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犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加 被引量：6
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作者 任睿芳 张舒 +3 位作者 李晓瑞 游雷鸣 吴珺 郝钰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期871-876,共6页
目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同... 目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同时点监测TNF-α诱导的PMVEC跨内皮细胞单层电阻(TER)测定其通透性。不同的干预因素作用24 h后,检测PMVEC的TER、PKC活性、SSeCKS mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察PMVEC中SSeCKS的定位和F-actin的结构变化。结果:TNF-α作用24 h后PMVEC通透性达高峰;与对照组比较,TNF-α组TER降低,PKC活性增强;与TNF-α组比较,TNF-α加PKC抑制剂组和TNF-α加XDY含药血清组PKC活性降低,而TER升高且与对照组无差别。与对照组比较,TNF-α组SSeCKS的mRNA和蛋白表达升高;与TNF-α组比较,TNF-α加XDY含药血清组SSeCKS的mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平降低。对照组PMVEC中F-actin主要分布在细胞周边和核周,形成致密周围束,SSeCKS均匀散在分布于细胞中;TNF-α组细胞周边的F-actin致密束基本消失,SSeCKS集中分布于核周;TNF-α加含XDY含药血清组F-actin结构及SSeCKS的分布趋于正常。结论:犀角地黄汤合银翘散可以抑制TNF-α诱导的PMVEC PKC信号通路的激活,降低PKC结合底物SSeCKS的表达,最终影响肌动蛋白的变构、阻止内皮细胞变形而降低PMVEC的通透性。 展开更多
关键词 肺微血管内皮细胞 PKC-SSeCKS信号通路 TNF-α 犀角地黄汤合银翘散
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犀角地黄汤合银翘散通过促进流感病毒感染的小鼠巨噬细胞自噬而降低线粒体ROS水平 被引量：6
2
作者 毛钦 马璐瑶 +4 位作者 刘天怡 周娜 刘梦华 吴珺 郝钰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期704-711,共8页
目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对自噬调节的流感病毒感染小鼠巨噬细胞线粒体活性氧(mtROS)水平的影响。方法:以流感病毒PR8感染小鼠巨噬细胞J774A.1为模型,进行下列实验:(1)分为正常组、模型组(PR8感染24 h)、XDY干预组(PR8感染及16... 目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对自噬调节的流感病毒感染小鼠巨噬细胞线粒体活性氧(mtROS)水平的影响。方法:以流感病毒PR8感染小鼠巨噬细胞J774A.1为模型,进行下列实验:(1)分为正常组、模型组(PR8感染24 h)、XDY干预组(PR8感染及162.5 mg/L XDY干预24 h)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预组(5 mmol/L 3-MA预处理3 h+PR8感染24 h)、3-MA对照组(5 mmol/L 3-MA预处理3 h再继续培养24 h)和PR8+3-MA+XDY组(5 mmol/L 3-MA预处理3 h+PR8感染及162.5 mg/L XDY干预24 h),Western blot法检测细胞微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)和P62蛋白水平,ELISA检测细胞培养上清液白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平;(2)分为正常组、模型组和XDY干预组,免疫荧光观察细胞线粒体膜电位、自噬体与线粒体共定位;(3)分为正常组、模型组、XDY干预组、Mito-TEMPO干预组(PR8感染及500μmol/L Mito-TEMPO干预24 h)、Mito-TEMPO对照组(500μmol/L Mito-TEMPO干预24 h)、3-MA干预组、3-MA对照组和PR8+3-MA+XDY组,流式细胞术检测mtROS水平。结果:流感病毒感染后,J774A.1细胞内LC3-II和P62蛋白水平显著升高,线粒体膜电位下降,mtROS生成增多,IL-1β分泌显著增多;与模型组相比,XDY可降低P62的表达,促进线粒体自噬,升高线粒体膜电位,减少mtROS产生及IL-1β分泌;以3-MA抑制细胞自噬可加重mtROS累积,XDY降低mtROS的作用也受到抑制。结论:XDY可通过促进流感病毒感染的小鼠巨噬细胞自噬而降低mtROS水平,从而抑制炎症反应。 展开更多
关键词 流感病毒 巨噬细胞 细胞自噬 线粒体活性氧 犀角地黄汤合银翘散
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犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3通路抑制流感病毒感染的巨噬细胞焦亡 被引量：6
3
作者 赵梦繁 苏日娜 +5 位作者 毛钦 马璐瑶 刘天怡 吴珺 游雷鸣 郝钰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1049-1054,共6页
目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒引起的炎症反应中巨噬细胞焦亡的作用及其机制。方法:将巨噬细胞J774A.1分为正常对照组(正常培养)、模型组(流感病毒PR8感染24 h)、XDY组(PR8感染+XDY作用24 h)、H2O2对照组(H2O2作用24 h)和... 目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒引起的炎症反应中巨噬细胞焦亡的作用及其机制。方法:将巨噬细胞J774A.1分为正常对照组(正常培养)、模型组(流感病毒PR8感染24 h)、XDY组(PR8感染+XDY作用24 h)、H2O2对照组(H2O2作用24 h)和H2O2+XDY组(H2O2+XDY作用24 h)。用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,流式细胞术检测由caspase-1介导的细胞焦亡率,Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达量,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)分泌水平,激光共聚焦显微镜观察活性氧簇(ROS)与线粒体的共定位和释放情况。结果:流感病毒感染及H2O2作用后,巨噬细胞LDH释放和GSDMD-N蛋白表达增多,caspase-1介导的细胞焦亡率升高,同时NLRP3蛋白表达、IL-1β分泌和线粒体ROS(mtROS)生成亦增多;与模型组和H2O2对照组相比,XDY可显著减少mtROS生成、NLRP3和GSDMD-N蛋白表达及IL-1β和LDH分泌,降低caspase-1介导的细胞焦亡率。结论:犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3炎症小体通路抑制巨噬细胞焦亡,这可能是其抗流感病毒引起的过度炎症反应的机制之一。 展开更多
关键词 犀角地黄汤合银翘散 流感病毒 巨噬细胞 细胞焦亡 mtROS-NLRP3通路
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