目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KE...目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。展开更多
文摘目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。
文摘目的 本研究拟通过体外实验研究槲皮素(Quercetin,QCT)与AC16心肌细胞增殖的关系,探析QCT阻止AC16心肌细胞增殖作用与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 选用不同浓度QCT对AC16细胞进行干预,使用倒置显微镜拍照观察法、台盼蓝计数法和CCK-8法检测QCT对AC16细胞增殖的影响。Western blot检测QCT对磷酸化-β-连环蛋白(Phosphorylated β-catenin,p-β-catenin)、细胞性骨髓瘤样癌基因(c-Myc)、β-连环蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Low density lipoprotein receptor-related protein 5,LRP5)和低密度脂蛋白受体相关蛋白6(Low density lipoprotein receptor-related protein 6,LRP6)表达的影响。台盼蓝计数法检测过表达β-catenin ΔN、LRP5和LRP6基因后研究QCT对细胞增殖的影响以及沉默LRP5和LRP6基因后研究QCT对细胞增殖的影响。结果 与对照组比,QCT使得AC16细胞活细胞数下降,抑制增殖率,且具有浓度依赖性。条件摸索显示10和20μmol/L的QCT会导致AC16细胞中p-β-catenin蛋白修饰水平显著增加(P<0.05),c-Myc、β-catenin、LRP5和LRP6蛋白表达水平显著下调(P<0.05),因此后续实验选择10μmol/L的QCT作为干预浓度。而AC16细胞中过表达β-catenin ΔN、LRP5和LRP6基因,与单独给药组相比,过表达相关基因后10μmol/L的QCT引起的细胞增殖抑制现象被有效逆转(P<0.05)。另外,沉默LRP5和LRP6再联合10μmol/L的QCT干预,AC16细胞的增殖抑制并未产生协同现象(P>0.05)。结论 QCT可以通过下调LRP5/6表达以抑制Wnt/β-catenin信号通路从而发挥其阻止AC16心肌细胞增殖的作用。
