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无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)三重PCR快速检测方法的建立与应用 被引量：11
1
作者 黄锦炉 汪开毓 +5 位作者 肖丹 刘贝贝 王均 黄凌远 付希 王浩丞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期254-261,共8页
参照GenBank发表的无乳链球菌sip、cpsE这两个高度保守基因设计两组特异性引物,应用已报道的无乳链球菌cpsL基因高度保守序列的引物作为阳性对照引物,经反应条件和反应体系参数优化,建立一种检测无乳链球菌的三重PCR方法,并应用本三重PC... 参照GenBank发表的无乳链球菌sip、cpsE这两个高度保守基因设计两组特异性引物,应用已报道的无乳链球菌cpsL基因高度保守序列的引物作为阳性对照引物,经反应条件和反应体系参数优化,建立一种检测无乳链球菌的三重PCR方法,并应用本三重PCR方法检测40尾人工感染罗非鱼样本和22尾临床上收集的疑似无乳链球菌感染鱼样本。结果表明,所建立的三重PCR方法具有良好特异性,检测无乳链球菌DNA样本时出现三条扩增条带,检测其他7种供试菌株DNA则不出现出任何扩增条带,对无乳链球菌DNA样本的最低检测浓度为0.32ng/μl,最适Mg2+浓度为37.5mmol/L,整个检测过程耗时100min左右。40尾人工感染罗非鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为100%,22尾疑似无乳链球菌感染鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为72.7%,以上两批样本检测结果与常规细菌鉴定方法结果一致。 展开更多
关键词 无乳链球菌 三重PCR 检测方法
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罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)Sip基因的克隆、鉴定及分子特性分析 被引量：4
2
作者 黄锦炉 汪开毓 +4 位作者 肖丹 王均 付希 王浩丞 连海 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期554-560,共7页
利用设计的特异性引物,扩增出了分离自患病罗非鱼无乳链球菌强毒株Sip基因,并将其克隆到pMD19-T载体上,之后对重组质粒进行了PCR和双酶切(BamHⅠ+HindⅢ)鉴定,并利用多种生物信息学软件对Sip基因进行分子特性分析。结果显示,罗非鱼源无... 利用设计的特异性引物,扩增出了分离自患病罗非鱼无乳链球菌强毒株Sip基因,并将其克隆到pMD19-T载体上,之后对重组质粒进行了PCR和双酶切(BamHⅠ+HindⅢ)鉴定,并利用多种生物信息学软件对Sip基因进行分子特性分析。结果显示,罗非鱼源无乳链球菌Sip编码氨基酸序列具有极高保守性,与人源、哺乳动物源无乳链球菌亲缘性达100%,存在1个由25个氨基酸组成的信号肽,具有1个与免疫调节功能相关的LysM结构域,具有与蛋白翻译后修饰功能相关的磷酸化位点33个和N-糖基化位点2个,编码多肽链中疏水区大于亲水区,是一种膜外蛋白。密码子偏爱性分析表明,罗非鱼源无乳链球菌Sip基因密码子使用频率差异较大,密码子偏爱性与真核生物较为接近。 展开更多
关键词 无乳链球菌 Sip基因 克隆 分子特性
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无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)荚膜多糖合成基因研究进展 被引量：1
3
作者 汪开毓 黄锦炉 +2 位作者 肖丹 王均 黄凌远 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期189-197,共9页
无乳链球菌是一种人畜鱼共患的重要病原菌,菌体表面的荚膜多糖是公认的毒力因子,其合成过程受荚膜多糖合成基因的调控。荚膜多糖合成基因存在于荚膜多糖操纵子中,参与无乳链球菌荚膜多糖的合成启动、寡糖和多糖的聚合以及外输并锚定于... 无乳链球菌是一种人畜鱼共患的重要病原菌,菌体表面的荚膜多糖是公认的毒力因子,其合成过程受荚膜多糖合成基因的调控。荚膜多糖合成基因存在于荚膜多糖操纵子中,参与无乳链球菌荚膜多糖的合成启动、寡糖和多糖的聚合以及外输并锚定于菌体表面,在新型诊断技术和减毒突变株的构建方面取得良好的应用。本文首次就cps基因的基本属性、转录调节、编码蛋白及其生物功能、对荚膜多糖合成的调控机理、在血清分型和突变株构建的应用这六个方面进行深入分析和讨论,以期为GBScps基因的新功能研究和创新应用提供理论参考。 展开更多
关键词 无乳链球菌 荚膜多糖合成基因 作用机制 应用
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罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)新型AI-2信号分子受体RbsB蛋白结晶生长研究 被引量：1
4
作者 樊博琳 潘丽霞 +3 位作者 王忠良 黎源 简纪常 王蓓 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期132-140,共9页
为了开展无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)核糖结合蛋白(Ribose binding protein B,RbsB)结构功能的研究,本实验根据已知无乳链球菌ZQ0910全基因组序列设计相关引物。采用PCR方法扩增其RbsB基因,随后将该基因定向克隆到原核表达载... 为了开展无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)核糖结合蛋白(Ribose binding protein B,RbsB)结构功能的研究,本实验根据已知无乳链球菌ZQ0910全基因组序列设计相关引物。采用PCR方法扩增其RbsB基因,随后将该基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达;采用HRV 3C蛋白酶切除GST标签,分子筛分离获得RbsB蛋白;运用生物信息学软件对RbsB基因序列进行分析,并对RbsB蛋白二级和三级结构进行预测;采用NeXtal Tubes JCSG Core Suite结晶试剂盒筛选蛋白结晶条件。研究结果表明,该基因全长为969碱基,编码322个氨基酸,RbsB蛋白理论分子量33.9ku,等电点为9.41,二级结构中α螺旋结构所占比重最高,建立RbsB蛋白三维结构模式图;经IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为59ku,筛选RbsB蛋白的初始结晶条件为(0.2mol/L di-Potassium hydrogen phosphate,20%(W/V)PEG3350;1.5mol/L ammonium sulfate,25%(V/V)Glycerol),获得RbsB蛋白结晶体。本研究结果可为无乳链球菌核糖结合蛋白(RbsB)的功能解析提供实验及理论基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 RbsB蛋白 蛋白纯化 结晶化
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鱼类无乳链球菌病流行病学及防控技术研究进展 被引量：6
5
作者 石杰 黎洁 张永安 《水生生物学报》 北大核心 2025年第1期154-165,共12页
无乳链球菌病以其传播速度快和致死率高著称,对水产养殖业造成了严重威胁,并给养殖户带来了巨大经济损失。中国感染鱼类的无乳链球菌分子血清型主要以Ia为主,且通常呈现多重耐药性。目前,防治该病主要依赖抗生素治疗,辅以中草药疗法。然... 无乳链球菌病以其传播速度快和致死率高著称,对水产养殖业造成了严重威胁,并给养殖户带来了巨大经济损失。中国感染鱼类的无乳链球菌分子血清型主要以Ia为主,且通常呈现多重耐药性。目前,防治该病主要依赖抗生素治疗,辅以中草药疗法。然而,随着抗生素的广泛及不合理使用,无乳链球菌的耐药性逐年上升,因此,探索和开发安全有效的防治方法对于有效防控无乳链球菌病及遏制细菌耐药性的传播极为关键。文章综述了近年来关于鱼类无乳链球菌病的研究文献,从病原学、流行病学、临床症状与防治技术等多个角度进行了综合分析,指出当前防治措施存在的问题和不足,并对今后的研究方向进行了展望,旨在为鱼类无乳链球菌病的防治提供坚实的理论基础和技术指导。 展开更多
关键词 鱼类 无乳链球菌病 流行病学 防控技术
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广西罗非鱼源无乳链球菌分离鉴定及耐药性分析 被引量：1
6
作者 全琛宇 周英宁 +11 位作者 蒲婵娟 陈婷婷 许心婷 卢冰霞 许艺兰 赵硕 杨讯业 段群棚 秦毅斌 李斌 陈忠伟 何颖 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2893-2903,共11页
【目的】掌握广西地区无乳链球菌流行规律和耐药特征,为罗非鱼健康养殖提供科学依据。【方法】采集广西贵港市、北海市、玉林市罗非鱼养殖场病鱼肝脏、脾脏、脑等组织作为样本进行细菌分离培养,通过对分离菌株形态观察及16S rRNA测序分... 【目的】掌握广西地区无乳链球菌流行规律和耐药特征,为罗非鱼健康养殖提供科学依据。【方法】采集广西贵港市、北海市、玉林市罗非鱼养殖场病鱼肝脏、脾脏、脑等组织作为样本进行细菌分离培养,通过对分离菌株形态观察及16S rRNA测序分析进行病原鉴定;利用PCR方法检测各分离菌株血清型、主要毒力基因,并采用K-B法检测其耐药性。【结果】共分离38株链球菌,分离菌株在血平板上形成乳白色圆形、具备溶血环的小菌落;革兰染色为阳性,呈典型短链状,经鉴定均为Ⅰa型无乳链球菌;分离菌株均能扩增出毒力基因sodA、cylE、gapC、bac和bca,但未能扩增出毒力基因scpB;38株分离株对氨基糖苷类药物敏感性较低,对阿米卡星耐药率达到85%以上;分离菌株对β-内酰胺类药物敏感性较高,对青霉素G、头孢哌酮敏感性达100%。38株分离菌中有23株分离菌株呈多重耐药性,耐药数量为3~10重,其中4重及以上为13株,占总分离菌株的34.21%。【结论】广西地区罗非鱼源无乳链球菌临床菌株主要血清型为Ⅰa型,其主要毒力基因为sodA、cylE、gapC、bac和bca;分离菌株对氨基糖苷类药物耐药,提示避免使用该类药物进行防治。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 血清型 毒力基因 耐药性
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无乳链球菌抑菌中草药的筛选及其穿透尼罗罗非鱼体血脑屏障能力的研究
7
作者 郑梦婕 李梓昕 +6 位作者 陈杨慧 蔡佳 黄瑜 汤菊芬 牟希东 杨叶欣 王蓓 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第3期372-381,共10页
为研究巴西苏木素(Brazilin)穿透血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的能力,探究巴西苏木素治疗罗非鱼脑部疾病的可行性,筛选抑菌效果良好的中草药苏木,建立了测定尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)血脑屏障体外模型中巴西苏木素的UPLC... 为研究巴西苏木素(Brazilin)穿透血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的能力,探究巴西苏木素治疗罗非鱼脑部疾病的可行性,筛选抑菌效果良好的中草药苏木,建立了测定尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)血脑屏障体外模型中巴西苏木素的UPLC-MS/MS分析方法。研究表明:试验中使用的36味中草药中,苏木水提物对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的体外抑菌效果最好,选择其有效成分巴西苏木素进行后续试验;CCK8试验结果显示,在试验浓度范围内,巴西苏木素对构成血脑屏障的罗非鱼脑内皮细胞(TVEC-01)和罗非鱼星形胶质细胞(TA-02)生长无明显抑制作用;浓度为20、40、80μmol/L的巴西苏木素均能下调紧密连接蛋白JAM-B、ZO-1、Claudin-5的表达水平(P<0.05);给药30 min后即可在血脑屏障模型下池样品中检测到巴西苏木素,且穿透浓度随给药浓度的增加而增加。结果表明,巴西苏木素能透过血脑屏障发挥抑菌作用,可为筛选治疗罗非鱼脑部疾病的药物提供科学参考。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 血脑屏障 无乳链球菌 巴西苏木素 LC-MS
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尼罗罗非鱼LCP1基因的克隆、表达及功能分析
8
作者 李伟富 袁嘉翊 +3 位作者 张湘东 汪志文 夏洪丽 鲁义善 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第5期761-770,共10页
为研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)LCP1基因的分子特征及其在抵抗无乳链球菌免疫应答中的潜在功能,从尼罗罗非鱼中克隆出了LCP1基因,命名为OnLCP1,并对该基因进行生物信息学分析和亚细胞定位分析;运用荧光定量PCR技术分析了经灭... 为研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)LCP1基因的分子特征及其在抵抗无乳链球菌免疫应答中的潜在功能,从尼罗罗非鱼中克隆出了LCP1基因,命名为OnLCP1,并对该基因进行生物信息学分析和亚细胞定位分析;运用荧光定量PCR技术分析了经灭活无乳链球菌免疫刺激后OnLCP1在各组织中mRNA的表达情况;采用双荧光素酶报告系统检测了过表达LCP1对NF-κB、STAT1、ISRE、IFN-1和IFN-3信号通路活性的影响。结果显示,OnLCP1包含1857个碱基对,可编码一个618氨基酸的蛋白质,On LCP1蛋白被鉴定含有EF臂结构域(钙结合结构域)和两个串联的肌动蛋白结合结构域(ABD),每个肌动蛋白结合结构域均包含两个钙调蛋白同源(CH)结构域;On LCP1是一个无跨膜的细胞外蛋白,与人类LCP1蛋白的三维结构高度相似,表明其功能可能是保守的;荧光定量PCR分析显示,OnLCP1基因在健康尼罗罗非鱼的不同组织中均有表达,尤其在脾脏中表达量最高;研究发现,经灭活无乳链球菌免疫后,OnLCP1基因在免疫器官中的表达量显著增加,表明其可能参与了对病原菌的免疫应答;亚细胞定位显示,OnLCP1在HEK-293T细胞的细胞质中表达;双荧光素酶报告系统显示,OnLCP1显著提高了NF-κB信号通路的活性(P<0.05),表明该分子可能通过NF-κB通路介导罗非鱼抵御无乳链球菌感染。本研究结果为进一步研究LCP1基因在鱼类先天免疫中的功能提供了科学参考。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 LCP1基因 无乳链球菌 mRNA表达分析
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尼罗罗非鱼表皮生长因子受体基因EGFR组织表达、肠道定位及功能分析
9
作者 朱伟娟 王章 +6 位作者 刘洪 唐程林 刘志刚 衣萌萌 王淼 曹建萌 可小丽 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第5期717-729,共13页
为研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)表皮生长因子受体基因EGFR(epidermal growth factor receptor)在无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的作用,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription ... 为研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)表皮生长因子受体基因EGFR(epidermal growth factor receptor)在无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的作用,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)技术分别检测了该基因在无乳链球菌感染前后,以及脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidy acid,Ploy I∶C)刺激前后罗非鱼各组织的表达水平;同时运用免疫荧光检测技术,对无乳链球菌感染前后罗非鱼中肠组织EGFR蛋白的表达进行了定位分析。结果表明:罗非鱼EGFR基因cDNA序列长度为5405 bp,开放阅读框(ORF)为3621 bp,可编码1206个氨基酸;该基因具有EGFRX1、X2和X33个不同mRNA剪接异构体;其中EGFRX1和EGFRX2含有1个跨膜结构域,EGFRX3则不含跨膜结构域;EGFRX1、EGFRX2、EGFRX3的蛋白质序列间一致性为77.86%;经无乳链球菌感染后,脾表达量显著降低(P<0.05);肠、肝脏24 h表达量显著升高(P<0.05);经Ploy I∶C刺激后,肠组织表达量显著升高,8 h达峰值;鳃、脾EGFR基因表达量呈先上升后下降再上升趋势;EGFR蛋白在罗非鱼中肠浆膜、黏膜层、黏膜下层和肌肉层中均有阳性表达,感染无乳链球菌后,肠道浆膜层中的EGFR蛋白分布密度和阳性面积占比均显著上升(P<0.05),且黏膜层杯状细胞明显增多。研究表明,罗非鱼EGFR不同剪切体可能存在功能差异,EGFR基因的表达与罗非鱼黏膜免疫功能相关,且EGFR蛋白可能通过促进黏液分泌来增强肠道屏障的修复,本研究结果为后续罗非鱼EGFR基因的功能解析提供了有益参考。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 表皮生长因子受体 无乳链球菌 基因表达 免疫组化
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乳源无乳链球菌的分离鉴定、耐药与毒力特征及基因组分析
10
作者 高姣姣 郑楠 +3 位作者 邵伟 陈贺 马宪兰 赵艳坤 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1301-1316,共16页
【目的】无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一,明确无乳链球菌的耐药、毒力和基因组特性对无乳链球菌的耐药机制研究具有重要意义。【方法】本研究采用平板划线法将乳样接种于血平板上进行细菌分离纯化,采用形态学观察、革兰染... 【目的】无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一,明确无乳链球菌的耐药、毒力和基因组特性对无乳链球菌的耐药机制研究具有重要意义。【方法】本研究采用平板划线法将乳样接种于血平板上进行细菌分离纯化,采用形态学观察、革兰染色镜检及分子生物学方法对分离菌进行鉴定。采用微量肉汤稀释法检测分离菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),采用PCR方法检测分离株菌的8种耐药基因和14种毒力基因,利用全基因组测序技术对分离菌进行耐药基因、毒力基因、基因组功能分析。【结果】本研究从36个样本中成功分离出2株菌,在血琼脂平板上表现为白色、圆形、光滑且凸起的菌落,镜检可见紫色球状革兰阳性菌体。生化鉴定结果显示,分离菌呈β-溶血,接触酶试验结果为阴性。2株分离菌16S rDNA PCR扩增均获得大小为1500 bp的条带,测序结果显示分离菌与无乳链球菌ATCC 13813相似性均>99.93%,从分子水平上鉴定2株分离菌为无乳链球菌,并将其分别命名为S1、S2。血清型和分子分型结果显示,菌株S1血清型为Ⅱ型,分子分型为ST312;菌株S2血清型为Ⅲ型,分子分型为ST309。药敏试验结果显示,菌株S1和S2对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、苯唑西林、头孢噻呋、磺胺异噁唑和复方新诺明表现出高度敏感性。菌株S1对四环素和克林霉素耐药,而菌株S2则对四环素、红霉素和克林霉素耐药。此外,菌株S2中检测到tetO和ermB耐药基因,其他耐药基因未被发现。在毒力基因方面,菌株S1和S2均检测到了cfb、bca、iagA、bibA、cspA、pavA、si p、hylB和fbsA基因。基因组分析显示,菌株S1具有一条大小为2.44 Mb的环状染色体,GC含量为36.34%,预测含有2448个基因。菌株S2的环状染色体大小为2.56 Mb,GC含量为36.59%,预测含有2576个基因。通过构建系统发育树发现,菌株S1与英国无乳链球菌NCTC13947株一致性最高;S2与英国无乳链球菌NCTC8184亲缘性最近。【结论】本研究从36份奶牛乳房炎样本中分离得到2株无乳链球菌S1和S2,对多种抗菌药敏感,但同时也表现出耐药性。基因组分析揭示了其耐药和毒力基因,为进一步研究无乳链球菌的耐药性和毒力提供了数据支持。 展开更多
关键词 无乳链球菌 耐药基因 毒力因子 基因组
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4株CAMP阴性无乳链球菌的全基因测序分析
11
作者 王秀 姚杰 +2 位作者 冷贵云 唐伟 周强 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第4期707-711,共5页
目的探讨4株CAMP阴性无乳链球菌(S.agalactiae)的全基因组测序分子特征。方法应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选可疑菌株。对于确认为S.agalactiae的菌株,进一步开展CAMP试验。针对CAMP阴性菌株,利用MGI DNBSEQ-T... 目的探讨4株CAMP阴性无乳链球菌(S.agalactiae)的全基因组测序分子特征。方法应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选可疑菌株。对于确认为S.agalactiae的菌株,进一步开展CAMP试验。针对CAMP阴性菌株,利用MGI DNBSEQ-T7和MinION Flow Cell测序平台进行全基因组测序。测序结果重点分析多位点序列分型(MLST)、毒力基因和耐药基因。采用全自动Phoenix M50药敏仪对CAMP阴性菌株进行药敏检测。结果4株CAMP阴性S.agalactiae被纳入研究。全基因组测序分析显示,4株CAMP阴性菌株均为ST862型;携带22种与荚膜多糖、β-溶血素和透明质酸酶相关的毒力基因,以及7种与大环内酯类、林可酰胺类、多肽类和氨基糖苷类相关的耐药基因。药敏结果显示,4株CAMP阴性菌株对青霉素G、头孢吡肟、头孢噻肟、万古霉素、利奈唑胺、左氧氟沙星、莫西沙星和氯霉素均敏感;其中3株对红霉素耐药;1株对克林霉素耐药。结论4株CAMP阴性S.agalactiae均为ST862型,携带多种毒力基因及耐药基因,对红霉素耐药率高,应引起临床重视。 展开更多
关键词 无乳链球菌 CAMP阴性 全基因组测序 多位点序列分型 毒力基因 耐药基因
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CAMP阴性无乳链球菌的鉴定及耐药特征
12
作者 王秀 冷贵云 +1 位作者 唐伟 周强 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期142-146,共5页
目的探究CAMP阴性无乳链球菌的鉴定及耐药特征。方法应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和CAMP试验,鉴定33株疑似无乳链球菌。16S rDNA验证CAMP阴性菌株;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测CAMP阴性菌株的cfb基因;... 目的探究CAMP阴性无乳链球菌的鉴定及耐药特征。方法应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和CAMP试验,鉴定33株疑似无乳链球菌。16S rDNA验证CAMP阴性菌株;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测CAMP阴性菌株的cfb基因;微量肉汤稀释法进行药敏检测,对比CAMP阴性和阳性菌株的耐药率。结果MALDI-TOF MS鉴定显示,33株均为无乳链球菌。CAMP试验表明,其中7株阴性,经16S rDNA完成菌株验证。这7株的qPCR结果显示,只有1株检出cfb,为阳性。药敏报告显示,CAMP阴性和阳性菌株对青霉素G、头孢吡肟、头孢噻肟、万古霉素和利奈唑胺均敏感,前者对氯霉素和四环素的耐药率(28.57%、85.71%)略高于后者(15.38%、57.69%),对莫西沙星、左氧氟沙星和红霉素的耐药率(14.29%、14.29%、42.86%)略低于后者(34.62%、34.62%、57.69%),但差异无统计学意义。结论CAMP阴性无乳链球菌的耐药性无异于CAMP阳性菌株,但传统的CAMP试验和只针对cfb的qPCR的鉴定,容易造成临床漏检。MALDI-TOF MS是一项快速、简便、准确的鉴定技术,值得推广。 展开更多
关键词 无乳链球菌 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 CAMP试验 16S rDNA 荧光定量聚合酶链式反应 CFB
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抗无乳链球菌罗非鱼及其杂交后代的鳃和尾鳍组织细菌16S rRNA测序分析
13
作者 刘奕 吴昊天 +3 位作者 陈丽婷 严欣 肖俊 陆颖 《南方农业学报》 北大核心 2025年第6期1813-1822,共10页
【目的】探究抗无乳链球菌良种壮罗1号罗非鱼抗病机制与细菌群落的关系及其在杂交后代中的遗传效应,为通过杂交育种选育兼具快速生长和抗病性状的罗非鱼提供理论依据。【方法】以吉富罗非鱼和壮罗1号罗非鱼为亲本进行自交和杂交,获得吉... 【目的】探究抗无乳链球菌良种壮罗1号罗非鱼抗病机制与细菌群落的关系及其在杂交后代中的遗传效应,为通过杂交育种选育兼具快速生长和抗病性状的罗非鱼提供理论依据。【方法】以吉富罗非鱼和壮罗1号罗非鱼为亲本进行自交和杂交,获得吉富自交F_(1)代、壮罗1号自交F_(1)代、吉富×壮罗1号杂交F_(1)代、壮罗1号×吉富杂交F_(1)代。采集4组罗非鱼的鳃和尾鳍组织,对16S rRNA的V3~V4区进行测序,分析不同样本细菌群落结构,采用基于线性判别分析的效应大小分析(LEfSe)筛选不同样本细菌群落间具有显著差异的生物标志物。【结果】Alpha多样性分析结果表明,壮罗1号自交F_(1)代鳃和尾鳍细菌群落的Shannon指数、Shannon even指数和Simpson指数均明显小于吉富自交F_(1)代。壮罗1号×吉富杂交F_(1)代和吉富×壮罗1号杂交F_(1)代的细菌群落多样性也整体较吉富自交F_(1)代明显下降。Beta多样性分析结果表明,壮罗1号×吉富杂交F_(1)代、吉富×壮罗1号杂交F_(1)代的鳃和尾鳍细菌群落组成较接近壮罗1号自交F_(1)代,说明壮罗1号的细菌群落结构具有较好的遗传可继承性。壮罗1号自交F_(1)代、壮罗1号×吉富杂交F_(1)代、吉富×壮罗1号杂交F_(1)代鳃和尾鳍细菌群落中,好氧或兼性厌氧菌栖水菌属(Enhydrobacter)的相对丰度明显高于吉富自交F_(1)代。壮罗1号自交F_(1)代鳃细菌群落中筛选到的生物标志物包含嗜酸菌2013Ark19i。【结论】壮罗1号罗非鱼鳃细菌群落中存在相对丰度较高的需氧菌和嗜酸菌,表明鳃黏液形成了酸性环境,不利于无乳链球菌生长,而需氧菌能通过竞争性耗氧抑制无乳链球菌生长,推测壮罗1号罗非鱼的抗病机制与其细菌群落密切相关,且其细菌群落结构具有可遗传性,使杂交后代具有接近壮罗1号罗非鱼的抗病能力。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 细菌群落 抗病 16S rRNA测序
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壳寡糖与抗生素联用对无乳链球菌体外抑菌效果研究
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作者 瓦仁乐乐 黄浩 丁月霞 《现代农业研究》 2025年第7期56-61,共6页
为了研究壳寡糖(COS)对无乳链球菌(GBS)的抗菌作用以及作为辅助用药联合抗生素使用的效果,试验采用微量肉汤二倍稀释法对不同pH值下壳寡糖对无乳链球菌的MIC和MBC,以及抗生素单用及壳寡糖与抗生素联用时的抑菌和杀菌效果进行了研究。利... 为了研究壳寡糖(COS)对无乳链球菌(GBS)的抗菌作用以及作为辅助用药联合抗生素使用的效果,试验采用微量肉汤二倍稀释法对不同pH值下壳寡糖对无乳链球菌的MIC和MBC,以及抗生素单用及壳寡糖与抗生素联用时的抑菌和杀菌效果进行了研究。利用分光光度计检测在壳寡糖作用下对无乳链球菌的生长曲线,使用多功能酶标仪测定壳寡糖作用下无乳链球菌生物被膜生成量。结果表明:在选用的九种抗生素里,单用时,磺胺间甲氧嘧啶钠、盐酸多西环素和恩诺沙星的抑菌效果最佳,MIC均小于0.5μg/mL;九种抗生素与壳寡糖联用的MIC均小于0.5μg/mL;无乳链球菌生长曲线显示第3小时开始,除100 mg/mL浓度的壳寡糖外,各浓度组均表现为抑制生长作用。100 mg/mL的壳寡糖浓度组从第5小时开始表现抑制生长作用,同时,pH在5.5~6.0范围内,壳寡糖对无乳链球菌的抑菌效果最佳。说明壳寡糖与替米考星联用对抑菌效果的提升最为显著,这可为指导临床用药提供参考。 展开更多
关键词 壳寡糖 抗生素 生物被膜 无乳链球菌 抑菌
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尼罗罗非鱼IL-34基因克隆及其在抗菌免疫应答中的功能研究
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作者 梁富 张璐 +6 位作者 李晓暖 唐怀庆 谢理滔 梁莹 黄振檀 喻大鹏 宋海霞 《广东农业科学》 2025年第6期130-142,共13页
【目的】克隆尼罗罗非鱼白细胞介素-34(IL-34)基因,开展生物信息学分析,研究其在罗非鱼不同组织的表达模式,并探究其在不同刺激下头肾、脾脏和外周血的表达差异,为IL-34在罗非鱼细菌感染中的免疫调控作用提供参考。【方法】根据尼罗罗非... 【目的】克隆尼罗罗非鱼白细胞介素-34(IL-34)基因,开展生物信息学分析,研究其在罗非鱼不同组织的表达模式,并探究其在不同刺激下头肾、脾脏和外周血的表达差异,为IL-34在罗非鱼细菌感染中的免疫调控作用提供参考。【方法】根据尼罗罗非鱼OnIL-34基因序列设计引物,鉴定出OnIL-34同源物,克隆OnIL-34编码区序列(CDS),对其氨基酸序列、蛋白结构域组成及系统发育进行分析,并通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测该基因在不同健康组织中的分布,以及在无乳链球菌、嗜水气单胞菌和脂多糖(LPS)刺激后的表达变化。【结果】OnIL-34开放阅读框(ORF)长648 bp,编码215个氨基酸,预测蛋白分子量为25.26 kDa,理论等电点为8.52。蛋白序列包含1个含20个氨基酸的跨膜结构域,N端有含189个氨基酸的胞外结构域。系统进化树分析表明,尼罗罗非鱼IL-34氨基酸序列与图形斑马鼻蝶(Simochromis diagramma)相似度最高、为98.6%,且系统进化树结果显示其与图形斑马鼻蝶IL-34聚为一支。qRT-PCR结果显示,OnIL-34在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,其中在胃中表达量最高,是肠道组织的26.26倍;其次为肝脏、心脏、和鳃,分别为肠道组织的26.09、17.14、15.85倍。罗非鱼感染无乳链球菌和嗜水气单胞菌后,IL-34在头肾中的表达显著上调(P<0.05);而在LPS刺激6 h后IL-34在外周血中表达显著上调,24 h后在头肾中表达显著上调;在无乳链球菌、嗜水气单胞菌和LPS体外刺激后,头肾、脾脏和外周血白细胞中IL-34表达量均显著上调。【结论】在病原菌感染和LPS刺激后,尼罗罗非鱼IL-34在免疫组织中表达上调,初步证实其在病原体感染、宿主免疫防御和炎症反应具有重要作用,但其具体的免疫调控途径还需进一步探究。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 IL-34 基因克隆 无乳链球菌 嗜水气单胞菌 脂多糖 表达特征
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无乳链球菌性奶牛乳房炎及其防治研究进展
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作者 陈遥 《中国奶牛》 2025年第9期26-31,共6页
无乳链球菌是一种高度传染性致病菌,可感染奶牛引起无乳链球菌性乳房炎,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。本文主要综述了目前无乳链球菌性奶牛乳房炎的临床特征、病原学、流行病学、致病机理、防治措施(包括药物治疗和疫苗研发)等方面... 无乳链球菌是一种高度传染性致病菌,可感染奶牛引起无乳链球菌性乳房炎,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。本文主要综述了目前无乳链球菌性奶牛乳房炎的临床特征、病原学、流行病学、致病机理、防治措施(包括药物治疗和疫苗研发)等方面的研究进展,旨在为预防和治疗无乳链球菌引发的奶牛乳房炎提供新思路和方向。 展开更多
关键词 无乳链球菌 奶牛乳房炎 致病机理 炎症反应 疫苗研发
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广东地区感染养殖罗非鱼的无乳链球菌分子分型研究 被引量：8
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作者 方伟 梁宇恒 +6 位作者 宁丹 柯碧霞 柯昌文 邓小玲 彭华林 孙九峰 王云新 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期97-101,110,共6页
以广东省内5个罗非鱼Oreochromis niloticus主要养殖区内分离的无乳链球菌Streptococcus agalactiae为研究目标,通过毒力基因PCR检测、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳技术研究广东地区感染罗非鱼的无乳链球菌分子特征。结果发现170株... 以广东省内5个罗非鱼Oreochromis niloticus主要养殖区内分离的无乳链球菌Streptococcus agalactiae为研究目标,通过毒力基因PCR检测、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳技术研究广东地区感染罗非鱼的无乳链球菌分子特征。结果发现170株分离无乳链球菌中毒力基因的携带率介于60.59%~100%之间,毒力基因携带形成10个谱系,dltR-bca-sod A-spb1-cfb-bac（38.24%,65/170）,dltr-bca-sod A-spb1-bac（23.53%,40/170）和dltr-bca-sod A-spb1-cfb-bac-scp B（22,35%,38/170）为主要的谱系,dltr-bca-sod A-spb1-bac-scpb（8.24%,14/170）和dltr-bca-sod A-spb1（4.71%,8/170）次之。多位点序列分型研究证实170株菌在7个位点均为单一的等位基因,为adh P（10）,phe S（1）,atr（2）,gln A（1）,sdh A（3）,glc K（2）,tkt（2）,序列型为ST7型。146株菌脉冲场凝胶电泳结果表明146株菌分为6个簇（A-D,F,G）,相似性介于86%~100%之间。A（18）,B（16）,C（103）,D（7）为主要的遗传簇,占菌株数的98.63%（144/146）。基因簇A,C在4个采样区均有发现;基因簇B分布在吴川、茂名和阳江;基因簇D分布在茂名、珠海和阳江;基因簇F和G分别来自茂名和珠海。在A-D遗传簇中均有发现来自不同地区的菌株呈现100%的相似性,为同一克隆株。结果表明广东省主要罗非鱼养殖区内感染链球菌携带毒力基因比率高,序列型均为高致病的ST7型别,不同地区间具有相同的PFGE型别,不同地区间交叉传播感染的可能高。 展开更多
关键词 罗非鱼Oreochromis NILOTICUS 无乳链球菌Streptococcus agalactiae 毒力基因 MLST PFGE
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一株梭鲈源无乳链球菌的分离、鉴定及分子分型分析 被引量：6
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作者 赵长臣 江小燕 +5 位作者 刘春花 张德峰 罗霞 曾伟伟 陈总会 黄志斌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第3期61-67,共7页
为查明梭鲈(Lucioperca lucioperca)凸眼病病原,从患病梭鲈病灶眼、肝、脾和肾分离纯化病原菌,进行了生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析,并开展人工感染试验,测定其血清型及MLST分型,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。结果显示... 为查明梭鲈(Lucioperca lucioperca)凸眼病病原,从患病梭鲈病灶眼、肝、脾和肾分离纯化病原菌,进行了生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析,并开展人工感染试验,测定其血清型及MLST分型,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。结果显示:分离菌株(命名为SL1701株)为本次引发梭鲈病害的致病菌,Ib-ST261型。回归感染实验证实,分离得到的细菌SL1701对健康梭鲈具有非常强的致病性,4.5×105CFU/m L时可使80%受感染梭鲈死亡,并可复制出自然发病鱼的症状。菌株SL1701革兰氏染色为阳性链球菌,γ溶血,生理生化特性与普通无乳链球菌基本一致,16S rRNA基因序列与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)同源性最高,综合判定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。药敏试验结果显示:分离菌株SL1701对氟苯尼考、氟罗沙星等17种抗生素高度敏感,对青霉素、磷霉素等8种抗生素耐药。结果表明,分离菌株SL1701为Ib-ST261型无乳链球菌,养殖时可选用氟苯尼考及氟罗沙星等药物进行防控。 展开更多
关键词 梭鲈(Lucioperca lucioperca) 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) γ溶血 16S RRNA 生理生化 药物敏感性
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牛源性无乳链球菌分离鉴定及cfb基因的克隆和真核表达载体的构建 被引量：3
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作者 阚威 王华 +2 位作者 马友记 赵兴绪 张勇 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期39-44,共6页
为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报... 为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列,经ORF分析和B细胞表位预测,利用Primer 5.0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物,添加酶切位点和真核表达元件,以分离株无乳链球菌的基因组为模板,PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序,经测序确定无误后,连接pcDNATM3.1 V5-His A(pcDNA-cfb)真核载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒进行酶切和测序鉴定。结果显示,从89份隐性奶牛乳房炎奶样中分离得到8株无乳链球菌,成功构建了真核表达载体(pcDNA-cfb)。THB和色素试验初步筛选,可以作为快速分离无乳链球菌的一种方法,利用Bcepred和Lasergene-Protean软件对分离得到的无乳链球菌cfb基因序列分析,在所克隆的cfb基因序列内有多个优势抗原表位,因此,有望作为无乳链球菌基因工程疫苗研制的抗原靶标基因序列,为进一步研究其基因工程疫苗提供基础条件。 展开更多
关键词 奶牛隐性乳房炎 无乳链球菌 cfb基因 真核载体构建
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无乳链球菌不同途径感染吉富罗非鱼后病原菌在体内的分布规律研究 被引量：4
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作者 朱佳杰 沈夏霜 +5 位作者 罗伟 敖秋桅 谭芸 罗永巨 蒋和生 甘西 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第4期76-80,共5页
为探讨无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染罗非鱼(Oreochromis spp)的致病途径。采用腹腔注射、灌胃和浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)胁迫感染,利用平板活菌计数法统计三种方式感染后病原菌在体内组织的分... 为探讨无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染罗非鱼(Oreochromis spp)的致病途径。采用腹腔注射、灌胃和浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)胁迫感染,利用平板活菌计数法统计三种方式感染后病原菌在体内组织的分布。注射和灌胃两种方式感染后均出现典型的链球菌感染发病症状,其中注射组在感染24 h后出现死亡高峰,死亡率为92.5%;灌胃组感染48 h后出现死亡高峰,死亡率为90%;而浸泡组,感染后均没有出现明显的发病症状,也没有出现死鱼。注射组和灌胃组在感染后2 h,其脾脏、肝脏、前肾、胃、腮、皮肤和肌肉组织中均可分离出病原菌,5 h后在脑组织中均可分离出病原菌,8 h后各组织分离出的病原菌数达到峰值;而浸泡组在感染8 h后才从各组织中分离出病原菌,且它们的数量均低于同时期的注射组和灌胃组。注射和灌胃两种方式可使吉富罗非鱼快速感染无乳链球菌而发病,而浸泡方式感染后病原菌虽可以侵入机体,但不表现出症状。由此,我们推测在自然条件下养殖的罗非鱼是通过口腔采食携带无乳,链球菌的食物而被感染。 展开更多
关键词 吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus) 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) 致病途径
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