草兔卵透明带3(ZP3)基因的克隆及序列分析 被引量：6

1

作者 张浩 韩崇选 +2 位作者 郑雪莉 吴景龙 隋丹丹 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期63-68,共6页

根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基... 根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基酸,包含一个完整的开放阅读框(ORF)。与欧洲兔ZP3基因核苷酸一致性高达96%。预测的ZP3蛋白具有ZP家族典型特征。系统进化树显示其与欧洲兔亲缘关系最近,其次是啮齿目动物,符合物种进化规律。hZP3基因编码区的成功克隆,为进一步利用该基因通过免疫不育手段防治森林草兔危害提供了基础。 展开更多

关键词 草兔 卵透明带3(zp3) 克隆 序列分析

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牦牛ZP3基因的克隆及蛋白质结构的预测 被引量：5

2

作者 徐华伟 字向东 +3 位作者 黄磊 陈达文 穆晓琨 王红梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期156-161,167,共7页

本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(Ge... 本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(GenBank登录号为GQ856646),利用DNAMAN生物软件进行核苷酸和氨基酸序列分析、蛋白质专家系统ExPASy进行ZP3蛋白质分子结构预测。结果表明,扩增出的牦牛ZP3基因编码序列长1 266 bp,编码421个氨基酸。牦牛与牛、猪、狗、人、鼠和鸡ZP3基因核苷酸相应序列的同源性分别为98.42%、96.73%、79.67%、78.71%、69.15%和56.61%,氨基酸同源性分别为98.10%、83.85%、74.24%、70.26%、62.62%和46.12%,符合物种进化规律。预测的ZP3蛋白二级和三级结构显示它是一个具有22个氨基酸信号肽的亲水性β-桶状跨膜蛋白。牦牛ZP3基因编码区的成功克隆,为进一步研究该基因的结构与功能及其在受精过程中的作用提供了基础。 展开更多

关键词 牦牛 zp3基因 克隆 分子结构

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GnRH-A及其配伍对鲤鱼ZP3基因表达的影响 被引量：5

3

作者 宋艳 夏庆杰 +4 位作者 扬松沛 胡大芳 马世荣 张发强 闫乃红 《西南农业学报》 CSCD 2006年第1期149-151,共3页

运用逆转录实时荧光定量酶链反应(RT-FQ-PCR)技术,研究GnRH-A及其配伍对鱼卵成熟、受精相关基因ZP3的调控。结果显示:3种不同药物配伍分别使鲤鱼ZP3基因表达在给药处理后4、6和12 h达到峰值。提示:不同配伍药物对鱼卵成熟、受精产生影响... 运用逆转录实时荧光定量酶链反应(RT-FQ-PCR)技术,研究GnRH-A及其配伍对鱼卵成熟、受精相关基因ZP3的调控。结果显示:3种不同药物配伍分别使鲤鱼ZP3基因表达在给药处理后4、6和12 h达到峰值。提示:不同配伍药物对鱼卵成熟、受精产生影响。ZP3基因可作为促繁殖药筛选的重要指标。 展开更多

关键词 促繁殖药物 逆转录实时荧光定量酶链反应 鲤鱼zp3基因表达

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人ZP3B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成 被引量：2

4

作者 曹佐武 杨林 +1 位作者 潘善培 王自能 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2000年第4期42-45,共4页

目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA... 目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA序列。然后人工合成该嵌合肽的DNA链 ,并克隆到PUC18载体上。结果 :通过酶切分析和测序证明 ,合成的DNA与所设计的嵌合肽DNA序列一致。结论 :　按设计合成了人ZP3的B细胞表位和外源Th细胞表位串联而成的嵌合肽DNA序列。 展开更多

关键词 人zp3 透明带基因 B细胞表位 嵌合肽 DNA序列

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蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用 被引量：1

5

作者 谢琪璇 郑育声 +3 位作者 彭雅林 肖銮娟 余巍 潘善培 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1208-1210,共3页

目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ... 目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论　该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。 展开更多

关键词 层析 蛋白 定量 重组人卵透明带zp3蛋白 纯化

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密码子植物化的小鼠ZP3蛋白基因人工合成 被引量：1

6

作者 芦春斌 《种子》 CSCD 北大核心 2009年第5期21-23,共3页

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3... 对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3基因的编码区。DNA序列测定人工合成的基因为植物化的ZP 3基因。 展开更多

关键词 小鼠zp3蛋白基因 重叠PCR 合成 植物反应器

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人ZP3 186S突变蛋白在毕赤酵母X33细胞中的表达

7

作者 王弘駂 李质馨 +4 位作者 田洪艳 徐冶朱 辛为 林冬静 窦肇华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期910-912,918,共4页

目的:利用毕赤酵母表达人ZP3186S蛋白(23～348氨基酸),为临床相关疾病的诊断提供实验材料。方法:经PCR获得编码人ZP3(23～348氨基酸)的基因,构建表达载体pPICZα-hZP3。将ZP3186位点精氨酸突变为丝氨酸构建pPICZα-hZP3186S质粒。转染... 目的:利用毕赤酵母表达人ZP3186S蛋白(23～348氨基酸),为临床相关疾病的诊断提供实验材料。方法:经PCR获得编码人ZP3(23～348氨基酸)的基因,构建表达载体pPICZα-hZP3。将ZP3186位点精氨酸突变为丝氨酸构建pPICZα-hZP3186S质粒。转染毕赤酵母X33细胞,用高浓度Zeocin筛选转染细胞,甲醇诱导目的蛋白分泌,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定人ZP3186S蛋白。结果:pPICZα-hZP3186S表达质粒经测序正确,并在毕赤酵母X33中能够高效表达。结论:毕赤酵母能够分泌性表达重组人ZP3186S蛋白(23～348氨基酸),进一步研究其生物学活性为研制不孕症诊断试剂和免疫避孕疫苗提供实验材料。 展开更多

关键词 透明带 人zp3蛋白 毕赤酵母 基因表达

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银鲫ZP3的表达特征和卵壳ZP3蛋白的分离

8

作者 陈波 郭葳 桂建芳 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期233-238,共6页

克隆得到银鲫(Carassius auratus gibelio)ZP3基因全长cDNA,在体外表达出银鲫的ZP3融合蛋白,并制备出多抗血清;通过免疫印迹和RT-PCR分析,研究了银鲫ZP3在卵子发生过程中的表达特征和在早期发育胚胎中的状态变化。研究结果表明,银鲫ZP3... 克隆得到银鲫(Carassius auratus gibelio)ZP3基因全长cDNA,在体外表达出银鲫的ZP3融合蛋白,并制备出多抗血清;通过免疫印迹和RT-PCR分析,研究了银鲫ZP3在卵子发生过程中的表达特征和在早期发育胚胎中的状态变化。研究结果表明,银鲫ZP3的转录发生在卵黄发生以前,而ZP3蛋白的翻译起始于卵黄形成阶段,且随着卵母细胞进一步成熟,其含量不断增加。ZP3蛋白的存在状态在受精后和早期胚胎发育过程中发生了明显变化。在受精后5—30min期间,抽提液中原始的ZP3蛋白带迅速消失,取而代之的是分子量大约为90KD以及更高分子量的蛋白带;而在受精后80min和8—16胞期的胚胎抽提液中,二聚体和多聚体复合体蛋白带也相继消失。这种状态变化意味着ZP3蛋白在卵子受精后有可能与自身或其他蛋白共价结合转变成了二聚体和多聚体。接着,用获得的ZP3抗体作为检测指标,通过卵壳蛋白的凝胶分离,从卵壳中分离纯化出银鲫ZP3蛋白。 展开更多

关键词 zp3蛋白 银鲫 分离 纯化 卵壳 基因克隆 基因表达 卵母细胞透明带

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小体鲟卵透明带家族ZP3亚型和ZPAX基因cDNAs克隆及其组织表达分析 被引量：1

9

作者 东天 朱华 +3 位作者 王巍 董颖 田照辉 胡红霞 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期444-454,共11页

为研究透明带ZP家族在小体鲟Acipenser ruthenus性腺发育、卵子发生等过程中所发挥的作用,采用PCR技术克隆获得小体鲟卵透明带家族ZP3 3种亚型(ArZP3-1、ArZP3-4、ArZP3-5)及ZPAX基因(ArZPAX)cDNA部分序列。结果表明:ArZP3-1部分cDNA序... 为研究透明带ZP家族在小体鲟Acipenser ruthenus性腺发育、卵子发生等过程中所发挥的作用,采用PCR技术克隆获得小体鲟卵透明带家族ZP3 3种亚型(ArZP3-1、ArZP3-4、ArZP3-5)及ZPAX基因(ArZPAX)cDNA部分序列。结果表明:ArZP3-1部分cDNA序列长度为1029 bp,对应编码342个氨基酸;ArZP3-4部分cDNA序列长度为1191 bp,对应编码397个氨基酸;ArZP3-5部分cDNA序列长度为717 bp,对应编码238个氨基酸;ArZPAX部分cDNA序列长度为733 bp,对应编码243个氨基酸;ArZP3蛋白3种亚型及ArZPAX蛋白氨基酸序列中均含有一个保守的ZP结构域;基于ZP氨基酸序列的系统发育树显示,小体鲟ArZP3蛋白3种亚型与高等鱼类ZP3亲缘关系较近,而ArZPAX蛋白则与哺乳类、鸟类、高等鱼类和爬行类ZPAX亲缘关系均较远;通过半定量RT-PCR进行组织表达特异性分析表明,ArZP3-1基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、脑、肾、心、肌肉、鳃中表达,ArZP3-4基因仅在小体鲟卵巢和精巢中表达,而ArZPAX基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、肠、肾、脾、心、鳃、脑中均有表达,3个基因在性腺中的表达量均最高,且均具有雌、雄差异性表达特点。 展开更多

关键词 小体鲟 透明带蛋白 ZPAX 基因克隆 组织表达

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草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达 被引量：1

10

作者 吴景龙 隋丹丹 +4 位作者 张冬辉 周智敏 李昊 郑雪莉 韩崇选 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第11期9-16,23,共9页

【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGF... 【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。 展开更多

关键词 草兔 卵透明带3基因 免疫不育 PEGFP-N1 真核表达

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分子佐剂FAI3通过滴鼻途径增强草原兔尾鼠ZP3DNA疫苗抗生育效果

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作者 涂亦娴 张富春 +3 位作者 鲍乾 李晨晨 李新萍 哈迪尔.孜比尔尼莎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1182-1185,1188,共5页

目的：探讨纤维蛋白原/白蛋白/IgG受体3（FAI3）作为分子佐剂,通过滴鼻途径增强免疫反应以提高草原兔尾鼠ZP3 DNA疫苗的抗生育效果。方法：FAI是来自C群链球菌的一种多配基结合蛋白,它能同时结合纤维蛋白原、白蛋白和免疫球蛋白G,FAI的... 目的：探讨纤维蛋白原/白蛋白/IgG受体3（FAI3）作为分子佐剂,通过滴鼻途径增强免疫反应以提高草原兔尾鼠ZP3 DNA疫苗的抗生育效果。方法：FAI是来自C群链球菌的一种多配基结合蛋白,它能同时结合纤维蛋白原、白蛋白和免疫球蛋白G,FAI的基因片段-fai3（415~702 bp）具有黏膜佐剂的功能。通过构建pcD-fai3重组质粒,用chitosan包裹质粒DNA不育疫苗pcD-Lzp3和质粒pcD-fai3,形成复合物的chi-（pcD-Lzp3＋pcD-fai3）,以及单独的chi-pcD-Lzp3和chi-pcD-fai3,三种chitosan包裹质粒,分别用这些质粒作为DNA疫苗,分别于第0、14、28、42天,通过滴鼻途径免疫小鼠。间接ELISA检测免疫小鼠血清中抗LZP3特异性IgG,IgG1和IgG2a,同时检测阴道洗液和粪便中的特异性IgA。结果：滴鼻共免疫chi-（pcD-Lzp3＋pcD-fai3）诱导产生了高水平的血清IgG和黏膜sIgA,生育率和平均窝仔数显著降低。结论：fai3作为分子佐剂与DNA不育疫苗pcD-Lzp3滴鼻共免疫小鼠,能诱导免疫小鼠产生较强的体液免疫反应和黏膜免疫反应,增强DNA不育疫苗的抗生育效果。 展开更多

关键词 草原兔尾鼠 fai3 卵透明带3DNA疫苗 抗生育 佐剂

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猪卵透明带-3α蛋白在大肠杆菌中表达的研究 被引量：4

12

作者 徐万祥 邱德义 +6 位作者 贾小明 申庆祥 顾少华 倪晓华 刘建平 牟忠明 谢毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期303-306,共4页

目的 :通过原核表达系统获得研制ZP疫苗的靶抗原。方法 :用PCR方法删除猪卵透明带 3α(pZP3α)cDNA 5’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因 5’端小片段与双酶切 3’端大片段在ApaI位点相连后 ,通过双酶切位点将读框完整的目的基因定... 目的 :通过原核表达系统获得研制ZP疫苗的靶抗原。方法 :用PCR方法删除猪卵透明带 3α(pZP3α)cDNA 5’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因 5’端小片段与双酶切 3’端大片段在ApaI位点相连后 ,通过双酶切位点将读框完整的目的基因定向插入pBV2 2 1表达质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。结果 :此重组表达质粒转化宿主菌后经热诱导培养 ,可在SDS PAGE胶上观察到 6 1kD的特异蛋白表达条带 ,而且它在Westernblot鉴定实验中能被抗pZPIgGs识别。结论 展开更多

关键词 猪zp3acDNA 大肠杆菌 基因表达 避孕疫苗

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水牛透明带3基因启动子克隆及转录活性检测 被引量：2

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作者 庞春英 陆杏蓉 +5 位作者 朱鹏 邓廷贤 段安琴 陈明棠 杨炳壮 梁贤威 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1350-1356,共7页

为了阐明水牛透明带3基因(ZP3)表达调控机理,通过PCR技术、载体构建和细胞转染等技术,对其转录活性进行了研究。结果表明:成功克隆得到广西本地水牛ZP3基因5'侧翼序列及部分编码区序列(CDS)区序列,共3 081 bp;广西本地水牛ZP3核苷... 为了阐明水牛透明带3基因(ZP3)表达调控机理,通过PCR技术、载体构建和细胞转染等技术,对其转录活性进行了研究。结果表明:成功克隆得到广西本地水牛ZP3基因5'侧翼序列及部分编码区序列(CDS)区序列,共3 081 bp;广西本地水牛ZP3核苷酸序列与河流型水牛、黄牛、绵羊和山羊的相似性分别为99%、96%、92%和92%;在ZP3翻译起始位点上游-147 bp至-196 bp处存在TATA box,启动子区存在GATAs、Foxo3、Nobox、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6和YY1等反式作用因子结合位点,其中Stats家族在ZP3启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个Stats结合的情况;水牛ZP3启动子不能启动绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)在HEK-293T细胞中的表达,但能启动其在CHO细胞中的表达,且启动子活性比CMV启动子弱。 展开更多

关键词 水牛 zp3基因 克隆分析 转录活性

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55K猪卵透明带抗原(ZP_3)的分离纯化 被引量：1

14

作者 谢琪璇 张江兰 +1 位作者 陈海玲 潘善培 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1992年第1期115-121,共7页

为了获得足量的猪卵透明带55K组分(ZP_3),以便研究其在高等灵长类恒河猴的免疫抗生育效果、生化和免疫学特性,我们根据国内条件建立了一套从猪卵巢分离纯化透明带55K组分的方法,该法包括用排刀切割卵巢回收卵子,热溶提取卵透明带组分(SI... 为了获得足量的猪卵透明带55K组分(ZP_3),以便研究其在高等灵长类恒河猴的免疫抗生育效果、生化和免疫学特性,我们根据国内条件建立了一套从猪卵巢分离纯化透明带55K组分的方法,该法包括用排刀切割卵巢回收卵子,热溶提取卵透明带组分(SIZP),Sephacryl S-400柱层析和Hydroxylapatite(HTP)柱层析分离纯化ZP_3、ZP_3的复性等步骤。采用本法,获得了在SDS-PAGE图谱上呈单一蛋白染色带并保留其抗原性的ZP_3纯品。每2000个猪卵巢可得ZP_3纯品10mg以上。 展开更多

关键词 卵透明带 分离 纯化 zp3

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草原兔尾鼠卵透明带3基因重组腺病毒载体的构建及表达 被引量：3

15

作者 陈邦党 张富春 +2 位作者 孙美玉 李轶杰 马正海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期707-710,共4页

目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径,获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗。方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体。获得的重组... 目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径,获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗。方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装成病毒颗粒。PCR鉴定重组腺病毒,继而用鉴定正确的重组腺病毒感染HeLa细胞,并以RT-PCR、Western blot检测LZP3的转录和表达。结果:成功构建了携带LZP3基因的重组腺病毒pAd-LZP3载体,其转染293细胞后包装出重组病毒,PCR证实LZP3基因已整合至腺病毒基因组中,病毒的滴度可达1.2×1010pfu/L。RT-PCR和Western blot检测表明RAd-LZP3感染的HeLa细胞中LZP3基因能够有效转录和表达。结论:制备的RAd-LZP3可成功表达LZP3基因,为后续开展RAd-LZP3免疫动物的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 草原兔尾鼠 卵透明带3 表达 重组腺病毒

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人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较

16

作者 周文燊 熊波 +4 位作者 李文星 谢琪璇 肖銮娟 张春雪 潘善培 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期117-122,共6页

目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区... 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。 展开更多

关键词 重组人卵透明带zp3蛋白 表达 跨膜区 酶切位点突变 组氨酸纯化标签

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3ZP型注聚合物泵 被引量：2

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作者 沈君芳 《石油机械》 北大核心 2001年第6期30-31,共2页

为了配合聚合物驱三次采油工艺 ,顺利地将分散溶解装置混配并经过熟化后的聚丙烯酰胺母液注入油井 ,研制出 3ZP型注聚合物泵。这种泵结构紧凑 ,体积小 ,性能可靠。经对液力端流道和阀组件进行优化设计 ,提高了泵的容积效率 ,降低了泵对... 为了配合聚合物驱三次采油工艺 ,顺利地将分散溶解装置混配并经过熟化后的聚丙烯酰胺母液注入油井 ,研制出 3ZP型注聚合物泵。这种泵结构紧凑 ,体积小 ,性能可靠。经对液力端流道和阀组件进行优化设计 ,提高了泵的容积效率 ,降低了泵对聚合物的机械降解。产品检测表明 ,在室温、浓度 50 0 0ppm和粘度 350 0mPa·s条件下 ,这种泵的容积效率≥ 95% ,剪切率≤3%。现场使用首批注聚合物泵已正常运转 2年 ,动力端运转平稳 ,柱塞平均寿命 50 0 0h ,柱塞填料平均寿命 4 50 0h ,阀组无故障运行时间平均为 50 0 展开更多

关键词 聚合物驱油 3ZP 注聚合物 往复泵 结构 特点 应用

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海兰褐蛋鸡ZP 3基因结构及其在卵泡中表达规律分析

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作者 朱帅鹏 王东雪 +4 位作者 刘聪 孙君卫 杜振伟 孙桂荣 李文婷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3366-3374,共9页

旨在探讨ZP 3基因在海兰褐蛋鸡中的表达特性,为后期研究ZP3基因在蛋鸡卵泡发育中的作用提供理论支撑。本研究以产蛋期50周龄(50 W)海兰褐蛋鸡为试验对象,利用RACE技术克隆ZP 3基因全长,并对编码区进行生物信息学分析。选择健康、体重相... 旨在探讨ZP 3基因在海兰褐蛋鸡中的表达特性,为后期研究ZP3基因在蛋鸡卵泡发育中的作用提供理论支撑。本研究以产蛋期50周龄(50 W)海兰褐蛋鸡为试验对象,利用RACE技术克隆ZP 3基因全长,并对编码区进行生物信息学分析。选择健康、体重相近的海兰褐蛋鸡6只,分别取心、肝、肺、肾、卵巢、胸肌、腿肌和不同等级卵泡构建表达谱。卵巢颗粒细胞经不同浓度(PBS、5 ng·mL^(-1)、10 ng·mL^(-1)、20 ng·mL^(-1))促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)处理后,提取总RNA,采用实时荧光定量检测ZP 3基因在各个样品的表达水平。结果表明,鸡ZP 3基因全长1415 bp,其中编码区1341 bp,共编码446个氨基酸,位于10号染色体上,包含9个外显子;其亲缘关系与猪最远;跨膜结构预测表示,其含有一个跨膜结构域和一个信号肽区域;对其亲疏水性进行分析,预测该蛋白为弱的疏水性蛋白,蛋白质结构主要由无规则卷曲构成。组织表达谱显示,ZP 3基因在鸡的卵巢中相对表达量最高。各等级卵泡ZP3表达分析显示,随着卵泡发育,ZP 3基因在成熟卵泡(F1)颗粒细胞层表达量最高;在使用FSH处理等级颗粒细胞后,发现ZP3表达量显著上调(P<0.05),暗示ZP3基因在颗粒细胞中受到FSH激素调节。本试验对ZP 3基因的结构进行了分析并预测该基因存在跨膜结构和信号肽区域。基因表达谱分析结果显示,ZP 3基因在卵泡发育过程中表达量逐渐升高且主要在颗粒细胞中表达,可能受到FSH的调节作用,因此预测,ZP 3基因可能与海兰褐蛋鸡繁殖功能相关。 展开更多

关键词 海兰褐蛋鸡 ZP 3基因 基因克隆 生物信息学 组织表达谱

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