为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h M...为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。展开更多
目的:研究细胞骨架相关蛋白2(cytoskeleton-associated protein 2,CKAP2)对肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞系HepG2,Huh7和SMMC-7721。采用实时PCR和蛋白质印迹法检测CKAP2的表达水平。进...目的:研究细胞骨架相关蛋白2(cytoskeleton-associated protein 2,CKAP2)对肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞系HepG2,Huh7和SMMC-7721。采用实时PCR和蛋白质印迹法检测CKAP2的表达水平。进一步将HepG2细胞分为对照(Control)组、阴性对照(NC)组和沉默CKAP2(siCKAP2)组。NC组和siCKAP2组细胞分别转染siControl和siCKAP2。采用CKK-8法检测细胞活性,BrdU掺入法检测细胞增殖,凋亡试剂盒检测细胞凋亡,transwell实验检测细胞的迁移和侵袭。采用蛋白质印迹法检测cleavedcaspase 3,Bax,E-cadherin,N-cadherin,Vimentin以及磷酸化的Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)和磷酸化的信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白质表达水平。结果:与正常肝细胞L02比较,CKAP2在肝癌细胞系HepG2,Huh7和SMMC-7721中的表达显著上调(均P<0.05)。与NC组比较,siCKAP2组细胞活性和增殖率显著下降(均P<0.05);细胞凋亡率升高,cleaved-caspase 3和Bax的蛋白质表达水平显著上调(均P<0.05);细胞迁移和侵袭显著减少(均P<0.05);E-cadherin蛋白质表达水平显著上调,Vimentin,Ncadherin,磷酸化的JAK2和磷酸化的STAT3的蛋白质表达水平显著下调(均P<0.05)。结论:沉默CKAP2基因抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,JAK2/STAT3信号通路可能参与这些过程。展开更多
文摘目的:研究细胞骨架相关蛋白2(cytoskeleton-associated protein 2,CKAP2)对肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞系HepG2,Huh7和SMMC-7721。采用实时PCR和蛋白质印迹法检测CKAP2的表达水平。进一步将HepG2细胞分为对照(Control)组、阴性对照(NC)组和沉默CKAP2(siCKAP2)组。NC组和siCKAP2组细胞分别转染siControl和siCKAP2。采用CKK-8法检测细胞活性,BrdU掺入法检测细胞增殖,凋亡试剂盒检测细胞凋亡,transwell实验检测细胞的迁移和侵袭。采用蛋白质印迹法检测cleavedcaspase 3,Bax,E-cadherin,N-cadherin,Vimentin以及磷酸化的Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)和磷酸化的信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白质表达水平。结果:与正常肝细胞L02比较,CKAP2在肝癌细胞系HepG2,Huh7和SMMC-7721中的表达显著上调(均P<0.05)。与NC组比较,siCKAP2组细胞活性和增殖率显著下降(均P<0.05);细胞凋亡率升高,cleaved-caspase 3和Bax的蛋白质表达水平显著上调(均P<0.05);细胞迁移和侵袭显著减少(均P<0.05);E-cadherin蛋白质表达水平显著上调,Vimentin,Ncadherin,磷酸化的JAK2和磷酸化的STAT3的蛋白质表达水平显著下调(均P<0.05)。结论:沉默CKAP2基因抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,JAK2/STAT3信号通路可能参与这些过程。
