目的通过与乳腺癌常用化疗药物卡培他滨的比较,分析乌梅丸对小鼠乳腺癌肺转移微环境基因表达的影响以及对微环境中核心信号转导分子的影响。方法采用luciferase稳转小鼠乳腺癌细胞4T1接种于SPF级Balb/c雌性小鼠的第2对乳腺脂肪垫内建立...目的通过与乳腺癌常用化疗药物卡培他滨的比较,分析乌梅丸对小鼠乳腺癌肺转移微环境基因表达的影响以及对微环境中核心信号转导分子的影响。方法采用luciferase稳转小鼠乳腺癌细胞4T1接种于SPF级Balb/c雌性小鼠的第2对乳腺脂肪垫内建立乳腺癌动物模型,分为药物观察组(临床折算剂量的乌梅丸)、药物对照组(临床折算剂量的卡培他滨)和空白对照组。利用生物发光活体成像技术观察乳腺癌在接种原位及肺部的生长转移情况。利用Agilent表达谱芯片检测了乳腺癌肺部转移微环境中的基因表达情况,筛选出差异表达基因并进行生物信息学分析。比较乌梅丸与卡培他滨干预后肺部转移微环境中基因表达的差异。并进一步分析乌梅丸对肺部转移微环境中核心信号转导分子的影响。利用STRING在线分析系统等分析获得核心信号转导分子。最后通过RT-PCR、免疫组化及蛋白质免疫印迹方法检测了这些信号转导分子的表达情况。结果随着时间的推移各组小鼠乳腺癌接种处荧光面积逐渐增大,显示肿瘤体积在不断增加;在第30天时间点上空白对照组的荧光分布分散,已超出原发接种灶附近,表示肿瘤存在明显转移情况,较药物观察组与药物对照组明显。药物观察组、药物对照组分别与空白对照组比较,共有23个共同调控基因,但药物观察组所影响的基因明显少于药物对照组,二者的基因本体(Gene ontology,GO)和京都基因和基本组数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)pathway无共同条目。通过分析药物观察组与空白对照组比较获得的123个差异表达基因的信号转导网络,首要推荐核心基因为AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B。RT-PCR结果显示药物观察组AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B的表达与空白对照组比较均降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果显示药物观察组的核心基因呈现低表达趋势,其中CCL20与CXCL10的差异有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹结果同样显示了药物观察组与空白对照组比较各核心基因蛋白均呈现下降趋势,其中AGT、CCL20和CXCL10的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论乌梅丸能一定程度上抑制乳腺癌的肺转移,其对肺部转移微环境基因表达的影响与卡培他滨有显著的差异;乌梅丸抑制肺转移微环境中AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B等核心信号转导分子的表达可能是其抗乳腺癌肺转移的作用机制之一。展开更多
文摘目的通过与乳腺癌常用化疗药物卡培他滨的比较,分析乌梅丸对小鼠乳腺癌肺转移微环境基因表达的影响以及对微环境中核心信号转导分子的影响。方法采用luciferase稳转小鼠乳腺癌细胞4T1接种于SPF级Balb/c雌性小鼠的第2对乳腺脂肪垫内建立乳腺癌动物模型,分为药物观察组(临床折算剂量的乌梅丸)、药物对照组(临床折算剂量的卡培他滨)和空白对照组。利用生物发光活体成像技术观察乳腺癌在接种原位及肺部的生长转移情况。利用Agilent表达谱芯片检测了乳腺癌肺部转移微环境中的基因表达情况,筛选出差异表达基因并进行生物信息学分析。比较乌梅丸与卡培他滨干预后肺部转移微环境中基因表达的差异。并进一步分析乌梅丸对肺部转移微环境中核心信号转导分子的影响。利用STRING在线分析系统等分析获得核心信号转导分子。最后通过RT-PCR、免疫组化及蛋白质免疫印迹方法检测了这些信号转导分子的表达情况。结果随着时间的推移各组小鼠乳腺癌接种处荧光面积逐渐增大,显示肿瘤体积在不断增加;在第30天时间点上空白对照组的荧光分布分散,已超出原发接种灶附近,表示肿瘤存在明显转移情况,较药物观察组与药物对照组明显。药物观察组、药物对照组分别与空白对照组比较,共有23个共同调控基因,但药物观察组所影响的基因明显少于药物对照组,二者的基因本体(Gene ontology,GO)和京都基因和基本组数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)pathway无共同条目。通过分析药物观察组与空白对照组比较获得的123个差异表达基因的信号转导网络,首要推荐核心基因为AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B。RT-PCR结果显示药物观察组AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B的表达与空白对照组比较均降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果显示药物观察组的核心基因呈现低表达趋势,其中CCL20与CXCL10的差异有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹结果同样显示了药物观察组与空白对照组比较各核心基因蛋白均呈现下降趋势,其中AGT、CCL20和CXCL10的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论乌梅丸能一定程度上抑制乳腺癌的肺转移,其对肺部转移微环境基因表达的影响与卡培他滨有显著的差异;乌梅丸抑制肺转移微环境中AGT、CCL20、CXCL9、CXCL10、HTR1B等核心信号转导分子的表达可能是其抗乳腺癌肺转移的作用机制之一。
