Western blotting,分别检测眼部黑色素瘤[UM和结膜黑色素瘤(conjunctival melanoma,CM)]组织和细胞中APOBEC3B蛋白的表达水平。通过检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析UM中APOBEC3B表达水平与预后的关联。使用CRISPR-Cas9质粒APOBEC3B-sgRNA敲除UM细胞系OMM2.3中APOBEC3B基因,构建APOBEC3B敲除的OMM2.3稳转细胞系sgAPOBEC3B以及对照细胞系Vector;并通过克隆形成实验,探索APOBEC3B敲除对OMM2.3细胞增殖的影响。同时,通过APOBEC3B-shRNA和空载质粒建立APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞shAPOBEC3B和对照细胞shCtrl,对其进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),检测差异基因,并通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)揭示APOBEC3B调控的下游通路。通过免疫荧光染色鉴定下游通路的关键蛋白。通过应用通路靶向药物处理,检测APOBEC3B对UM药物治疗敏感性的影响。结果·免疫组织化学染色结果表明眼部黑色素瘤(UM和CM)组织相较于良性色素痣组织APOBEC3B表达更高。Western blotting也表明包括OMM2.3细胞在内的大多数眼部黑色素瘤细胞相较于正常对照细胞(视网膜色素上皮细胞)APOBEC3B蛋白表达水平更高。并且TCGA数据库分析表明,APOBEC3B高表达的UM患者总生存期(P=0.032)和无病生存期(P=0.000)更短。然而APOBEC3B敲除并不影响OMM2.3细胞克隆形成的能力,APOBEC3B敲低也没有造成细胞周期的显著改变。shAPOBEC3B和shCtrl细胞系的RNA-seq差异基因富集分析结果显示,APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞的复制应激相关通路,并且热图分析也显示APOBEC3B敲低后DNA复制应激相关通路基因表达发生改变。免疫荧光染色结果显示,APOBEC3B敲低后复制应激通路关键靶标磷酸化的复制蛋白A 32 kDa亚基(replication protein A 32 kDa subunit,RPA32)水平降低。在对APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞和对照细胞的药物敏感性实验中,发现相较于shAPOBEC3B细胞,shCtrl细胞对细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)抑制剂的敏感性更高。结论·APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞复制应激相关通路,且APOBEC3B表达的OMM2.3细胞对CHK1抑制剂的处理更为敏感。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑酶催化亚基3b(apobec3b) 葡萄膜黑色素瘤 复制应激 细胞周期检测点激酶1(CHK1)抑制剂
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人天然免疫蛋白载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)的克隆表达及活性鉴定
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作者 成珊 曹丽妍 +2 位作者 杜娟 王文勇 郭晏海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期179-184,共6页
目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性。方法构建APOBEC3A真核表达载体pc DNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和Hep G2细胞。Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免... 目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性。方法构建APOBEC3A真核表达载体pc DNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和Hep G2细胞。Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色确定APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞的定位,利用组蛋白(His)标签蛋白纯化方法富集纯化APOBEC3A蛋白,荧光偏振技术检测APOBEC3A脱氨酶活性。结果 DNA测序证实pc DNA3.0-APOBEC3A插入长600 bp的APOBEC3A基因序列;该质粒能在HEK293T细胞和Hep G2细胞表达APOBEC3A,APOBEC3A在HEK293T细胞中主要分布于胞质,在Hep G2细胞中胞质和胞核均匀分布;纯化获得的APOBEC3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性。结论成功构建APOBEC3A真核表达载体,APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞定位不同,表达的APOBEC3A具有胞嘧啶脱氨基活性。 展开更多
关键词 固有免疫 载脂蛋白b mrna编辑酶催化亚基3A(APObEC3A) 胞嘧啶脱氨酶 克隆表达
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APOBEC3蛋白与HPV及宫颈癌的研究进展 被引量：5
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作者 魏智(综述) 赵洪波 +2 位作者 张涛 冯璇 杜琰(审校) 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期271-276,共6页
宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,AP... 宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,APOBEC)家族是一组能够编辑DNA或RNA序列的胞苷脱氨酶。APOBEC3成员是固有免疫系统的重要成员,在抗病毒感染防御过程中扮演重要角色。APOBEC3与多种肿瘤的发生发展密切相关,可能与HPV感染以及宫颈癌的关系尤为密切。APOBEC3B可能通过“协助”HPV病毒使抑癌蛋白失活及促进HPV病毒癌蛋白的突变,从而促进癌症的发生。本文就APOBEC3与HPV清除、突变和宫颈癌发生方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑催化多肽3(APObEC3) 宫颈癌 人乳头瘤病毒(HPV)
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