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不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中YAP核质定位的影响
1
作者
戴义芹
张婧
徐建江
《中华实验眼科杂志》
北大核心
2025年第4期308-314,共7页
目的探讨不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中Yes相关蛋白(YAP)核质定位的影响。方法将永生化人角膜上皮细胞分为对照组和高渗组,常规培养1 d后高渗组细胞采用450 mOsM渗透压的氯化钠溶液处理1 h,对照组不做特殊处理。采用4种不同的...
目的探讨不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中Yes相关蛋白(YAP)核质定位的影响。方法将永生化人角膜上皮细胞分为对照组和高渗组,常规培养1 d后高渗组细胞采用450 mOsM渗透压的氯化钠溶液处理1 h,对照组不做特殊处理。采用4种不同的固定剂(4%多聚甲醛、-20℃预冷无水乙醇、-20℃预冷甲醇丙酮1∶1混合液、Zamboni固定液)固定细胞20 min,行免疫荧光染色,观察对照组与高渗组细胞YAP在细胞内的定位变化情况。结果4%多聚甲醛固定后,角膜上皮细胞形态较好,对照组与高渗组细胞中YAP主要集中在细胞核内,对照组与高渗组细胞核内YAP平均荧光强度比较,差异无统计学意义(t=1.803,P=0.121);无水乙醇固定后角膜上皮细胞呈现一定程度的皱缩变形,YAP荧光染色弥散,2个组细胞中YAP阳性信号主要定位在细胞质中。与对照组相比,高渗组角膜上皮细胞核中YAP平均荧光强度有所降低,差异无统计学意义(t=0.803,P=0.453)。甲醇丙酮1∶1混合液固定后角膜上皮细胞形态不佳,YAP主要定位在细胞质中,高渗组细胞核内YAP荧光强度较对照组有所降低,差异无统计学意义(t=1.067,P=0.327)。Zamboni固定液固定后细胞结构完整,轮廓清晰,能明显观察到不同状态下角膜上皮细胞中YAP核质转位现象。高渗组YAP平均荧光强度为197.5±34.5,明显高于对照组的62.2±10.0,差异有统计学意义(t=7.530,P<0.001)。结论在免疫荧光染色实验中,角膜上皮细胞中YAP的核质定位会受到不同固定剂处理的影响,应用Zamboni固定液比4%多聚甲醛、无水乙醇、甲醇丙酮1∶1混合液能更好地观察到高渗刺激后YAP的核移位现象。
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关键词
干眼
泪液渗透压
角膜上皮细胞
免疫荧光技术
固定剂
yes相关蛋白核质定位
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职称材料
YAP 1基因调控新西兰白兔肌肉生长发育
2
作者
刘雨晴
陈孟娟
+3 位作者
王亿杰
许会芬
李明
于光晴
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1765-1775,共11页
Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在哺乳动物组织中对于调节器官大小、肿瘤发生和细胞的增殖、分化、凋亡等具有重要作用。为探究YAP 1基因在新西兰白兔肌肉组织生长发育中的生物学功能,本研究通过RT-PCR从新西兰白兔腿肌...
Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在哺乳动物组织中对于调节器官大小、肿瘤发生和细胞的增殖、分化、凋亡等具有重要作用。为探究YAP 1基因在新西兰白兔肌肉组织生长发育中的生物学功能,本研究通过RT-PCR从新西兰白兔腿肌中克隆到YAP 1基因,并对其生物信息学功能、表达模式及亚细胞定位、启动下游基因表达的转录活性,以及参与调控肌肉组织生长发育的功能进行分析。结果表明,YAP1的CDS区序列长度为1302 bp,编码433个氨基酸,等电点为5.10的亲水性蛋白质,YAP1蛋白不存在信号肽和跨膜区域,其结构主要由无规则卷曲构成。系统进化树分析表明,与绵羊的亲缘关系较近,与小鼠的亲缘关系较远。亚细胞定位显示,该蛋白质在细胞核和细胞质中均有表达。RT-qPCR结果显示,YAP 1基因在新西兰白兔的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫和肌肉中均有表达,但在肌肉中的表达量最高,且在腿肌组织中表达水平较高。双荧光素酶报告基因检测结果表明,YAP 1基因第127位的丝氨酸突变为丙氨酸(YAP1-S127A),8xGTIIC的启动子活性明显增强。在肌肉细胞中过表达YAP 1基因可以加快肌肉细胞的增殖,同时上调肌球蛋白重链6(myosin heavy chain 6,MYH6)和肌细胞生成素(myogenin,MYOG)基因的mRNA表达水平,以及MYH6和肌分化因子(myogenic differentiation,MYOD)蛋白质水平,抑制肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因mRNA的表达水平。综上结果提示,YAP 1基因在新西兰白兔肌肉生长发育中发挥重要作用。本研究为后续进一步阐明YAP 1基因精准调控肌肉生长发育的分子机制奠定基础,同时为改良家兔品种提供理论依据和基因资源。
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关键词
yes
相关
蛋白
1
肌肉
家兔
亚细胞
定位
转录活性
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职称材料
题名
不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中YAP核质定位的影响
1
作者
戴义芹
张婧
徐建江
机构
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
北大核心
2025年第4期308-314,共7页
基金
国家自然科学基金(82201150、82171020)。
文摘
目的探讨不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中Yes相关蛋白(YAP)核质定位的影响。方法将永生化人角膜上皮细胞分为对照组和高渗组,常规培养1 d后高渗组细胞采用450 mOsM渗透压的氯化钠溶液处理1 h,对照组不做特殊处理。采用4种不同的固定剂(4%多聚甲醛、-20℃预冷无水乙醇、-20℃预冷甲醇丙酮1∶1混合液、Zamboni固定液)固定细胞20 min,行免疫荧光染色,观察对照组与高渗组细胞YAP在细胞内的定位变化情况。结果4%多聚甲醛固定后,角膜上皮细胞形态较好,对照组与高渗组细胞中YAP主要集中在细胞核内,对照组与高渗组细胞核内YAP平均荧光强度比较,差异无统计学意义(t=1.803,P=0.121);无水乙醇固定后角膜上皮细胞呈现一定程度的皱缩变形,YAP荧光染色弥散,2个组细胞中YAP阳性信号主要定位在细胞质中。与对照组相比,高渗组角膜上皮细胞核中YAP平均荧光强度有所降低,差异无统计学意义(t=0.803,P=0.453)。甲醇丙酮1∶1混合液固定后角膜上皮细胞形态不佳,YAP主要定位在细胞质中,高渗组细胞核内YAP荧光强度较对照组有所降低,差异无统计学意义(t=1.067,P=0.327)。Zamboni固定液固定后细胞结构完整,轮廓清晰,能明显观察到不同状态下角膜上皮细胞中YAP核质转位现象。高渗组YAP平均荧光强度为197.5±34.5,明显高于对照组的62.2±10.0,差异有统计学意义(t=7.530,P<0.001)。结论在免疫荧光染色实验中,角膜上皮细胞中YAP的核质定位会受到不同固定剂处理的影响,应用Zamboni固定液比4%多聚甲醛、无水乙醇、甲醇丙酮1∶1混合液能更好地观察到高渗刺激后YAP的核移位现象。
关键词
干眼
泪液渗透压
角膜上皮细胞
免疫荧光技术
固定剂
yes相关蛋白核质定位
Keywords
Dry eye syndrome
Tear film osmolarity
Corneal epithelial cells
Immunofluorescence
Fixatives
yes
-associated protein nuclear-cytoplasmic localization
分类号
R772.2 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
YAP 1基因调控新西兰白兔肌肉生长发育
2
作者
刘雨晴
陈孟娟
王亿杰
许会芬
李明
于光晴
机构
河南农业大学动物科技学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期1765-1775,共11页
基金
国家自然基金青年项目(No.32102833)
中国博士后科学基金第70批面上项目(No.2021M701107)
河南农业大学大学生创新创业项目(No.2022DC051)资助
文摘
Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在哺乳动物组织中对于调节器官大小、肿瘤发生和细胞的增殖、分化、凋亡等具有重要作用。为探究YAP 1基因在新西兰白兔肌肉组织生长发育中的生物学功能,本研究通过RT-PCR从新西兰白兔腿肌中克隆到YAP 1基因,并对其生物信息学功能、表达模式及亚细胞定位、启动下游基因表达的转录活性,以及参与调控肌肉组织生长发育的功能进行分析。结果表明,YAP1的CDS区序列长度为1302 bp,编码433个氨基酸,等电点为5.10的亲水性蛋白质,YAP1蛋白不存在信号肽和跨膜区域,其结构主要由无规则卷曲构成。系统进化树分析表明,与绵羊的亲缘关系较近,与小鼠的亲缘关系较远。亚细胞定位显示,该蛋白质在细胞核和细胞质中均有表达。RT-qPCR结果显示,YAP 1基因在新西兰白兔的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫和肌肉中均有表达,但在肌肉中的表达量最高,且在腿肌组织中表达水平较高。双荧光素酶报告基因检测结果表明,YAP 1基因第127位的丝氨酸突变为丙氨酸(YAP1-S127A),8xGTIIC的启动子活性明显增强。在肌肉细胞中过表达YAP 1基因可以加快肌肉细胞的增殖,同时上调肌球蛋白重链6(myosin heavy chain 6,MYH6)和肌细胞生成素(myogenin,MYOG)基因的mRNA表达水平,以及MYH6和肌分化因子(myogenic differentiation,MYOD)蛋白质水平,抑制肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因mRNA的表达水平。综上结果提示,YAP 1基因在新西兰白兔肌肉生长发育中发挥重要作用。本研究为后续进一步阐明YAP 1基因精准调控肌肉生长发育的分子机制奠定基础,同时为改良家兔品种提供理论依据和基因资源。
关键词
yes
相关
蛋白
1
肌肉
家兔
亚细胞
定位
转录活性
Keywords
yes
-associated protein 1(YAP1)
muscles
rabbits
subcellular localization
transcriptional activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中YAP核质定位的影响
戴义芹
张婧
徐建江
《中华实验眼科杂志》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
YAP 1基因调控新西兰白兔肌肉生长发育
刘雨晴
陈孟娟
王亿杰
许会芬
李明
于光晴
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
已选择
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