YTH结构域家族蛋白2对亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化的影响

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作者 熊文晓 赵田禾 +1 位作者 龙科言 张遵真 《中国医学科学院学报》 北大核心 2025年第3期333-342,共10页

目的探究YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)液-液相分离(LLPS)对亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化的影响,为亚砷酸钠致癌的防控提供新的干预靶点。方法使用1μmol/L亚砷酸钠连续处理22周构建YTHDF2蛋白正常发生LLPS(YTHDF2-wt)及抑制YTHDF2蛋白发... 目的探究YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)液-液相分离(LLPS)对亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化的影响,为亚砷酸钠致癌的防控提供新的干预靶点。方法使用1μmol/L亚砷酸钠连续处理22周构建YTHDF2蛋白正常发生LLPS(YTHDF2-wt)及抑制YTHDF2蛋白发生LLPS(YTHDF2-mut)的HaCaT恶性转化细胞模型。采用共聚焦显微镜观察并表征亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化过程中YTHDF2蛋白形成的LLPS液滴,并通过细胞增殖、划痕愈合及克隆形成实验检测细胞恶性表型。采用蛋白免疫印迹、定量逆转录PCR与免疫荧光实验检测YTHDF2蛋白LLPS在亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化中对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)mRNA和蛋白表达的影响。结果亚砷酸钠处理4周后,YTHDF2-wt细胞内出现YTHDF2蛋白LLPS液滴,且液滴数随着亚砷酸钠处理时间的延长逐渐增多(F=35.252,P<0.001),而YTHDF2-mut细胞没有观察到LLPS液滴。与YTHDF2-mut细胞比较,YTHDF2-wt细胞在亚砷酸钠处理22周时的增殖能力在48(t=3.654,P=0.006)、72 h(t=5.458,P<0.001)显著增高;YTHDF2-wt细胞在亚砷酸钠处理8、22周时的划痕愈合率显著增加(t=12.137,P<0.001;t=4.484,P=0.011);YTHDF2-wt细胞在亚砷酸钠处理4(t=3.365,P=0.027)、8(t=5.580,P=0.005)、22周(t=3.328,P=0.029)的克隆形成数显著增加。与YTHDF2-mut细胞比较,亚砷酸钠处理22周时,YTHDF2-wt细胞PTEN蛋白含量(t=-3.119,P=0.036)和mRNA翻译率(t=4.051,P=0.015)显著降低。免疫荧光结果显示,亚砷酸钠处理4周后,YTHDF2-wt细胞内YTHDF2蛋白LLPS液滴定位于翻译相关无膜细胞器的应激颗粒中。结论在亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化中,YTHDF2蛋白发生LLPS,定位于翻译相关无膜细胞器应激颗粒中。YTHDF2蛋白LLPS通过抑制关键抑癌因子PTEN mRNA的翻译参与亚砷酸钠诱导皮肤细胞恶性转化。 展开更多

关键词 yth结构域家族蛋白2 相分离 第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物 亚砷酸钠 恶性转化

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沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡 被引量：1

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作者 江克兵 徐璐晴 沈涤非 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期202-206,共5页

目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为... 目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2组[转染YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型组(siRNA+AngⅡ)和实验组(siYTHDF2+AngⅡ)。用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系。结果AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.50±0.08 vs 1.00±0.07,P<0.05)。与空白组比较,模型组心肌细胞表面积增大,细胞凋亡率升高,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组心肌细胞表面积减小,细胞凋亡率降低,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论沉默YTHDF2可以缓解AngⅡ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡,YTHDF2通过与Bcl-2相结合抑制其表达水平。 展开更多

关键词 肌细胞 心脏 细胞凋亡 血管紧张素Ⅱ 病理性心肌肥厚 新生大鼠原代心肌细胞 yth结构域家族蛋白2

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敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡 被引量：10

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作者 李子玮 罗清雅 +4 位作者 王浩丞 刘毅 冯小玲 李真子 易萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期255-263,共9页

目的探讨敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对人宫颈癌细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用人蛋白图谱(Human Protein Atlas)数据库分析YTHDF2在宫颈癌中表达及与生存时间的关系。收集宫颈癌和正常宫颈组织各31例... 目的探讨敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对人宫颈癌细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用人蛋白图谱(Human Protein Atlas)数据库分析YTHDF2在宫颈癌中表达及与生存时间的关系。收集宫颈癌和正常宫颈组织各31例,采用免疫组织化学法检测YTHDF2的蛋白表达差异;利用敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)及空载质粒包装慢病毒,并感染至宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞,实时荧光定量PCR及Western blot法检测YTHDF2的mRNA及蛋白水平,敲低YTHDF2后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果检测数据库发现YTHDF2在宫颈癌中表达越高生存时间越短,与正常宫颈组织相比,YTHDF2在宫颈癌组织高表达。敲低YTHDF2后,抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞阻滞于S期。结论YTHDF2在宫颈癌组织中高表达,敲低后抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 yth结构域N^6甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(ythDF2) 宫颈癌 HeLa/SiHa细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响 被引量：4

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作者 马琰迪 卢香云 +8 位作者 何尚峰 俞雪燕 胡云华 高海霞 陈云昭 禹洁 王文洁 李锋 崔晓宾 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期962-970,共9页

目的:探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化修饰结合蛋白YTH结构域连接蛋白2(YTHDF2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中表达及其对食管癌细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法:免疫组织化学法检测113例ESCC组织和95例癌旁正常食管上皮... 目的:探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化修饰结合蛋白YTH结构域连接蛋白2(YTHDF2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中表达及其对食管癌细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法:免疫组织化学法检测113例ESCC组织和95例癌旁正常食管上皮组织中YTHDF2蛋白表达情况,分析YTHDF2蛋白表达与ESCC患者临床病理特征和预后的关系。将体外培养的食管癌Eca109和EC9706细胞分为对照组(转染si-NC)和si-YTHDF2组(分别转染si-YTHDF2#1和si-YTHDF2#2)。Western blotting法检测各组细胞中YTHDF2蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,平板克隆实验检测各组细胞克隆形成数,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数。结果:YTHDF2蛋白主要表达于ESCC细胞的细胞质,少量表达于细胞核,其在ESCC组织中的表达强度明显高于癌旁正常食管上皮组织(P<0.01)。不同发病年龄和TNM分期ESCC患者间YTHDF2蛋白表达强度比较差异有统计学意义(P=0.008,P=0.041)。Kaplan-Meier生存分析,与YTHDF2低表达组比较,YTHDF2高表达组ESCC患者生存率明显降低(P=0.035)。CCK-8法和平板克隆实验,与对照组比较,si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞的增殖活性明显降低(P<0.05),克隆形成数明显减少(P<0.01)。Transwell小室实验,与对照组比较,si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞中迁移细胞数明显减少(P<0.01)。结论:YTHDF2在ESCC组织中的表达强度明显高于正常食管上皮组织,敲低YTHDF2表达可抑制食管癌细胞的增殖、克隆形成和迁移。 展开更多

关键词 食管肿瘤 鳞状细胞癌 yth结构域连接蛋白2 细胞增殖 细胞迁移

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资生肾气丸对尿酸钠诱导大鼠滑膜细胞中P62/Nrf2通路调控机制的研究 被引量：1

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作者 范嘉懿 高一煊 +3 位作者 梁蓝云 贾凯杰 刘春红 韩洁茹 《世界中医药》 北大核心 2025年第3期404-410,共7页

目的:探讨资生肾气丸对尿酸单钠晶体(MSU)诱导的痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(GA-FLS)P62/Nrf2信号转导通路的影响。方法:按随机数字表法将18只雄性SD大鼠分为中药低、中、高3种剂量组,每组6只,连续灌胃7 d后,统一麻醉,分离血清备... 目的:探讨资生肾气丸对尿酸单钠晶体(MSU)诱导的痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(GA-FLS)P62/Nrf2信号转导通路的影响。方法:按随机数字表法将18只雄性SD大鼠分为中药低、中、高3种剂量组,每组6只,连续灌胃7 d后,统一麻醉,分离血清备用,用低、中、高3种剂量的含药血清体外干预GA-FLS,设为正常滑膜细胞组,MSU组,GA-FLS+中药低、中、高剂量组,共5组,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞增殖能力;蛋白质免疫印迹法检测P62、Kelch样ECH相关蛋白-1(Keap-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)含量;RT-PCR检测P62、Nrf2含量。结果:MTT结果表明,与模型组比较,各剂量资生肾气丸含药血清组FLS细胞增殖均受到抑制,其中高剂量差异有统计学意义(P<0.01);蛋白质免疫印迹法结果显示,就p62、Nrf2、NLRP3蛋白的表达水平度而言,模型组相对于空白组明显增高(均P<0.01);与模型组比较,低、中、高资生肾气丸含药血清组蛋白表达含量均降低(均P<0.05);RT-PCR结果显示,与空白组比较,模型组细胞中p62、Nrf2表达明显升高(均P<0.01);与模型组比较,加入中药血清滑膜细胞中,p62、Nrf2表达下降(均P<0.05)。结论:资生肾气丸可通过调控P62/Nrf2信号转导通路抑制GA-FSL细胞增殖,下调P62、Keap-1、Nrf2蛋白的表达、抑制Nod样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体产生,具有抗炎作用,从而对GA具有防治效果。 展开更多

关键词 资生肾气丸 痛风性关节炎 成纤维样滑膜细胞 尿酸单钠晶体 p62/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路 Nod样受体家族pyrin结构域蛋白3炎症小体 3-(4 5-二甲基噻唑-2)-2 5-二苯基四氮唑溴盐 实验研究

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N^(6)-甲基腺苷结合蛋白YTHDC2在肿瘤中的研究进展

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作者 姜涛 李卫海 +1 位作者 何作顺 谷仕艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1697-1701,共5页

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA上最常见的可逆甲基化修饰,可影响相应RNA的加工和降解过程,进而调控细胞的生长、发育、分化和死亡等多种病理生理过程[1]。研究已明确,m^(6)A修饰是由甲基转移酶、去甲基转... N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA上最常见的可逆甲基化修饰,可影响相应RNA的加工和降解过程,进而调控细胞的生长、发育、分化和死亡等多种病理生理过程[1]。研究已明确,m^(6)A修饰是由甲基转移酶、去甲基转移酶和甲基结合蛋白(又称“redear”)共同调控的可逆修饰,其中甲基结合蛋白是m^(6)A修饰发挥生物学功能最重要的介导者[2]。 展开更多

关键词 含yth结构域蛋白2 N^(6)-甲基腺苷 肿瘤 生物学功能

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肿瘤源性外泌体hsa-miR-29c-3p通过靶向ATAD2B调控宫颈鳞状细胞癌的血管生成

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作者 张芳 李亚 +1 位作者 周菲 谭松红 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第2期151-160,共10页

目的:探讨宫颈癌(CC)细胞SiHa源性外泌体hsa-miR-29c-3p在CC血管生成中的作用。方法∶收集2019年1月至2021年12月在衡阳市中心医院妇科就诊的45例宫颈鳞状细胞癌(CSCC)患者的癌组织标本和15例正常宫颈组织标本。常规培养SiHa细胞和人脐... 目的:探讨宫颈癌(CC)细胞SiHa源性外泌体hsa-miR-29c-3p在CC血管生成中的作用。方法∶收集2019年1月至2021年12月在衡阳市中心医院妇科就诊的45例宫颈鳞状细胞癌(CSCC)患者的癌组织标本和15例正常宫颈组织标本。常规培养SiHa细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用Lipofectamine 2000将hsa-miR-29c-3p、miRNA-NC、si-hsa-miR-29c-3p和si-miRNA-NC转染至SiHa细胞中,记为miRNA-NC组、hsa-miR-29c-3p组、si-miRNA-NC组和si-hsa-miR-29c-3p组。用Lipofectamine 2000将mimic-NC、miR-29c-3p-mimic、pCMV-NC、pCMV-含AAA结构域的ATPase家族蛋白2B(ATAD2B)载体分别转染HUVEC,记为mimic-NC组、miR-29c-3p-mimic组、pCMV-NC组、pCMV-ATAD2B组和pCMV-ATAD2B+miR-29c-3p-mimic组。原位杂交(ISH)法检测CSCC组织中hsa-miR-29c-3p的表达,免疫组化(IHC)法检测CSCC组织和移植瘤组织中的CD31阳性血管。分离纯化SiHa、C33a细胞来源的外泌体,用透射电镜技术和WB法对其表征进行鉴定及进行HUVEC摄取实验。qPCR法检测SiHa、C33a细胞和外泌体中hsa-miR-29c-3p和ATAD2B mRNA的表达。成管试验、Transwell小室实验和划痕愈合实验检测外泌体对HUVEC成管和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验验证hsa-miR-29c-3p与ATAD2B的靶向结合关系,移植瘤实验检测各组SiHa细胞来源外泌体对移植瘤生长和血管增生的影响。结果:hsa-miR-29c-3p在CSCC组织中呈高表达且与其微血管密度(MVD)正相关(均P<0.05);SiHa、C33a细胞来源的外泌体完全符合典型外泌体形态和蛋白表达表征;在体外HUVEC摄取SiHa、C33a细胞来源的外泌体和其包含的hsa-miR-29c-3p;SiHa细胞来源的外泌体hsa-miR-29c-3p可在体外促进HUVEC的成管和迁移能力(均P<0.05);SiHa细胞来源的外泌体hsa-miR-29c-3p可促进移植瘤生长和血管增生;hsa-miR-29c-3p可与ATAD2B基因直接结合并调节其表达(均P<0.05)。过表达ATAD2B可逆转hsa-miR-29c-3p对HUVEC的成管、迁移和划痕愈合能力的促进作用(均P<0.05)。结论:SiHa细胞源性外泌体hsa-miR-29c-3p通过靶向ATAD2B调控CSCC组织中的血管生成。外泌体hsa-miR-29c-3p可能是CC诊疗的潜在标志物和治疗靶点。 展开更多

关键词 宫颈鳞状细胞癌 外泌体 SiHa细胞 人脐静脉内皮细胞 血管生成 hsa-miR-29c-3p 含AAA结构域的ATPase家族蛋白2B(ATAD2B)

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敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2抑制其增殖并促进其凋亡 被引量：8

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作者 张杰 皮静楠 +2 位作者 刘越 余佳 冯涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1628-1634,共7页

目的研究敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对MGC-803人胃癌细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用UCSC Cancer Browser下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛查YTHDF2 mRNA在胃癌中的表达情况。设计并构建能... 目的研究敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对MGC-803人胃癌细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用UCSC Cancer Browser下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛查YTHDF2 mRNA在胃癌中的表达情况。设计并构建能够靶向敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)病毒载体;病毒感染MGC-803细胞,敲低YTHDF2水平后,实时荧光定量PCR检测YTHDF2 mRNA水平,Western blot法检测YTHDF2蛋白水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果通过TCGA数据库查询发现YTHDF2在胃癌组织中高表达。成功构建YTHDF2敲低的稳定转染MGC-803细胞。与对照组相比,YTHDF2敲低后,明显抑制细胞增殖;G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少;细胞凋亡率升高。结论敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2水平,抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 yth结构域N6甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(ythDF2) 胃癌 MGC-803细胞 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡

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浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关 被引量：2

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作者 刘昆 吴立刚 +6 位作者 揭育祯 纳莉 张晴 田荣 李桂忠 卢冠军 马胜超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期981-986,共6页

目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶... 目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。 展开更多

关键词 乳腺癌 细胞焦亡(pyroptosis) 炎性体 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 肝配蛋白A型受体2(EphA2)

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干扰NSUN2通过调控细胞周期蛋白表达抑制黑素瘤细胞增殖 被引量：2

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作者 李国锦 王金萍 +4 位作者 张强 见玉文 王珊珊 张涛 王令 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1242-1251,共10页

为探讨太阳结构域家族蛋白酶2(NOP2/Sun RNA methyltransferase 2,Nsun2)RNA甲基化酶在黑素瘤细胞中的生物学功能,本研究以小鼠黑素瘤B16细胞为对象,构建靶向干扰Nsun2基因的shRNA慢病毒干扰载体,包装病毒后感染B16细胞。与对照组相比,... 为探讨太阳结构域家族蛋白酶2(NOP2/Sun RNA methyltransferase 2,Nsun2)RNA甲基化酶在黑素瘤细胞中的生物学功能,本研究以小鼠黑素瘤B16细胞为对象,构建靶向干扰Nsun2基因的shRNA慢病毒干扰载体,包装病毒后感染B16细胞。与对照组相比,干扰组细胞中Nsun2的敲低效率达到80%。EdU染色结果表明,干扰Nsun2显著抑制B16细胞DNA合成能力。转录物组测序技术系统分析干扰组与对照组细胞基因表达水平,共筛选获得1062个差异表达基因(DEGs),其中678个表达上调,384个表达下调。DEGs主要富集在染色体、着丝粒区、蛋白质结合等GO条目。KEGG分析表明,DEGs显著富集在细胞周期、DNA复制、细胞衰老等通路。荧光定量PCR和转录物组测序结果均发现,Cdk2、Ccna2、Cdc25b等促进细胞分裂的相关基因显著下调,而Gadd45g和Gadd45a等阻滞细胞增殖的基因显著上调。本研究表明,NSUN2通过调控细胞周期和DNA复制等生物学过程,影响黑素瘤细胞增殖,为黑素瘤发生和发展的分子机制研究提供参考。 展开更多

关键词 黑素瘤细胞 太阳结构域家族蛋白成员2 基因敲低 转录物组测序

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基于CRISPR-Cas9系统敲除YTHDF2对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为影响的研究 被引量：1

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作者 张鹏 王梦瑶 李金科 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期292-296,共5页

目的:探讨使用CRISPR-Cas9系统敲除YTH结构域m6A RNA结合蛋白2(YTHDF2)后对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响。方法:培养子宫颈癌HeLa细胞,使用CRISPR-Cas9系统构建YTHDF2敲除细胞系;分为对照组、敲除1组和敲除2组,行克隆形成实验、CCK... 目的:探讨使用CRISPR-Cas9系统敲除YTH结构域m6A RNA结合蛋白2(YTHDF2)后对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响。方法:培养子宫颈癌HeLa细胞,使用CRISPR-Cas9系统构建YTHDF2敲除细胞系;分为对照组、敲除1组和敲除2组,行克隆形成实验、CCK8实验、裸鼠移植瘤模型分析YTHDF2在体内、体外增殖中的作用,RNA测序探讨作用机制。结果:双sgRNA片段敲除策略成功敲除YTHDF2,敲除1组、敲除2组增殖曲线明显低于对照组,表现为时间依赖性,与对照组相比,敲除1组、敲除2组的HeLa细胞增殖能力显著下降,细胞克隆形成数明显降低,皮下移植瘤质量明显减小,差异均有统计学意义(P<0.001);RNA水平负调控细胞周期G2/M期转换的基因集上调,细胞黏附分子基因集下调,Ras和Wnt信号通路下调,差异均有统计学意义(FDR<0.05)。结论:敲除YTHDF2通过上调负调控细胞周期G2/M期转换的基因,抑制子宫颈癌细胞增殖、克隆形成及皮下成瘤能力。 展开更多

关键词 子宫颈癌 yth结构域m6A RNA结合蛋白2 CRISPR-Cas9系统

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加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠肾脏内质网应激凋亡的影响

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作者 宁洪悦 祁彤 +4 位作者 高飞 刘慧 高志旭 常柏 郭建恩 《世界中医药》 北大核心 2025年第9期1486-1493,1498,共9页

目的:观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠内质网应激凋亡的影响。方法:将50只db/db成模小鼠依据体质量采用简单随机化方法分为模型组、厄贝沙坦组及加味肾气丸低、中、高剂量观察组,每组10只。同时,将10只db/m小鼠作为正常组。加味肾气丸... 目的:观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠内质网应激凋亡的影响。方法:将50只db/db成模小鼠依据体质量采用简单随机化方法分为模型组、厄贝沙坦组及加味肾气丸低、中、高剂量观察组,每组10只。同时,将10只db/m小鼠作为正常组。加味肾气丸各剂量组小鼠分别给予12.95、25.89、51.78 g/kg药物颗粒混悬液灌胃,厄贝沙坦组小鼠给予0.026 g/kg厄贝沙坦混悬液灌胃,正常组与模型组小鼠则给予等体积的蒸馏水灌胃,1次/d,均干预12周。对比各组肾功能指标血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白/肌酐比值(UACR),用苏木素-伊红(HE)、糖原染色(PAS)染色法、透射电镜(TEM)观察肾组织病理变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(UNEL)法检测肾细胞凋亡,免疫组织化学法检测肾组织中凋亡相关蛋白[BCL2相关X蛋白(BAX)、BCL2]、ERS标志蛋白[CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子6(ATF6)、肌醇需求酶1(IRE1)]表达,Western Blotting法检测肾组织中TMBIM6/mTORC2信号通路相关蛋白[TMBIM6、p-mTORC2/mTORC2、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、BCL2]表达。结果:与模型组比较,各加味肾气丸组及厄贝沙坦组Scr、BUN、UACR低(P<0.05),肾组织病理变化改善,肾细胞凋亡率低(P<0.05),BAX蛋白表达低(P<0.05),BCL2蛋白表达高(P<0.05),肾组织中CHOP、ATF6、IRE1蛋白表达低(P<0.05),肾组织中TMBIM6、p-mTORC2/mTORC2、p-AKT/AKT、BCL2蛋白表达高(P<0.05),CHOP蛋白表达低(P<0.05)。结论:加味肾气丸能够通过调控TMBIM6/mTORC2信号通路,有效抑制DKD小鼠ERS介导的肾细胞凋亡,从而减少蛋白尿,发挥肾脏保护作用。 展开更多

关键词 加味肾气丸 糖尿病肾病 跨膜B细胞淋巴瘤2相关X蛋白抑制剂结构域家族成员6 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2 信号通路 细胞凋亡 内质网应激 作用机制

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NLRP3炎性体与2019冠状病毒病(COVID-19)肺损伤的研究进展 被引量：4

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作者 任正肖 车萍 +3 位作者 李紫薇 莫梅 张珊珊 张颖颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期844-850,共7页

强烈的炎症反应是2019冠状病毒病(COVID-19)急性肺损伤的主要原因,严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)通过与受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合进入肺部上皮细胞等靶细胞,激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NL... 强烈的炎症反应是2019冠状病毒病(COVID-19)急性肺损伤的主要原因,严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)通过与受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合进入肺部上皮细胞等靶细胞,激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体,活化前体caspase-1,释放成熟的IL-1β和IL-18等炎性细胞因子,参与炎症反应及诱导细胞焦亡,从而导致COVID-19患者肺部炎症细胞浸润,充血,水肿,严重者可伴有急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、弥散性血管内凝血(DIC)等多种并发症。目前尚无治疗COVID-19的特定药物,MCC950及秋水仙碱等NLRP3炎性体抑制已经广泛应用于治疗各种炎症性疾病,而目前这些药物也正处于治疗COVID-19患者的临床试验阶段。我们总结了COVID-19发病机制及SARS-CoV激活NLRP3炎性体途径,以期初步揭示NLRP3炎性体在SARS-CoV-2感染过程中所扮演的角色及其机制,为研发相关靶向药物提供理论基础。 展开更多

关键词 2019冠状病毒病(COVID-19) 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 炎性体 血管紧张素转化酶2(ACE2) 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 综述

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N6-腺苷酸甲基化结合蛋白的遗传变异与胃癌风险关联分析 被引量：2

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作者 陆欣苑 冯延璐 +5 位作者 李洁 许思易 李成云 刘桐 王新华 梁戈玉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第21期2834-2842,共9页

目的探讨YTHDF1 rs6011668、HNRNPA2B1 rs2070601和rs76558212的单核苷酸多态性(SNPs)与胃癌风险关联。方法收集胃癌病例457例,健康对照525例,采用结合多重PCR和高通量测序的Hi-SNP的基因分型方法对YTHDF1 rs6011668、HNRNPA2B1 rs2070... 目的探讨YTHDF1 rs6011668、HNRNPA2B1 rs2070601和rs76558212的单核苷酸多态性(SNPs)与胃癌风险关联。方法收集胃癌病例457例,健康对照525例,采用结合多重PCR和高通量测序的Hi-SNP的基因分型方法对YTHDF1 rs6011668、HNRNPA2B1 rs2070601和rs76558212进行基因分型;使用χ^(2)检验和logistic回归分析SNPs与胃癌发病风险和临床进展的关联,使用多因素logistic回归和Risk Score(RS)模型综合分析环境和遗传因素对胃癌发病的影响。结果YTHDF1 rs6011668 TT基因型携带者的胃癌发病风险是CC基因型携带者的3.075倍(95%CI:1.128~8.382,P=0.028),是CC/TC基因型携带者2.961倍(95%CI:1.091~8.033,P=0.033);分层分析发现,TT基因型主要增加不饮茶者、吃腌制食物者和吃油炸食物者的胃癌发病风险(P<0.05);此外,TT基因型携带者增加胃癌浸润程度、淋巴结转移、远端转移和中晚期风险(P<0.05)。综合环境与遗传因素,计算病例组和对照组的风险评分(RS),以RS四分位数分组发现,RS得分越高,胃癌发病风险越高。与RS≤Q25组相比,Q25≤RS<Q50组、Q50<RS<Q75组和RS≥Q75组胃癌的发病风险分别为3.090、9.731和19.949。结论YTHDF1 rs6011668突变基因型可能与增加胃癌发病风险和推进临床进展有关,结合环境与遗传因素能更好地评估胃癌的发病风险。 展开更多

关键词 胃癌 N6-腺苷酸甲基化 yth结构域家族蛋白1 异质核核糖核蛋白A2B1 单核苷酸多态性

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柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

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作者 桑瑞 魏金环 +3 位作者 潘静莹 杨日云 毛立明 包璟崟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期34-40,共7页

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细... 目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。 展开更多

关键词 含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3) 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2) 柯萨奇病毒B3(CVB3) 巨噬细胞

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阿尔茨海默症小胶质细胞免疫相关受体研究进展 被引量：8

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作者 徐慧琳 范震 +2 位作者 李凤 张文生 冯成强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1185-1188,共4页

阿尔茨海默症(Alzheimer′s disease,AD)是中老年群体发病率极高的神经退行性疾病。近年来,通过人类全基因组测序技术筛选出20余种影响AD发病率的风险基因,其中许多基因在小胶质细胞中高表达,且蛋白产物作为膜受体参与小胶质细胞的免疫... 阿尔茨海默症(Alzheimer′s disease,AD)是中老年群体发病率极高的神经退行性疾病。近年来,通过人类全基因组测序技术筛选出20余种影响AD发病率的风险基因,其中许多基因在小胶质细胞中高表达,且蛋白产物作为膜受体参与小胶质细胞的免疫功能。这也意味着由小胶质细胞调控的固有免疫可能在AD病理中扮演着重要的角色。而这些由高AD风险基因表达的免疫相关受体,如TREM2、CD33、CR1、MS4A蛋白,被视为AD潜在的免疫学药物靶点而成为国内外关注热点。本文综述了这些小胶质细胞的免疫相关受体的结构及其在AD中功能的研究进展,以期为发掘AD免疫学靶点防治AD提供新思路。 展开更多

关键词 阿尔茨海默症 小胶质细胞 髓样细胞触发受体2 髓系细胞分化抗原33 补体受体1型 跨膜蛋白4结构域亚家族A

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