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Advances in Antimicrobial Peptides and Expression Strategy 被引量:2
1
作者 SUN Yan WANG Yunfeng +5 位作者 CHEN Hongyan SHI Xingming WANG Mei HUANG Tingting SUN Peng YANG Guihua 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2011年第1期85-90,共6页
Antimicrobial peptides are widely distributed in nature,existing in organisms of plants,insects,and vertebrates.It has been approved that antimicrobial peptides have broad spectrum antimicrobial activities,and play a ... Antimicrobial peptides are widely distributed in nature,existing in organisms of plants,insects,and vertebrates.It has been approved that antimicrobial peptides have broad spectrum antimicrobial activities,and play a key modulatory role in the innate immune response and tumor inhibiting activity.Due to the special action mechanism,the antimicrobial peptides become a hot field of genetic engineering.In the present paper,the general properties,mechanism of action,application value,existing problems,the latest progress and the expression strategy were discussed. 展开更多
关键词 antimicrobial peptide molecular biology fusion expression
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斜带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达 被引量:11
2
作者 陈大玮 邓利 +2 位作者 刘志刚 孟铂渊 马一见 《南方水产科学》 CAS 2011年第1期1-7,共7页
文章根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物,通过RT—PCR从重要海水经济鱼类斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)肝脏中扩增出1条具有完整开放阅读框的246bpcDNA序列,Blast分析表明该序列是鱼类hepcidin基因家族的一员... 文章根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物,通过RT—PCR从重要海水经济鱼类斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)肝脏中扩增出1条具有完整开放阅读框的246bpcDNA序列,Blast分析表明该序列是鱼类hepcidin基因家族的一员,被命名为斜带石斑鱼hepcidin样抗菌肽前体,该cDNA所推导的氨基酸序列有如下特点:1)信号肽序列与多数鱼类hepcidin信号肽的同源性在67%~87%之间;2)C端20个氨基酸序列具有绝大多数动物hepcidin成熟肽的共同典型保守序列特征,即在对应位置具有8个Cys;3)序列中不具有已报道的hepcidin前体肽转化酶作用典型基序[RX(K/R)R];4)与GenBank中已注册的2条斜带石斑鱼hepcidincDNA序列(GU391241和GU391242)所推导的氨基酸序列同源性分别为36%和33%,且NJ进化树显示不与这2条序列聚为一枝,表明该序列是斜带石斑鱼hepcidin基因家族中一种新亚型,其预测成熟肽融合表达载体成功在大肠杆菌(Escherichiacoli)中表达,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 抗菌肽 HEPCIDIN 分子克隆 原核融合表达
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泥螺抗菌肽的初步研究 被引量:11
3
作者 李晔 苏秀榕 李太武 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期145-149,共5页
将一定浓度的大肠杆菌注射于泥螺体内18h后,将其粘液和血淋巴,于95℃加热10min,10000r/min,4℃离心20min,所得上清液用截留分子量为3kD的超滤装置于10000r/min,4℃下离心1h.滤液用SephadexG50分离,得到两个吸收峰.以大肠杆菌和金黄色葡... 将一定浓度的大肠杆菌注射于泥螺体内18h后,将其粘液和血淋巴,于95℃加热10min,10000r/min,4℃离心20min,所得上清液用截留分子量为3kD的超滤装置于10000r/min,4℃下离心1h.滤液用SephadexG50分离,得到两个吸收峰.以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为试验菌株检测抑菌活性,结果表明泥螺经大肠杆菌诱导后,在其血淋巴和分泌的粘液中可分离得到抗菌肽,此多肽具有分子量较小,热稳定性好,对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均能够起到抑制作用的特点. 展开更多
关键词 抗菌肽 泥螺 SEPHADEX 金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性细菌 革兰氏阳性细菌 大肠杆菌 截留分子量 超滤装置 抑菌活性 试验菌株 热稳定性 抑制作用 血淋巴 min 上清液 吸收峰 粘液 离心 分离
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抗菌肽研发现状及其改造策略 被引量:19
4
作者 祁丽 姜宁 +4 位作者 张爱忠 全佳慧 黄福佳 宋磊 张伟庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期450-456,共7页
抗菌肽已成为替代抗生素来预防和控制疾病的潜在药物,但因其产量低,生产成本高而缺乏大规模生产的条件,因此,通过基因工程技术对抗菌肽进行改造成为必然。文章分析了抗菌肽的研发现状、抗菌肽的基因改造策略,介绍了在天然抗菌肽基础上... 抗菌肽已成为替代抗生素来预防和控制疾病的潜在药物,但因其产量低,生产成本高而缺乏大规模生产的条件,因此,通过基因工程技术对抗菌肽进行改造成为必然。文章分析了抗菌肽的研发现状、抗菌肽的基因改造策略,介绍了在天然抗菌肽基础上开展的氨基酸残基设计、肽片段拼接设计、肽链的环合设计、计算机辅助设计、靶向设计和模拟生物模型设计等衍生肽的分子设计策略及通过融合表达、串联表达、多拷贝表达等基因重组技术制备抗菌肽的优势及抗菌肽表达调控等研究进展,为抗菌肽的低成本和规模化生产奠定理论基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 分子设计 基因重组 表达调控 研究现状
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抗菌肽高效表达及生产优化研究进展 被引量:15
5
作者 杨平 袁奕豪 +3 位作者 杨晓莉 钟玥 廖于鑫 高荣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期24-30,共7页
抗菌肽是基因编码、经外界诱导产生的一类多肽。在抗生素引发"耐药性"难题的时代,抗菌肽以广谱杀菌、不易产生耐药性、抗肿瘤、抗病毒等特点而拥有超越抗生素、造福人类的巨大潜能。然而,天然抗菌肽还需进行增强抗菌性和稳定... 抗菌肽是基因编码、经外界诱导产生的一类多肽。在抗生素引发"耐药性"难题的时代,抗菌肽以广谱杀菌、不易产生耐药性、抗肿瘤、抗病毒等特点而拥有超越抗生素、造福人类的巨大潜能。然而,天然抗菌肽还需进行增强抗菌性和稳定性、降低细胞毒性等改造,并通过工业化改良实现大规模生产。因此现从抗菌肽改造设计、生产应用等最新研究做较为详细的综述。 展开更多
关键词 抗菌肽 分子设计 表达策略 生产优化
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抗菌肽Magainin Ⅱ的原核表达与抗菌活性分析 被引量:4
6
作者 卢艳敏 崔海信 +1 位作者 王承民 何宏轩 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期59-62,68,共5页
根据Magainin Ⅱ氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱密码子,化学合成了2个DNA片段,利用重叠区互补PCR法得到Magainin Ⅱ的基因序列。构建了融合表达载体pET21b-Magainin Ⅱ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,... 根据Magainin Ⅱ氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱密码子,化学合成了2个DNA片段,利用重叠区互补PCR法得到Magainin Ⅱ的基因序列。构建了融合表达载体pET21b-Magainin Ⅱ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在5.1 kD处可见目的蛋白条带,经Western blot检测表明成功地在大肠杆菌中表达了融合蛋白。诱导温度在20℃,IPTG终浓度为0.4 mmol/L,诱导时间为12 h,融合蛋白表达效果较好,且主要以可溶性形式存在,对纯化得到的融合蛋白进行活性分析,抑菌活性试验表明,表达产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用。 展开更多
关键词 MAGAININ 抗菌肽 融合表达 抑菌活性
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抗菌肽Lactoferricin B的原核表达及其纯化 被引量:4
7
作者 赵晓宇 冯兴军 +3 位作者 孟利强 张淑梅 王玉霞 张先成 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期67-71,共5页
牛乳铁蛋白活性多肽(Lactoferricin B,LfcinB)是一种阳离子型抗菌肽,因其具有多种生物学功能,现已被认为具有能够替代传统抗生素的发展前景。然而,由于传统的分离制备方法存在诸多弊端,所以基于基因工程的原核表达技术在制备高纯度和高... 牛乳铁蛋白活性多肽(Lactoferricin B,LfcinB)是一种阳离子型抗菌肽,因其具有多种生物学功能,现已被认为具有能够替代传统抗生素的发展前景。然而,由于传统的分离制备方法存在诸多弊端,所以基于基因工程的原核表达技术在制备高纯度和高效表达的该蛋白方面具有极其深远的意义。研究旨在摸索出一套完整的利用原核表达技术制备LfcinB的分子生物学方法。依据大肠杆菌密码子偏爱性的原则,设计了LfcinB的基因序列,通过人工合成的方法获得该基因的优化序列,借助Bam HI和Sal I双酶切、连接等手段将其构建到原核表达载体pGEX-4T-2上,获得重组表达载体pGEX-4T-2-LCB,将该载体转化E.coli Rosetta(DE3)。使用IPTG诱导,结果发现LfcinB在大肠杆菌中表达量超过20%。通过一系列蛋白纯化技术分离得到纯度达到95%以上的LfcinB融合蛋白。抑菌试验结果表明,重组抗菌肽LfcinB融合蛋白具有很好的抑菌活性。研究结果为人们使用基因工程技术制备抗菌肽LfcinB提供了具有重要参考价值的技术路线和理论依据。 展开更多
关键词 抗菌肽 牛乳铁蛋白活性多肽 融合蛋白 原核表达
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重组鲢鱼抗菌肽parasinⅠ原核表达、纯化与抗菌活性 被引量:6
8
作者 赵华 张艳艳 +3 位作者 汤加勇 李珂 周继昌 王康宁 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1731-1736,共6页
本文旨在构建抗菌肽parasinⅠ大肠杆菌重组表达载体,表达人工重组parasinⅠ,并检测其抑菌活性。根据parasinⅠ的成熟肽序列和大肠杆菌密码子偏好性,人工合成1段57 bp的基因编码cDNA,通过PCR技术构建大肠杆菌重组表达质粒pET32-ParaⅠ,并... 本文旨在构建抗菌肽parasinⅠ大肠杆菌重组表达载体,表达人工重组parasinⅠ,并检测其抑菌活性。根据parasinⅠ的成熟肽序列和大肠杆菌密码子偏好性,人工合成1段57 bp的基因编码cDNA,通过PCR技术构建大肠杆菌重组表达质粒pET32-ParaⅠ,并在parasinⅠ基因5'-端引入Xa因子酶切位点。重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后,在不同温度(37和20℃)条件下对阳性转化子进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果表明:IPTG成功诱导了1个21 ku的融合蛋白表达,重组蛋白占菌体总蛋白质的45%~50%。在低温条件下产生的融合蛋白主要以可溶性形式存在。可溶性重组蛋白经亲和层析纯化后,用Χa因子进行酶切,酶切产物经琼脂孔扩散法抑菌活性检测,结果显示其对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用。本试验实现了parasinⅠ的重组表达,表达产物经Χa因子酶切后具抑菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽parasinⅠ 大肠杆菌 融合蛋白 表达 抑菌活性
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棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达 被引量:3
9
作者 陈大玮 邓利 +3 位作者 何凡 邱聪龄 马一见 刘志刚 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期126-133,共8页
以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU59... 以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide(ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide(ACE78291)以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis(EF),并在大肠杆菌E.coliOrigami(DE3)中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4 h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在。 展开更多
关键词 抗菌肽 Piscidin 基因克隆 原核表达 棕点石斑鱼
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海水养殖花鲈鳃组织hepcidin-like抗菌肽基因克隆与序列分析 被引量:3
10
作者 杨明 王克坚 +1 位作者 陈君慧 李少菁 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期330-335,共6页
本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(3′RACE)克隆出海水养殖花鲈(Lateolabrax japonicus)鳃组织hepcidin-like抗菌肽基因cDNA(523bp),包含完整的编码区、3′端非翻译区(3′UTR)和典型的多腺苷酸化信号(AAT... 本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(3′RACE)克隆出海水养殖花鲈(Lateolabrax japonicus)鳃组织hepcidin-like抗菌肽基因cDNA(523bp),包含完整的编码区、3′端非翻译区(3′UTR)和典型的多腺苷酸化信号(AATAAA).该基因编码86个氨基酸,由信号肽、优势域和成熟肽组成.与花鲈肝脏分离到hepc1及国外发表白鲈(Morone chrysops)hepcidin氨基酸序列进行比较,结果显示花鲈鳃hepcidin-like基因编码的氨基酸与它们在27个位点上存在着差异;该hepci-din-like基因可能为hepcidin的不同变体,属于hepcidin抗菌肽家族的新成员. 展开更多
关键词 分子生物学 抗菌肽 HEPCIDIN 花鲈
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抗菌肽CAP18在大肠杆菌中表达、纯化及活性的初步鉴定 被引量:2
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作者 徐灵龙 石星明 +4 位作者 王云峰 史春林 王玫 孙妍 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期861-865,共5页
根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度... 根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度达到了85%以上。对纯化的融合蛋白进行酶切,用液体生长抑制方法检测切割后样品的活性,结果表明重组抗菌肽CAP18对大肠杆菌具有抑制活性。 展开更多
关键词 兔抗菌肽CAP18 融合基因 重组表达 抑菌活性
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重组鸡Cathelicidins类抗菌肽的融合表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性的研究 被引量:2
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作者 吴静 梁永利 +2 位作者 李玉峰 马秀丽 姜亦飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期19-26,共8页
Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-... Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcusluteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。 展开更多
关键词 抗菌肽 CATHELICIDINS 融合表达 纯化 抑菌活性 金黄色葡萄球菌
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动物源抗菌肽的研究现状和展望 被引量:26
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作者 汪以真 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2934-2941,共8页
动物源抗菌肽是机体先天免疫系统的重要效应分子,因其具有广谱高效抗菌活性、细胞选择性及不易产生耐药性等特点,一直被人们认为是抗生素的理想替代品。此外,由于动物体自身分泌的抗菌肽远未达到抑制细菌所需浓度,因此其生物学功能不仅... 动物源抗菌肽是机体先天免疫系统的重要效应分子,因其具有广谱高效抗菌活性、细胞选择性及不易产生耐药性等特点,一直被人们认为是抗生素的理想替代品。此外,由于动物体自身分泌的抗菌肽远未达到抑制细菌所需浓度,因此其生物学功能不仅局限于抗菌活性。大量研究表明,抗菌肽不仅具有抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等效果,在体内还表现出抗炎症反应、招募免疫细胞、促进上皮损伤修复、促进细胞吞噬细菌等重要作用。然而抗菌肽在一些方面的研究尚不透彻或存在争议,如抗菌肽是否存在耐药性以及通过重组表达技术生产的抗菌肽是否能安全有效地应用。关于抗菌肽的一些生物学功能与分子机制还有待系统深入的研究,如抗菌肽的构效关系、抗菌肽对益生菌的影响、抗菌肽与抗生素的互作效应、抗菌肽的稳定性及其吸收与代谢情况、营养物质调控内源抗菌肽的表达等。因此本文旨在从动物源抗菌肽的生物学功能、作用机制、稳定性与吸收、表达规律与营养调控、分子改良以及重组表达6个方面进行综述,为研发新型、高效、环保型抗生素替代品提供重要信息和策略。 展开更多
关键词 抗菌肽 生物学功能 稳定性 表达规律 分子改良 重组表达
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抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达策略 被引量:1
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作者 杨勇 金德俊 +4 位作者 余维维 秦梦茹 吴碧舟 徐泽平 饶犇 《湖北农业科学》 2017年第15期2801-2805,2810,共6页
抗菌肽抗菌谱广、活性稳定,具有与抗生素不同的抗菌机制,在抑杀病原微生物的同时不易产生耐药性,在免疫调节和抗感染方面具有巨大的发展潜力,能够发展为取代抗生素的新型药剂,在食品、饲料、畜禽养殖等领域也具有重要的应用价值。基因... 抗菌肽抗菌谱广、活性稳定,具有与抗生素不同的抗菌机制,在抑杀病原微生物的同时不易产生耐药性,在免疫调节和抗感染方面具有巨大的发展潜力,能够发展为取代抗生素的新型药剂,在食品、饲料、畜禽养殖等领域也具有重要的应用价值。基因工程技术是降低抗菌肽生产成本的主要方式,其中融合表达在提高抗菌肽产量方面起到了重要作用。综述了抗菌肽在大肠杆菌中融合表达的国内外研究进展,探讨了抗菌肽在大肠杆菌中融合表达的策略,并对高通量融合表达抗菌肽提出了建议。 展开更多
关键词 抗菌肽 大肠杆菌 基因工程 融合表达 高通量
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乌骨鸡Cathelicidins类抗菌肽基因在大肠杆菌中的融合表达与抑菌活性
15
作者 吴静 梁永利 +4 位作者 史玉颖 李玉峰 马秀丽 姜亦飞 宋敏训 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期1207-1214,共8页
Cathelicidins抗菌肽是含高度保守cathelin结构域的一大类抗菌肽,在家禽天然免疫系统中发挥重要作用。通过PCR方法,从含乌骨鸡Cathelicidins抗菌肽基因(CathL-1,-2,-3)cDNA完整序列的质粒pMDCathL中分别扩增Cathelicidins-1,-2,-3成熟... Cathelicidins抗菌肽是含高度保守cathelin结构域的一大类抗菌肽,在家禽天然免疫系统中发挥重要作用。通过PCR方法,从含乌骨鸡Cathelicidins抗菌肽基因(CathL-1,-2,-3)cDNA完整序列的质粒pMDCathL中分别扩增Cathelicidins-1,-2,-3成熟肽的编码序列,将其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建其重组表达质粒pET30-CathL1S,pET30-CathL2S,pET30-CathL3S,经测序验证的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。阳性克隆菌株在37℃,1.0 mmol·L-1IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子量分别为7.0,8.0,7.5 kD。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌、绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 乌骨鸡 Cathelicidins抗菌肽 融合表达 分离纯化 抑菌活性
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人β-防御素2在大肠杆菌中的高效表达和纯化 被引量:5
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作者 钟志霞 阮红 +3 位作者 范立梅 彭力 方向明 徐志南 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第6期585-589,共5页
目的:研究具有生物学活性的人防御素2(HBD 2)多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法:PCR扩增不含前导序列的HBD 2成熟肽的编码框全长的cDNA片段(smHBD 2-cDNA),利用B g lⅡ和B amHⅠ同尾酶构建多... 目的:研究具有生物学活性的人防御素2(HBD 2)多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法:PCR扩增不含前导序列的HBD 2成熟肽的编码框全长的cDNA片段(smHBD 2-cDNA),利用B g lⅡ和B amHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD 2-cDNA的克隆载体,利用N colⅠ和H indⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET 32-nsmHBD 2-cDNA,在大肠杆菌中BL 21(DE 3)中诱导表达含HBD 2的融合蛋白,SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD 2多肽。采用液体培养法,测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果:构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD 2-cDNA表达载体,1、2和4倍smHBD 2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52%、48%和31%;而8倍HBD 2-cDNA几乎不含可溶蛋白,目标蛋白以包含体形式表达,集中在不可溶部分。重组HBD 2对E.coli K 12 D 31有较强的抑制作用,在终浓度约为0.4至0.5μg/m l时,90%细胞的生长被抑制。结论:采用融合表达、多拷贝串联表达方式,可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用,也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性;适当的多拷贝串联基因可以提高HBD 2的产量,但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量,且易形成不溶蛋白;在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD 2多肽的原核高效表达。 展开更多
关键词 防御素类/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因表达 Β-防御素 抗菌肽 原核表达 亲和层析 融合蛋白
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抗菌肽基因BnPCD842895克隆表达及活性检测 被引量:2
17
作者 黄金 黄军艳 +8 位作者 柯涛 周瑢 曹慧慧 马向东 童超波 于景印 吴南 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期357-363,共7页
为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,... 为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,将合成的抗菌肽基因克隆到pET30a-EDDIE-GFP表达载体上。将大肠杆菌中表达得到的包涵体融合蛋白在体外复性,并通过融合蛋白EDDIE的自我剪切,从而获得不增加任何多余氨基酸的抗菌肽产物。抑菌活性检测结果表明BnPCD842895对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有较强的抑菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽 甘蓝型油菜 抗菌肽基因BnPCD842895 融合表达 活性检测
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微生物源抗菌肽表达系统研究进展及改造策略 被引量:5
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作者 徐珂 张丽萍 +1 位作者 张园园 刘俊果 《河北科技大学学报》 CAS 2019年第5期454-460,共7页
针对抗菌肽的生物活性、重组表达系统以及分子改造设计进行了回顾总结,提出了抗菌肽研究及技术开发领域目前存在的问题,包括抗菌活性较弱、生物合成效率不高、选择性差等。同时提出分子改造是提高抗菌活性和选择性的有效策略,而优化重... 针对抗菌肽的生物活性、重组表达系统以及分子改造设计进行了回顾总结,提出了抗菌肽研究及技术开发领域目前存在的问题,包括抗菌活性较弱、生物合成效率不高、选择性差等。同时提出分子改造是提高抗菌活性和选择性的有效策略,而优化重组表达系统是提高生物合成效率的关键途径。认为针对抗菌肽的研究和开发,一方面会深化人类对于抗菌肽的结构与抗菌性、选择性、毒性关系的认识,深化对重组表达系统关键步骤及调控机理的认识,具有显著的科学意义;另一方面,由于抗菌肽独特的抗菌机制,不易产生耐药性,对抗菌肽的研发将会大大推动其在药品、食品、化妆品、饲料等领域的应用。 展开更多
关键词 蛋白质工程 抗菌肽 生物活性 表达系统 重组表达 分子改造
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融合头的改变对抑制重组抗菌肽毒性的影响(英文) 被引量:1
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作者 王作利 查向东 +3 位作者 周鹏 刘小强 杨金环 方红 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期91-95,137,共6页
为进一步完善G13结构域的原核表达系统,人工合成编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pET28a中,构建的重组质粒pET28a-G13转化于E.coli BL21(DE3)中。另外对pET28a-G13进行突变,改变其G13片段N端上游处的融合头的电荷数,转化... 为进一步完善G13结构域的原核表达系统,人工合成编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pET28a中,构建的重组质粒pET28a-G13转化于E.coli BL21(DE3)中。另外对pET28a-G13进行突变,改变其G13片段N端上游处的融合头的电荷数,转化于E.coli BL21(DE3)中。构建pThiohisA突变体并与pET28a-G13共转化于E.coli BL21(DE3)中。用诱导剂诱导所构建的各个工程菌,然后比较A600值变化及蛋白表达量,分析不同的融合头对G13毒性抑制效果,发现融合头对G13毒性抑制效果与其净负电荷数及酸性氨基酸的相对位置有关。 展开更多
关键词 阳离子抗菌肽 融合头 共表达 重组表达
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油菜抗菌肽基因BnCRP1的克隆表达和活性分析 被引量:1
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作者 曹慧慧 王磊 +5 位作者 闫艳华 林田 柯涛 黄军艳 程晓晖 刘胜毅 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期91-97,共7页
通过生物信息学的方法,充分利用甘蓝型油菜组织转录组测序数据和已有的抗菌肽数据库,筛选获得一个核苷酸长度为102 bp,编码34个氨基酸长度的新型抗菌肽基因BnCRP1,BnCRP1抗菌肽序列中有9个半胱氨酸,半胱氨酸含量超过27%,是一种新型的植... 通过生物信息学的方法,充分利用甘蓝型油菜组织转录组测序数据和已有的抗菌肽数据库,筛选获得一个核苷酸长度为102 bp,编码34个氨基酸长度的新型抗菌肽基因BnCRP1,BnCRP1抗菌肽序列中有9个半胱氨酸,半胱氨酸含量超过27%,是一种新型的植物来源的半胱氨酸富集类抗菌肽(Cystin rich protein CRPs),在抗菌肽分类中属于打结素类抗菌肽(Knottin-like Peptides)。抑菌活性检测结果表明抗菌肽BnCRP1对细菌和真菌都具有较强的抑菌活性。拟南芥离体叶片涂抹接菌实验证实,BnCRP1能够显著增强植物对腐生营养型真菌核盘菌的抗性,能够作为生防制剂用于菌核病的防治中,还可以作为一个新基因源用于植物基因工程,以培育抗病转基因植物。本研究为利用生物信息手段和基因工程技术大规模鉴定新植物来源抗菌肽提供参考。 展开更多
关键词 油菜 抗菌肽 半胱氨酸富集类抗菌肽 融合表达 活性检测
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