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Wnt诱导分泌蛋白-1介导肝纤维化发生的实验及临床观察
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作者 李玮 熊伍军 +3 位作者 简易成 江鸣 何益 刘雁冰 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第6期625-627,共3页
目的探讨Wnt诱导分泌蛋白-1(WISP-1)在大鼠肝纤维化模型表达水平变化及其与慢性肝病患者病程进展的相关性。方法四氯化碳CCl4皮下注射制作大鼠肝纤维化动物模型,取正常组、造模8周组、造模12周组大鼠肝组织,利用免疫组化观察大鼠肝组织W... 目的探讨Wnt诱导分泌蛋白-1(WISP-1)在大鼠肝纤维化模型表达水平变化及其与慢性肝病患者病程进展的相关性。方法四氯化碳CCl4皮下注射制作大鼠肝纤维化动物模型,取正常组、造模8周组、造模12周组大鼠肝组织,利用免疫组化观察大鼠肝组织WISP-1表达水平的变化,光镜下半定量分析;收集健康体检者血清20例,慢性HBV携带者患者血清20例,乙型肝炎肝硬化患者血清60例,利用ELISA测定血清WISP-1水平变化,利用放射免疫检测血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、前Ⅲ型胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平,分析WISP-1水平与血清肝纤维化指标的相关性。结果造模8、12周组WISP-1表达水平分别为11.0±2.4、23.8±4.8,与正常组2.3±2.1比较差异具有统计学意义(P<0.05);慢性HBV携带者、乙型肝炎肝硬化患者血清WISP-1水平分别为(65.5±18.8)、(71.2±18.2)ng/ml,与健康对照组(57.3±15.2)ng/ml比较差异具有统计学意义(P<0.05),相关分析表明WISP-1与HA、LN、PⅢP、CⅣ相关系数分别为0.41、0.53、0.50、0.64(P<0.05)。结论 WISP-1参与实验性肝纤维化的发生,血清WISP-1水平与慢性肝病病程进展相关,WISP-1在肝纤维化、肝硬化的作用及机制值得进一步研究。 展开更多
关键词 肝硬化 肝炎 慢性 wnt诱导分泌蛋白-1
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生长激素信号肽可诱导重组蛋白外分泌表达 被引量:4
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作者 张志谦 李金萍 胡颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期282-286,共5页
Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explo... Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explore the possibility of rat growth hormone signal peptide as such an element,a new vector based on the mammalian expression vector pcDNA3 was constructed by employing rat growth hormone(rGH) signal peptide as leading sequence,followed by multiple cloning sites,the myc epitope-tag and 6×his purification tag in the expression cassette.The vector was validated by successfully expressing and secretion of chick MMP-2 C-terminal PEX domain,a potential angiogenesis inhibitor,and tandem peptide repeats of myc epitope-tag in COS-7 cells.These results suggest that rat growth hormone signal peptide is effective in the mediation of recombinant protein expression and secretion,and this vector provides a new tool for universal cloning and secretion of exogenous proteins in mammalian cells. 展开更多
关键词 expression 分泌表达 重组蛋白 生长激素 vector 信号肽 SIGNAL universal elements multiple 诱导 SIGNAL PCDNA3 domain the and MMP-2 COS-7 rat tool new was one key his tag The PEX for ce
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分泌性卷曲相关蛋白3影响小鼠胚胎肝干细胞体外成熟分化的实验研究 被引量:1
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作者 贺引 蒋昌科 +2 位作者 何昀 冯涛 毕杨 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期268-273,共6页
目的检测不同发育阶段的肝组织中Wnt信号拮抗因子分泌性卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related pro-tein,SFRP)的表达,并探讨SFRP3对胚胎肝干细胞体外成熟分化的影响。方法分离胚胎12.5 d至出生后4周共9个阶段的小鼠肝组织,RT-PCR检测... 目的检测不同发育阶段的肝组织中Wnt信号拮抗因子分泌性卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related pro-tein,SFRP)的表达,并探讨SFRP3对胚胎肝干细胞体外成熟分化的影响。方法分离胚胎12.5 d至出生后4周共9个阶段的小鼠肝组织,RT-PCR检测5种SFRPs在肝组织及胚胎肝干细胞14.5(embryonic liver stem cells,ELSC)中的表达水平。腺病毒SFRP3感染小鼠胚胎肝干细胞,地塞米松(dexamethasone,Dex)联合肝细胞生长因子(hepatic growthfactor,HGF)诱导肝细胞分化,诱导后第3、6、9、12天检测白蛋白启动子荧光素酶报告基因(ablumin promoter-GaussiaLuciferase,ALB-GLuc)活性,诱导后第12天,RT-PCR和Western blot检测肝脏相关基因表达,PAS染色检测糖原合成功能。结果 SFRP1、4、5在不同阶段肝组织中的表达无明显差异,SFRP2和SFRP3只在胚胎期肝组织中表达,随后很快消失。ELSC14.5细胞中,SFRP2高表达而SFRP3表达很低。Dex联合HGF可有效诱导ELSC14.5细胞的体外成熟分化,与对照组相比,SFRP3过表达可降低成熟肝细胞标志白蛋白(albumin,ALB)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、酪氨酸转氨酶(tyrosine aminotransferase,TAT)、载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A(UDP-glucuronosyl transferase,UGT1A)的水平,增强肝干细胞标志Delta蛋白(Delta-like protein,DLK)和甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的表达,并抑制糖原合成功能。结论 SPRF3在肝脏发育过程中表达水平迅速降低,并显著抑制胚胎来源的肝干细胞体外成熟分化,其下调可能是肝脏发育和肝细胞成熟分化的一个重要因素。 展开更多
关键词 胚胎肝干细胞 分化抑制 分泌性卷曲相关蛋白3 wnt信号拮抗因子
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高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌 被引量:2
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作者 屈玲玲 邹琴 +5 位作者 李清璇 李晓颖 刘忠强 周宇霞 郭兵 石明隽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期608-615,共8页
目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转... 目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。 展开更多
关键词 肾脏纤维化 小鼠肾小管上皮细胞(RTEC) DNA甲基转移酶3B(DNMT3B) 分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1) wnt β联蛋白(β-catenin)
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AMP对铝胁迫诱导丹波黑大豆柠檬酸分泌及其铝耐受性的影响 被引量:2
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作者 郭传龙 赵艳 +2 位作者 武孔焕 李昆志 陈丽梅 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期82-86,共5页
为了考察AMP(Adenosine 5’-monophosphate)对铝耐受型丹波黑大豆(RB)柠檬酸的分泌及铝抗性的影响,在50 mmol·L-1铝溶液中添加100 mmol·L-1AMP共处理RB,结果表明RB根的相对生长率显著小于单独用50 mmol·L-1铝胁迫处理的... 为了考察AMP(Adenosine 5’-monophosphate)对铝耐受型丹波黑大豆(RB)柠檬酸的分泌及铝抗性的影响,在50 mmol·L-1铝溶液中添加100 mmol·L-1AMP共处理RB,结果表明RB根的相对生长率显著小于单独用50 mmol·L-1铝胁迫处理的植株。免疫共沉淀分析显示铝胁迫下AMP的存在降低RB根中14-3-3蛋白与磷酸化质膜H+-ATP酶的相互作用,使根尖质膜H+-ATP酶活性降低约1倍,氢泵活性和H+分泌能力显著降低,根柠檬酸的分泌量减少约1倍。说明铝胁迫下AMP通过抑制14-3-3蛋白和质膜H+-ATP酶的互作来减少RB根尖的氢泵活性和柠檬酸分泌作用,从而降低RB根的相对生长率及其对铝胁迫的耐受性。 展开更多
关键词 铝胁迫 丹波黑大豆 诱导的柠檬酸分泌 14-3-3蛋白 质膜H+-ATP酶
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WISP3基因突变体的构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:2
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作者 王敏 彭依群 +6 位作者 周后德 翟木绪 何玉玲 谢辉 罗湘杭 郭丽娟 廖二元 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期8-15,共8页
目的:通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(spondyloepiphyseal dysplasiatarda with progressive arthropathy,SEDT-PA)致病型(1000T/C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(Wnt-induciblesecreted protein3,WISP3)的真核表达载体,... 目的:通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(spondyloepiphyseal dysplasiatarda with progressive arthropathy,SEDT-PA)致病型(1000T/C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(Wnt-induciblesecreted protein3,WISP3)的真核表达载体,并将其表达于真核表达系统COS-7细胞系,为研究WISP3突变致SEDT-PA的机制奠定基础。方法:从正常人软骨细胞获得野生型WISP3基因的全长cDNA(WT-WISP3);用定点突变方法构建携带WISP3基因致病型的重组真核表达质粒MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)和MUT840delT/pcDNA3.1(+);以空白载体pcDNA3.1(+)为对照,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞,48h后提取转染细胞的总RNA和总蛋白;半定量RT-PCR和免疫印迹方法检测WISP3基因的表达。结果:经测序证实,构建的野生型和突变型WISP3基因的全长cDNA序列分别与文献及前期报道的SEDT-PA患者WISP3基因突变类型一致;酶切鉴定证实,成功构建了3个重组真核表达质粒[WT-WISP3/pcDNA3.1(+),MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)及MUT840delT/pcDNA3.1(+)];半定量RT-PCR和免疫印迹示,重组质粒在COS-7细胞中均高效表达。结论:成功构建了SEDT-PA致病基因WISP3的突变体并在COS-7细胞中得到表达,为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造了条件。 展开更多
关键词 晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病 wnt诱导分泌蛋白3 突变体 定点突变
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SFRP3与肿瘤关系的研究进展
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作者 林亚英 张萍 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期272-275,294,共5页
Wnt信号通路在胚胎发育、组织内稳态及肿瘤发生和发展等生物学行为中发挥重要作用,许多因素影响Wnt信号的表达。分泌型卷曲相关蛋白(SFRPs)家族是重要的Wnt拮抗因子,它们在胞外与Wnt或其受体Fz结合抑制Wnt信号的传递。分泌型卷曲相关蛋... Wnt信号通路在胚胎发育、组织内稳态及肿瘤发生和发展等生物学行为中发挥重要作用,许多因素影响Wnt信号的表达。分泌型卷曲相关蛋白(SFRPs)家族是重要的Wnt拮抗因子,它们在胞外与Wnt或其受体Fz结合抑制Wnt信号的传递。分泌型卷曲相关蛋白3(SFRP3)作为最早发现的SFRPs成员,其启动子甲基化导致的沉默与恶性肿瘤的发生和发展密切相关,故SFRP3通常被认为是一种抑癌基因,SFRP3的基因多态性也被发现是部分恶性肿瘤的高危因素。该文就SFRP3与肿瘤关系的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 分泌型卷曲相关蛋白3 wnt信号通路 甲基化 多态性 肿瘤
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