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题名大肠杆菌nmpC基因的快速敲除
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作者
张丹凤
陈国平
华秀庭
陈阳
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机构
漳州师范学院生物科学与技术系
漳州市农业局种植业管理站
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期160-164,共5页
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基金
福建省自然科学基金项目(2010J05088)
漳州市自然科学基金项目(zz2012J05)
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文摘
旨在利用Red重组系统和Xer重组系统获得大肠杆菌NmpC外膜蛋白基因删除菌株。采用PCR扩增nmpC基因片段,构建pMD-nmpC载体,EcoR I酶切并经Pfu补平酶切缺口后与difGm片段连接,得到重组质粒T-nmpC∷difGm,PCR扩增获得突变盒nmpC::difGm,电转化突变盒片段入大肠杆菌细胞,PCR扩增验证是否获得没有抗性标记的ΔnmpC基因删除菌株。结果显示,成功构建了重组质粒T-nmpC∷difGm,在Red重组酶和Xer重组酶的介导下,进行同源重组和抗生素标记去除,并经PCR验证得到ΔnmpC基因删除菌株。首次成功获得大肠杆菌ΔnmpC无抗生素标记基因删除菌株,该基因删除菌株可为深入研究NmpC的功能提供研究基础。
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关键词
RED重组系统
xer重组系统
大肠杆菌
NmpC
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Keywords
Red recombination system xer recombination system E.coli NmpC
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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题名地衣芽胞杆菌dif序列的功能鉴定
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作者
李宁
牛丹丹
陈献忠
石贵阳
王正祥
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机构
江南大学生工学院生物资源与生物能源研究中心
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出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2009年第4期11-15,共5页
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基金
国家高技术研究发展计划(863计划
2006AA020204)
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文摘
地衣芽胞杆菌是重要的工业菌株,如何为其建立一种有效的基因删除技术是对该菌株进行遗传改良的基础。枯草芽胞杆菌difBs序列已经被成功用于枯草芽胞杆菌多基因的删除。在分析地衣芽胞杆菌基因组序列并获得与枯草芽胞杆菌difBs序列十分相似的一段序列difBLi的基础上,构建了在庆大霉素抗性基因两侧具有difBLi的重组质粒pMD19-difGm和pHY-XI′::difGm,通过电击转化法将质粒pHY-XI′::difGm导入B.lichen-iformisATCC14580中,筛选获得了具有庆大霉素抗性的转化子。在转化子的传代过程中,重组质粒的庆大霉素抗性基因在体内Xer/dif位点特异性重组系统的介导下通过其侧翼的dif位点进行同源重组而被准确删除。确证了地衣芽胞杆菌中dif序列的功能,为地衣芽胞杆菌基因组中多基因的删除提供了一种新的实验途径。
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关键词
地衣芽胞杆菌
位点特异性重组
xer/dif重组系统
基因删除
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Keywords
Bacillus licheniformi
site-specific recombination
xer/dif recombination
gene deletion
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分类号
Q939.124
[生物学—微生物学]
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